Translationelle Kopplung im atp-Operon von Escherichia coli: der Mechanismus am Genpaar atpHA
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
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1993
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
1
1.1
DER
WEG
VOM
GEN
ZUM
PROTEIN
IN
PROKARYONTEN
1
1.1.1
DER
AULBAU
DAR
GENETISCHEN
INFORMATION
1
1.12
DER
ORT
DER
GENETISCHEN
INFORMATION
IN
PROKARYONTEN
1
1.1.3
DIE
TRANSKRIPTION
2
1.14
DIE
STABILITAET
PROKARYONTISCHER
RNA
3
1.1.5
DIE
TRANSLATION
5
1.1.5.1
DIE
INITIATION
DER
TRANSLATION
6
1.1.5.2
DIE
ELONGATION
9
1.1.5.3
DIE
TERMINATION
11
1.2
DIE
KONTROLLE
DER
GENEXPRESSION
11
1X1
MOEGLICHKEITEN
ZUR
KONTROLLE
DER
GENEXPRESSION
IN
PROKARYONTEN
11
1.2.2
DIE
TRANSKRIPTION
12
1.2.3
DIE
MRNA-STABLLITAET
12
124
DIE
TRANSLATION
13
1.24.1
DIE
INITIATION
14
1.2.4.2
DIE
ELONGATION
18
1.3
DIE
H*-ATPASE
VON
ESCHERICHIA
COLI
19
1.3.1
DER
AUFBAU
DES
ENZYMKOMPLEXES
19
1.32
DIE
FUNKTION
DER
VERSCHIEDENEN
UNTEREINHEITEN
21
1.4
PROBLEMSTELLUNG
UND
ZIELSETZUNG
DIESER
ARBEIT
23
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
26
2.1
GERAETE
26
2.2
CHEMIKALIEN
27
2.3
ENZYME
27
2.4
VERBRAUCHSMATERIAL
27
2.5
ALLGEMEINE
METHODEN
28
2.5.1
STERILISIEREN
28
2.52
PHENOLLSLEREN
28
2.5.3
BEHANDLUNG
VON
DIALYSESCHLAEUCHEN
28
2.5.4
HERSTELLUNG
VON
DEPC-WASSER
28
2.6
ARBEITEN
MIT
ESCHERICHIA
COLI
29
2.6.1
E.
CO/ASTAEMME
29
2.6.2
PLASMIDE
UND
OLLGONUKLEOTLDE
29
2.6.3
E.
COLAKULTURMEDLEN
31
2.64
KULTURBEDINGUNGEN
UND
LAGERUNG
32
2.6.5
TRANSFORMATION
VON
E.
COLI
32
2.6.5.1
TRANSFORMATION
VON
COLI
NACH
HANAHAN,
1983
32
2.6.5.1
TRANSFORMATION
VON
COLI
DURCH
ELEKTROPORATION
33
2.7
ARBEITEN
MIT
DNA
34
2.7.1
ANALYTISCHE
PLASDMLDLSOLLERUNG
34
2.7.2
PRAEPARATIVE
PLASMLDLSOLLERUNG
34
2.7.3
SPALTUNG
VON
DNA
MIT
RESTRIKTLONSENDONUKLEASEN
35
2.7.4
DEPHOSPHORYLIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
36
2.7.5
PHOSPHORYLIERUNG
VON
OLLGONUKLEOTIDEN
36
2.7.6
LLGATION
VON
DNA-FRAGMENTEN
36
2.7.7
AGAROSEGELELEKTROPHORESE
37
2.7.8
ISOLIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
37
2.7.8.1
ISOLIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
DURCH
ELEKTROELUTION
37
2.7.8.2
ISOLIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
MIT
DEM
GENE
CLEAN
N
IL-KIT
(FUER
DNA-FRAGMENTE
500
BP)
38
2.7.8.3
ISOLIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
MIT
DEM
MERMAID
R
-KIT
(FUER
DNA-FRAGMENTE
500
BP)
38
2.7.9
SEQUENZIERUNG
VON
DNA
39
2.7.10
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
DNA
41
2.7.10.1
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
DOPPELSTRAENGIGEN
DNA-FRAGMENTEN
41
2.7.10.2
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
OLLGONUKLEOTIDEN
41
2.7.11
IN
V/FRO-MUTAGENESE
42
2.7.12
AUFFUELLUNG
UEBERSTEHENDER
5'-ENDEN
VON
DNA-FRAGMENTEN
43
2.7.13
BEHANDLUNG
VON
DNA
MIT
MUNG
BEAN-NUKLEASE
43
2.7.14
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
AE/HIND
ILL-GESCHNLTTENEM
STANDARD
FUER
RNA-AGAROSEGELE
43
2.7.15
POLYMERASE-KETTENREAKTION
(PCR)
44
2.8
ARBEITEN
MIT
RNA
45
2.8.1
RNA-PRFIPARATION
45
2.8.2
RNA-AGAROSEGELELEKTROPHORESE
46
2.8.3
NORTHERN
BLOT
46
2.8.4
DOT
BLOT
47
2.8.4.1
BEHANDLUNG
DER
RNA
MIT
RNASE-FREIER
DNASE
47
2.S.4.2
VERDUENNUNGSREIHE
UND
DENATURIERUNG
DER
RNA
47
2.8.4.3
DOT
BLOT
47
2.8.5
HYBRIDISIERUNG
48
2.9
SDS-PROTELNGEL-ELEKTROPHORESE
48
2.9.1
LAEMMLL-GEL
48
2.9.2
SCHAEGGER-GEL
49
2.9.3
ELEKTROPHORESE
49
2.9.4
FLUOROGRAPHLE
50
2.10
EXPRESSIONSVERSUCHE
SO
2.10.1
IN
VIVO
PULSE
CHASE
50
2.10.2
IN
VITRO
TRANSLATION
51
2.10.3
SS-GALAKTOSIDASE-ASSAY
52
3.
DURCHFUEHRUNG
UND
ERGEBNISSE
55
3.1
UNTERSUCHUNG
MOEGLICHER
TRANS-EFFEKTE
55
3.1.1
PLASMLDKONSTRUKTLONEN
UND
CHROMOSOMALE
INTEGRATION
55
3.1.1.1
/ACZ-FUSIONSVEKTOREN
55
3.1.1.2
ATP-GEN-EXPRESSIONSVEKTOREN
56
3.1.2
BESTIMMUNG
DER
EXPRESSIONSRATEN
DURCH
MESSUNG
DER
SS-GALAKTOSIDASE-AKTLVITAETEN
57
3.1.3
UEBERPRUEFUNG
DER
EXPRESSION
AUF
DER
PROTEINEBENE
62
3.1.3.1
EXPRESSION
DER
ATP/.LAOZ-FUSIONEN
62
3.1.3.2
EXPRESSION
DER
PBI-KODIERTEN
H*-ATPASE-UNTEREINHEITEN
63
3.2
GEZIELTE
MUTATIONEN
UND
DELETIONEN
DER
AFPHA-SEQUENZ
UND
DEREN
AUSWIRKUNGEN
AUF
DIE
EXPRESSIONSRATE
63
3.2.1
AFPH4:.-/ACZ-DERIVATE
MIT
NORMALER
SD-SEQUENZ
63
3.2.1.1
KONSTRUKTION
DER
PLASMIDE
64
3.2.1.2
BERECHNUNG
DER
MRNA-SEKUNDAERSTRUKTUREN
MIT
DEM
COMPUTER
70
3.2.1.3
BESTIMMUNG
DER
DER
TRANSLATIONSRATEN
DURCH
MESSUNG
DER
SS-GALAKTOSIDASE
AKTIVITAETEN
71
3.2.1.4
UEBERPRUEFUNG
DER
MRNA-MENGEN
DURCH
NORTHERN
BLOTS
UND
DOT
BLOTS
78
3.2.2
ATPHA(M3)::LACZ-DORIVAT
MIT
ASD-SAQUENZ
/
SPEZIALISIERTE
RIBOSOMEN
81
3.2.2.1
EXPERIMENTELLES
SYSTEM
81
3.2.2.2
KONSTRUKTION
DER
PLASMIDE
82
3.2.2.3
BESTIMMUNG
DER
EXPRESSIONSRATEN
DURCH
MESSUNG
DER
SS-GALAKTOSIDASE*
AKTIVITAETEN
85
3.2.2.4
UEBERPRUEFUNG
DER
MRNA-MENGEN
DURCH
DOT
BLOTS
87
3.2.3
VERSUCHE
ZUR
ANTLSENSE-RNA-KONTROLLE
DER
AFPH-TRANSLATLON
87
3.2.3.1
KONTROLLE
DER
TRANSLATION
DURCH
ANTISENSE-RNA
87
3.2.3.2
ANTISENSE-KONTROLLE
DER
ATPI+TRANSLATION
UNTER
VERWENDUNG
DES
ISIO-SYSTEMS
88
3.2.3.3
KONSTRUKTION
DER
PLASMIDE
91
3.2.3.4
BESTIMMUNG
DER
EXPRESSIONSRATEN
BEI
VERSCHIEDENEN
IPTG-KONZENTRATLONEN
DURCH
MESSUNG
DER
SS-GALAKTOSIDASE-AKTIVITAETEN
91
3.2.3.5
UEBERPRUEFUNG
DER
RNA-OUT-MENGEN
DURCH
DOT
BLOTS
93
3.3
VERRINGERUNG
DER
MRNA-SEKUNDAERSTRUKTUR
IN
DER
INTERCISTRONI*
SEHEN
SEQUENZ
DES
GENPAARS
ATPAG
UND
DEREN
AUSWIRKUNGEN
AUF
DIE
EXPRESSIONSRATE
95
4.
DISKUSSION
97
4.1
PRUEFUNG
AUF
FRANS-EFFEKTE
97
4.2
WELCHER
MECHANISMUS
LIEGT
DER
TRANSLATIONELLEN
KOPPLUNG
ZWISCHEN
ATPH
UND
ATPA
ZUGRUNDE?
100
4.2.1
MUTATIONEN
UND
DELETIONEN
IN
DER
AFPHA-SEQUENZ
105
4.2.2
DAS
SYSTEM
AUS
ASD-SEQUENZEN
UND
SPEZIALISIERTEN
RIBOSOMEN
110
4.2.3
DIE
ANTISENSE-KONTROLLE
DER
AFPH-TRANSLATLON
111
4.3
WEITERFUEHRENDE
VERSUCHE
114
4.3.1
DER
EINFLUSS
DER
MUTATIONEN
M1
BIS
M4
AUF
DIE
TRANSLATIONELLE
KOPPLUNG
114
4.3.2
DIE
TRANSLATION
DER
ASD-KONSTRUKTE
DURCH
SPEZIALISIERTE
RIBOSOMEN
114
4.3.3
DIE
ANTISENSE-KONTROLLE
DER
AFPH-TRANSLATLON
115
5.
LITERATURVERZEICHNIS
6.
ZUSAMMENFASSUNG/SUMMARY
7.
ABKUERZUNGEN
LEBENSLAUF
DANKSAGUNGEN |
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| spelling | Rex, Gundula Verfasser aut Translationelle Kopplung im atp-Operon von Escherichia coli der Mechanismus am Genpaar atpHA von Gundula Rex 1993 115 S. graph. Darst. txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Braunschweig, Univ., Diss., 1993 Escherichia coli - Operon - Wasserstoff-ATPase - Untereinheit - Translation <Genetik> - Regulation Translation Genetik (DE-588)4185909-1 gnd rswk-swf Operon (DE-588)4210146-3 gnd rswk-swf Untereinheit (DE-588)4335882-2 gnd rswk-swf Regulation (DE-588)4049075-0 gnd rswk-swf Escherichia coli (DE-588)4070959-0 gnd rswk-swf Wasserstoff-ATPase (DE-588)4358904-2 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Escherichia coli (DE-588)4070959-0 s Operon (DE-588)4210146-3 s Wasserstoff-ATPase (DE-588)4358904-2 s Untereinheit (DE-588)4335882-2 s Translation Genetik (DE-588)4185909-1 s Regulation (DE-588)4049075-0 s DE-604 DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=006163621&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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