Isolierung und Charakterisierung eines monoklonalen Antikörpers gegen die Beta-Kette (P75) des humanen Interleukin-2-Rezeptors:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
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1993
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I
INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
1 EINLEITUNG
1.1 T-ZELLAKTI VIERUNG 1-2
1.2 STRUKTUR DES INTERLEUKIN-2-REZEPTORS 2-7
1.3 FUNKTION DES INTERLEUKIN-2-REZEPTORS 7-12
1.4 MONOKLONALE ANTIKOERPER GEGEN DEN INTERLEUKIN-2-REZEPTOR IN THERAPIE,
12-16
DIAGNOSE UND GRUNDLAGENFORSCHUNG
1.5 ZIELE DER ARBEIT 17
2 ERGEBNISSE
2.1 DARSTELLUNG DES ANTIGENS
2.1.1 COMPUTERGESTUETZTE ANALYSE DER SEKUNDAERSTRUKTUR DER 18 - 23
INTERLEUKIN-2-REZEPTOR-SS-KETTE
2.1.2 REINIGUNG DER IL-2RSS-PEPTIDE 23
2.1.3 UEBERPRUEFUNG DER PEPTIDZUSAMMENSETZUNG 23 - 24
2.1.4 BESTIMMUNG DER BELADUNGSDICHTE VON PEPTID/TRAEGER-KONJUGATEN 24 -
26
2.2 HERSTELLUNG VON ANTI-INTERLEUKIN-2-REZEPTOR-SS-KETTE-ANTIKOERPERN 26 -
29
2.3 CHARAKTERISIERUNG DER ANTI-INTERLEUKIN-2-REZEPTOR-SS-KETTE-ANTIKOERPER
2.3.1 BESTIMMUNG DER IMMUNGLOBULIN-KLASSE 30
2.3.2 AFFINITAETSCHROMATOGRAPHISCHE ANTIKOERPERREINIGUNG 30 - 33
2.3.3 NACHWEIS DER PEPTIDSPEZIFITAET DER ANTIKOERPER
2.3.3.1 ENTWICKLUNG DES PEPTIDSPEZIFISCHEN ELISA 33 - 39
2.3.3.2 NACHWEIS VON PEPTIDSPEZIFISCHEN ANTIKOERPERN MITTELS ELISA 40-44
2.3.3.3 NACHWEIS VON PEPTIDSPEZIFISCHEN ANTIKOERPERN MITTELS 45 - 49
BIOSPEZIFISCHER INTERAKTIONS-ANALYSE
2.3.4 NACHWEIS DER REZEPTORSPEZIFITAET DER ANTIKOERPER
2.3.4.1 HEMMUNG DER INTERLEUKIN-2-BINDUNG AN SEINEN REZEPTOR 50-52
DURCH IL-2RSS-SPEZIFISCHE ANTIKOERPER
2.3.4.2 HEMMUNG DER INTERLEUKIN-2-BINDUNG AN SEINEN REZEPTOR 53-54
DURCH KOMPETITION MIT IL-2R-SS-KETTE-PEPTIDEN
2.3.4.3 BINDUNG DER ANTIKOERPER AN DIE NATIVE SS-KETTE DES IL-2- 54-57
REZEPTORS
2.3.4.4 BINDUNG DER ANTIKOERPER AN DIE DENATURIERTE SS-KETTE DES 57 - 61
IL-2-REZEPTORS
2.4 VERSUCHE ZUR INDUKTION DER EXPRESSION DES INTERLEUKIN-2-REZEPTORS 61
- 74
3 DISKUSSION
3.1 AUSWAHL UND DARSTELLUNG DES ANTIGENS 75 - 78
3.2 HERSTELLUNG VON ANTI-INTERLEUKIN-2-REZEPTOR-SS-KETTE-ANTIKOERPEM 78-80
3.3 CHARAKTERISIERUNG DER ANTI-INTERLEUKIN-2-REZEPTOR-SS-KETTE-ANTIKOERPER
80-89
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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II
3.4 VERSUCHE ZUR INDUKTION DER EXPRESSION DES INTERLEUKIN-2-REZEPTORS
4 MATERIAL
4.1 CHEMIKALIEN UND REAGENZIEN
4.2 ANTIKOERPER
4.3 ZELLINIEN
4.4 VERBRAUCHSARTIKEL
4.5 GERAETE
5 METHODEN
5.1 COMPUTERGESTUETZTE ANALYSE DER SEKUNDAERSTRUKTUR DER INTERLEUKIN-2-
REZEPTOR-SS-KETTE
5.2 FESTPHASEN-PEPTIDSYNTHESE
5.3 PRAEPARATIVE UND ANALYTISCHE HOCHDRUCK-FLUESSIGKEITSCHROMATOGRAPHIE
5.4 QUANTITATIVE AMINOSAEUREANALYSE
5.5 PEPTID/TRAEGER-KOPPLUNG
5.6 TIERIMMUNISIERUNG
5.6.1 IMMUNISIERUNG DER MAEUSE
5.6.2 IMMUNISIERUNG DER KANINCHEN
5.7 HERSTELLUNG MONOKLONALER ANTIKOERPER
5.7.1 PRAEPARATION VON MAUS-PERITONEALMAKROPHAGEN
5.7.2 ZELLFUSION
5.7.3 SELEKTION UND KULTIVIERUNG DER HYBRIDOMZELLEN
5.7.4 KLONIERUNG DER HYBRIDOMZELLEN
5.8 HERSTELLUNG POLYKLONALER ANTISEREN
5.9 BESTIMMUNG DER IMMUNGLOBULIN-KLASSE MITTELS STAEBCHENTEST
5.10 ANTIKOERPERREINIGUNG MITTELS PROTEIN-G-SEPHAROSE
5.11 SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
5.12 QUANTITATIVE MAUS-IMMUNGLOBULIN-G-BESTIMMUNG MITTELS ELISA
5.13 PEPTIDSPEZIFISCHER ELISA
5.13.1 ENTWICKLUNG DES ELISA-TESTS
5.13.2 DURCHFUEHRUNG DES ELISA-TESTS
5.14 BIOSPEZIFISCHE INTERAKTIONS-ANALYSE
5.15 MESSUNG ZELLULAERER OBERFLAECHEN-IMMUNFLUORESZENZ MITTELS
DURCHFLUSSZYTOMETER
5.16 HEMMUNG DER INTERLEUKIN-2-ABHAENGIGEN PROLIFERATION VON LEKTIN
STIMULIERTEN PERIPHEREN BLUTLYMPHOZYTEN
5.17 IMMUNBLOT
5.18 STIMULATION UND KULTUR VON PERIPHEREN BLUTLYMPHOZYTEN
6 ZUSAMMENFASSUNG
7 LITERATURVERZEICHNIS
SEITE
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