Untersuchungen zum Polymorphismus der Klasse-II-Gene des major histocompatibility-Komplexes des Rindes:
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1993
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I
INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
1
EINLEITUNG
1
2
LITERATURUEBERSICHT
3
3
MATERIAL
UND
METHODEN
14
3.1
MATERIAL
14
3.1.1
BLUTPROBEN
14
3.1.2
VEKTOREN
14
3.1.3
OLIGONUCLEOTIDE
14
3.1.4
KITS
15
3.1.5
NAEHRMEDIEN
15
3.1.6
LOESUNGEN
15
3.1.7
PUFFER
16
3.1.8
ENZYME
18
3.1.9
DNA-LAENGENSTANDARDS
19
32
METHODEN
21
3.2.1
DNA-EXTRAKTION
AUS
VOLLBLUT
21
3.2.2
SPEKTRALPHOTOMETRISCHE
BESTIMMUNG
DES
DNA-GEHALTES
23
3.2.3
ELEKTROPHORESE
VON
DNA
UNTER
VERWENDUNG
ANALYTISCHER
ODER
24
PRAEPARATIVER
AGAROSE-GELE
3.2.4
ELUTION
VON
DNA-FRAGMENTEN
AUS
AGAROSE-GELEN
25
3.2.4.1
ELUTION
UNTER
VERWENDUNG
EINES
LOW-MELTING-POINT-AGAROSE-GELES
25
32.42
ELUTION
UNTER
VERWENDUNG
DES
UV
BAND-ELUTORS
26
32.5
ETHANOLFAELLUNG
27
3.2.6
DNA-AMPLIFIKATION
DURCH
DIE
POLYMERASE-KETTENREAKTION
(PCR)
27
3.2.7
KLONIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
IN
PLASMID-VEKTOREN
29
3.2.7.1
RESTRIKTIONSVERDAU
VON
DNA
30
3.2.7.2
LIGATION
EINES
DNA-FRAGMENTES
IN
EIN
PLASMID
31
32.7.3
HERSTELLUNG
TRANSFORMATIONSKOMPETENTER
ECOZI-ZELLEN
31
(NACH
HANAHAN)
32.7.4
TRANSFORMATION
KOMPETENTER
E.COZZ-ZELLEN
33
3.2.8
MINIPRAEPARATION
VON
PLASMID-DNA
34
3.2.9
HERSTELLUNG
UND
AUFREINIGUNG
VON
OLIGONUCLEOTIDEN
35
3.2.10
DNA-SEQUENZANALYSE
36
3.2.10.1
SEQUENZIERREAKTION
NACH
KLONIERUNG
37
3.2.10.2
DIREKTSEQUENZIERUNG
VON
PCR-AMPLIFIKATEN
37
3.2.10.3
DENATURIERENDE
POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
39
3.2.11
TEMPERATUR-GRADIENTEN-GELELEKTROPHORESEFTGGE)
40
4
ERGEBNISSE
43
4.1
PCR-AMPLIFIKATION
UND
SEQUENZANALYSE
BOVINER
DRB3-ALLELE
43
4.1.1
PCR-AMPLIFIKATION
DES
2.
EXONS
DES
BOVINEN
DRB3-GENES
43
4.12
KLONIERUNG
UND
SEQUENZIERUNG;
DIREKTSEQUENZIERUNG
43
4.1.3
IDENTIFIZIERUNG
DER
DRB3-ALLELE
45
UE
SEITE
4.1.4
ERMITTLUNG
DER
AMINOSAEURESEQUENZEN
DER
GENPRODUKTE
DER
IDENTIFIZIERTEN
DRB3-ALLELE
51
4.1.5
ERGEBNISSE
DER
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
HETERO-UND
HOMOZYGOTIE
51
4.1.6
ERGEBNISSE
DER
UNTERSUCHUNGEN
ZU
DEN
VERWANDTSCHAFTS
53
VERHAELTNISSEN
DER
FUENF
N'DAMAS
4.1.7
VERGLEICH
NEUER
UND
BEKANNTER
ALLELE
53
4.2
PCR-AMPLIFIKATION
UND
SEQUENZANALYSE
BOVINER
DQB-ALLELE
63
4.2.1
PCR-AMPLIFIKATION
DES
2.
EXONS
BOVINER
DQB-GENE
63
4.2.2
KLONIERUNG
UND
SEQUENZIERUNG
64
4.2.3
IDENTIFIZIERUNG
NEUER
DQB-ALLELE
UND
VERGLEICH
MIT
65
BEKANNTEN
DQB-ALLELEN
4.3
PCR-AMPLIFIKATION
BOVINER
DYA-UND
DQA-GENE
70
4.3.1
PCR-AMPLIFIKATION
DES
2.
EXONS
DES
BOVINEN
DYA-GENES
71
4.3.2
UNTERSUCHUNG
DES
DYA-POLYMORPHISMUS
MIT
HILFE
DER
TGGE
71
4.3.3
PCR-AMPLIFIKATION
DES
2.
EXONS
DES
BOVINEN
DQA-GENES
72
5
DISKUSSION
74
5.1
ZU
DEN
EINGESETZTEN
METHODEN
74
5.1.1
DNA-SEQUENZIERUNG
74
5.1.2
KLONIERUNG,
DIREKTSEQUENZIERUNG,
TGGE
77
5.1.3
POLYMERASE-KETTENREAKTION
(PCR)
79
5.2
PRIMERENTWURF
82
5.3
ZU
DEN
NEUEN
ALLELEN
84
6
ZUSAMMENFASSUNG
87
7
SUMMARY
88
8
ANHANG
89
8.1
ABKUERZUNGEN
89
8.2
STANDARD-EIN-BUCHSTABEN-CODE
90
8.3
CHEMIKALIEN
UND
IHRE
HERSTELLER
90
9
LITERATURVERZEICHNIS
92 |
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