Immunzytochemische Darstellung und biochemische Charakterisierung von Alzheimer-bA4-Amyloid-Vorläuferprotein in cerebellären Zellkulturen:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
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1992
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
LEINLEITUNG_.1
ILERGEBNISSE. U. G
1. GEWINNUNG POLYKLONALER ANTIKOERPER GEGEN APP_8
1.1. EXPRESSION UND AUFREINIGUNG VON FD-APP-FUSIONSPROTEIN AUS E.COLI_8
1.2. IMMUNISIERUNG MIT DEM AUFGEREINIGTEN ANTIGEN UND CHARAKTERISIERUNG
DER
GEWONNENEN
ANTIKOERPER.,.YY.M.MMM M M# MMM M MM W ^9
2. IDENTIFIZIERUNG VON APP IN PRIMAEREN ZELLKULTUREN-10
2.1. IMMUNZYTOCHEMISCHE DARSTELLUNG VON APP.1J
2.2. KOLOKALISATION VON APP MIT ANDEREN NEURONALEN ANTIGENEN.13
3. METABOLISCHE CHARACTERISIERUNG VON APP IN PRIMAEREN
ZELLKULTUREN_
10
3.1. ALTERNATIVES SPLEISSMUSTER.
3.2. IMMUNPRAEZIPITATION RADIOAKTIV MARKIERTER PROTEINE.-
3.3. UNTERSUCHUNG VON NEURONALEM APP IM PULSE-CHASE EXPERIMENT
3.4. BIOCHEMISCHE CHARAKTERISIERUNG VON NEURONALEM APP.
3.4. A). NACHWEIS VON N-GLUCOSYLIERUNGEN
3.4. B). NACHWEIS VON NEURAMINSAEURERESTEN
.16
.17
20
21
.21
YYYYYYYYYYYYYYYY
_21
3.4.C). VERSUCH, WEITERE POSTTRANSLATIONALE MODIFIKATIONEN
NACHZUWEISEN._.23
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
HTTP://D-NB.INFO/940538555
INHALTSVERZEICHNIS
4. NACHWEIS SEKRETORISCHER FORMEN VON APP IN NEURONALEN
ZELLKULTUREN_ 24
5. NACHWEIS C-TERMINALER FRAGMENTE_25
6. EINFLUSS DER NEUROGLIA AUF DIE APP-EXPRESSION IN NEURONEN.27
III.
DISKUSSION_28
1. NEURONEN ALS WICHTIGE QUELLE DER APP-SYNTHESE IM
ZENTRALNERVENSYSTEM
29
2. ZELLULAERE LOKALISATION VON APP IN NEURONEN_30
3. APP695 UND SEINE ROLLE IM ZUSAMMENHANG MIT NEURONALEN
DIFFERENZIERUNGSVORGAENGEN_
31
4. ENTWICKLUNGSABHAENGIGE REGULATION VON APP._.33
5. POSTTRANSLATIONALE MODIFIKATIONEN VON APP UND IHRE REGULATION IN
NEURONEN.
35
6. NEURAMINSAEURERESTE UND IHRE ROLLE BEI NEURONALEN
DIFFERENZIERUNGSVORGAENGEN_37
7. MOEGLICHE FUNKTIONELLE BEDEUTUNG DER AMYLOIDVORLAEUFERPROTEINE_38
8. SEKRETORISCHE FORMEN UND C-TERMINALE FRAGMENTE VON
NEURONALEM APP_39
INHALTSVERZEICHNIS
IV.
MATERIALIEN.41
1. PLASMID, BAKTERIENSTAMM UND BAKTERIENMEDIUM.41
2. LOESUNGEN UND PUFFER_
41
3. ZELLKULTURARTIKEL_
45
4. ANTIKOERPER_
46
6. CHEMIKALIEN_47
V. METHODEN_48
1. MIKROBIOLOGISCHE TECHNIKEN_48
1.1. EXPRESSION VON FD-APP695-FUSIONSPROTEIN IN
BAKTERIEN.48
1.1.1. TRANSFORMATION VON PLASMID-DNA IN BAKTERIEN_48
1.1.2. INDUKTION DER PROTEINSYNTHESE UND
ZELLEMTE.48
2. PROTEINAUFREINIGUNG_49
2.1. PRAEPARATION VON PROTEINEINSCHLUSSKOERPERN.49
2.2. SDS-PAGE (POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE)-.49
2.3. AUFREINIGUNG VON PROTEINEINSCHLUSSKOERPERN.-.JO
2.4. ELEKTROELUTION VON PROTEINEN NACH
HUNKAPILLER.-.50
2.5. WESSEL/FLUEGGE FAELLUNG VON
PROTEINEN.^.
J1
3. ANTIKOERPERGEWINNUNG.
,51
INHALTSVERZEICHNIS
3.1. IMMUNISIERUNG.
51
3.2. SERUMAUFARBEITUNG. .51
3.3. ELISA (ENZYME-LINKED-IMMUNOSORBENT-ASSAY).52
4.
ZELLKULTURTECHNIKEN.52
4.1. PRIMAERE ZELLKULTUREN VON CEREBELLAEREN ZELLEN AUS P6 MAEUSEN.52
4.2. METABOLISCHE, RADIOAKTIVE MARKIEUNG VON ZELLEN MIT
(35S)-L-METHIONIN.53
5. IMMUNFLUORESZENZ_ 54
6. DNA/RNA-METHODEN._54
6.1. ISOLIERUNG VON GESAMT-RNA DURCH DIE SAURE
PHENOL/GTC-METHODE.54
6.2. ENDMARKIERUNG DER OLIGONUKLEOTIDE DURCH T4-POLYNUKIEOTIDKINASE.55
6.3. POLYMERASE KETTENREAKTION AN CDNA (RT-PCR)_.55
6.3.1. CDNA
SYNTHESE._._._.56
6.3.2. PCR VON CDNA (RT-PCR)_56
6.4. AUTORADIOGRAPHIE VON GELEN.56
7.PROTEINANALYSE,
,57
7.1. DARSTELLUNG DES EXPRESSIONSMUSTERS IN
ZELLKULTUREN.57
7.1.1.
ZELLAUFSCHLUSS.-.-.-.57
7.1.2. IMMUNPRAEZIPITATION VON RADIOAKTIV MARKIERTEN
PROTEINEN.57
7.1.3. IMMUNPRAEZIPITATION VON NICHT RADIOAKTIV MARKIERTEN PROTEINEN.58
7.1.4. WESTERN
BLOT.-.-.-.58
7.1.5. FLUOROGRAPHIE/AUTORADIOGRAPHIE.-.-.-59
7.2. ENZYMATISCHE ABSPALTUMG VON NEURAMINSAEURERESTEN-59
INHALTSVERZEICHNIS
VL LITERATURVERZEICHNIS.60
VH. ABKUERZUNGEN. 68
VHI. ZUSAMMENFASSUNG. 69
IX. LEBENSLAUF,
,70 |
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