Synthese und Degradierung von Hyaluronat durch die Synovia von Patienten mit rheumatischer Arthritis:
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1993
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INHALTSVERZEICHNIS
KAPITEL
L EINLEITUNG
SEITE
1
.
1
.
1
.
1.1
1
.
1.2
1.1.3
1.2
1.3
1.3.1
1.3.2
1.4.1
1.4.2
L.S
1.5.1
1.5.2
1.5.2.1
1.5.2.2
1.5.2.2.1
1.5.2.2.2
CHRONISCHE POLYARTHRITIS: DEFINITION UND KLINISCHE
ASPEKTE
GESELLSCHAFTLICHE BEDEUTUNG DER CHRONISCHE POLY-
ARTHITIS
AETIOLOGIE DER CHRONISCHEN POLYARTHRITIS
MOEGLICHKEITEN DER THERAPIE
ANATOMIE, HISTOLOGIE UND ZYTOLOGISCHE ASPEKTE
DES GESUNDEN GELENKES
PATHOLOGIE DES CHRONISCH POLYARTHRITISCHEN GELENKES
HISTOPATHOLOGISCHE VERAENDERUNGEN
DER ENTZUENDUNGSPROZESS
CHEMISCHE UND PHYSIKALISCHE STRUKTUR VON
HYALURONAT
PHYSIOLOGISCHE UND TELLBIOLOGISCHE FUNKTIONEN
VON HYALURONAT
PATHOBIOCHEMIE DES SYNOVIALEN HYALURONATS
FOLGEN DER HYALURONATMODIFIZIERUNG
URSACHEN DER HYALURONATMODIFIZIERUNG
VERAENDERUNGEN DES SYNTHESEMECHANISMUS VON
HYALURONAT BEI DER CHRONISCHEN POLYARTHRITIS
DEGRADIERUNG VON SYNOVIALEM HYALURONAT
ENZYMATISCHE DEGRADIERUNG
DEGRADIERUNG VON HYALURONAT DURCH REAKTIVE
SAUERSTOFFSPEZIES
5
S
8
11
12
14
15
19
20
21
21
22
23
24
25
ZIELSETZUNG DIESER ARBEIT
MATERIAL UND METHODEN
ZELLKULTUR
KULTIVIERUNG VON SYNOVIALZELLEN
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
HTTP://D-NB.INFO/940205459
3.2
3.3
3.4
3.5
3.6
3.6.1
3.6.2
3.6.2.1
3.6.2.2
3.7
3.8.
3.8.1
3.8.2
3.9
3.9.1
3.9.2
3.10
3.11
3.11.1
3.11.2
3.12
3.12.1
PRAEPARATION DER SYNOVIALMEMBRAN
DISSOZIIERUNG DES SYNOVIALMEMBRANGEWEBES UND
ISOLIERUNG DER SYNOVIALZELLEN
ISOLIERUNG DER POLYMORPHONUCLEAREN (PMN) UND
MONONUKLEARER LEUKOZYTEN AUS DER SYNOVIALFLUESSIG-
KEIT
ANREICHERUNG VON BLUT-LEUKOZYTEN UND BLUT-LYMPHO
ZYTEN AUS PATIENTENBLUT
ISOPYKNISCHE TRENNUNG VON ZELLPOPULATIONEN
PERCOLL
FICOLL-HYPAQUE
TRENNUNG VON BLUT-GRANULOZYTEN UND -MONOZYTEN
(MODIFIZIERT NACH:
BEYUM , A., 1984 )
TRENNUNG VON SYNOVIALMEMBRANZELLEN UND ZELLEN
AUS DER SYNOVIA
TRENNUNG NACH ADHAERENZVERHALTEN AN PLASTIK
(MODIFIZIERT NACH:
ABRAHAMSON ET AL. 1986 )
MAGNETTRENNUNG VON PHAGOZYTEN UND NICHT PHAGO-
ZYTIERENDEN ZELLEN
SYNOVIALMEMBRANZELLEN
ZELLEN AUS DER SYNOVIALFLIISSIGKEIT
LICHTMIKROSKOPISCHE DARSTELLUNG VON SYNOVIALZELLEN
PHAGOZYTOSE VON TUSCHEPARTIKELN UND SUPRA
VITALFAERBUNG MIT DEM VITALFARBSTOFF TOLUIDINBLAU
FAERBUNG SCHNELL ADHAERIERENDER SYNOVIALMEMBRANZELLEN
MIT MONOKLONALEN MAUS-ANTI-MENSCH MAKROPHAGEN
(CD 68) ANTIKOERPERN UND DER APAAP-METHODE
(ALKALISCHE PHOSPHATASE-ANTI-ALKALISCHE PHASPHATASE)
HYALURONATSYNTHESE UNTERSCHIEDLICHER SYNOVIAL
MEMBRANZELLEN
NACHWEIS VON SAUERSTOFFRADIKALEN IN ZELL- UND GE
WEBEKULTUREN MIT DEM EISEN-CYTOCHROM C TEST
BESTIMMUNG VON SUPEROXID IN DER GEWEBEKULTUR
ZELLKULTUR
DARSTELLUNG VON HYALURONAT: METABOLISCHE MARKIER
UNGEN IN ZELL- UND GEWEBEKULTUREN
MARKIERUNG VON ZELLEN IN KULTUR
3.12.2
3.13
3.14
3.15
3.16
3.17
3.18
3.18.1
3.18.2
3.18.3
3.18.4
3.18.4.1
3.18.4.2
3.19
3.20
3.21
3.21.1.
3.21.2
3.22
3.23
3.23.1
3.24
3.24.1
3.24.2
3.24.3
3.24.4
MARKIERUNG VON SYNOVIALGEWEBE IN KULTUR
GEWEBEEXTRAKTION MIT GUANIDINIUM CHLORID
ETHANOLPRAEZIPITATION
PRONASE E ABBAU
SYNTHESE VON STREPTOKOKKEN-[
14CL-HYALURONAT
HERSTELLUNG VON [3H]-MARKIERTEM HYALURONAT
HYALURONATISOLATION AN ANIONENAUSTAUSCHERMATRIZES
ANIONENAUSTAUSCHER-CHROMATOGRAPHIE: (DEAE)-
-SEPHACEL
QUALITAET DER HYALURONAT-ANREICHERUNG AN DEAE-
-SEPHACEL UND DEAE-SEPHACRYL S-1000
SYNTHESE VON DEAE-SEPACRYL S-1000
BINDUNGSKAPAZITAET UNTERSCHIEDLICHER ANIONENAUS
TAUSCHERMATRIZES UND HYALURONATANREICHERUNG
TITRATIONSKURVEN ZU DEAE-SEPHACEL, DEAE-SEPHA
CRYL 1000
HYALURONATANREICHERUNG
CETYLPYRIDINIUM CHLORID-(CPC)-PRAEZIPITATION VON
HYALURONAT
IDENTIFIZIERUNG DES HYALURONATS
PROBENENTSALZUNG UND GROB-FRAKTIONIERUNG
DIALYSE
GELCHROMATOGRAPHIE AN PD 10 SAEULEN (PHARMACIA)
ANALYSE DES HYALURONATS DURCH GELFILTRATION
DEGRADIERUNG UND DISSOZIATION VON ENDOGENEM
HYALURONAT
SYNTHESE VON PERJODAT OXIDIERTEM UDP-GLUCURONAT
(O-UDP-GLUCURONAT)
NACHWEIS DER ADSORPTION, AUFNAHME, EXOZYTOSE UND
EXTRAZELLULAEREN DEGRADIERUNG VON EXOGENEM HYALU
RONAT DURCH SCHNELL ADHAERIERENDE SYNOVIALMEMBRAN
ZELLEN
ADSORPTION VON HYALURONAT AN DER ZELLMEMBRAN
AUFNAHME VON EXOGENEM HYALURONAT
EXOZYTOSE UND EXTRAZELLULAERE DEGRADIERUNG VON
HYALURONAT
NACHWEIS EXTRAZELLULAERER HYALURONIDASE-AKTIVITAET IN
KULTUREN SCHNELL ADHAERIERENDER SYNOVIALMEMBRAN
ZELLEN
3.25 GERAETE UND MATERIALIEN 57
3.25.1 GERATE 57
3.25.1 MATERIALIEN 57
4. ERGEBNISSE 61
4.1
4.1.1
4.1.1.1
4.1.1.2
4.1.1.3
4.1.2
4.2
4.2.1
4.2.1.1.
4.2.1.2
4.3. '
4.3.1
4.3.1.1
4.3.1.2
4.3.1.3
4.3.1.3.1
4.3.2
METHODENENTWICKLUNG ZUR ISOLATION VON HYALURONAT
ISOLIERUNG UND DARSTELLUNG VON HYALURONAT
DEAE-SEPHACEL CHROMATOGRAPHIE UND IDENTIFIZIERUNG
VON HYALURONAT
QUALITAET DER CHROMATOGRAPHISCHEN HYALURONATTREN-
NUNG AN DEAE-SEPHACEL
VERGLEICH DER ELUTIONSPROFILE FUER HYALURONAT AN
DEAE-SEPHACEL UND DEAE-SEPHACRYL 1000
CETYLPYRIDINIUM CHLORID PRAEZIPITATION VON HYALURONAT
NIEDERMOLEKULARES HYALURONAT IN RHEUMATISCH ARTHRI-
TISCHEN SYNOVIALMEMBRANGEWEBE- UND SYNOVIALMEM-
BRANZELLKULUREN
GELCHROMATOGRAPHISCHE DARSTELLUNG VON NORMALEM UND
PATHOLOGISCHEM HYALURONAT
SYNOVIALMEMBRANEN IN GEWEBEKULTUREN
HYALURONAT AUS LANGZEITKULTUREN VON SYNOVIALMEM
BRANZELLEN
ISOLIERUNG VON UNTERSCHIEDLICHEN SYNOVIALMEMBRAN
ZELLEN
ZELLTRENNUNG: PHAGOZYTOSE- UND ADHAERENZVERHALTEN
PHAGOZYOSE
ADHAERENZ
LICHTMIKROSKOPISCHE DARSTELLUNGVON ISOLIERTEN
SYNOVIALZELLEN
PHAGOZYTOSE VON TUSCHEPARTIKELN UND SUPRA
VITALFAERBUNG MIT TOLUIDINBLAU
MARKIERUNG VON ISOLIERTEN MAKROPHAGENARTIGEN
SYNOVIALMEMBRANZELLEN UND MONOZYTEN MIT EBM-11
(MONOKLONALER MAUS-ANTI-HUMAN ANTIKOERPER, CD 68)
64
64
64
66
71
73
75
75
75
77
79
79
79
82
83
83
85
4.4
4.4.1
4.5
4.5.1
4.5.1.1
4.5.1.2
4.5.1.3
4.5.2
4.5.3
4.6
4.6.1
4.6.1.1
4.6.1.2
4.6.2
4.6.2.1
4.6.3.
4
.
6
.
3.1
HYALURONATSYNTHESELEISTUNG VERSCHIEDENER
SYNOVIAL- 87
MEMBRANZELLEN
HYALURONAT PRODUZIERENDE SYNOVIOZYTEN 87
PRODUKTION VON NIEDERMOLEKULAREM HYALURONAT IN 88
RHEUMATISCH ARTHRITISCHEN SYNOVIALGEWEBEKULTUREN
DURCH DISSOZIATION ODER DEGRADATION
POSTSYNTHETISCHE HYALURONATDEGRADIERUNG ODER 88
SYNTHESE VON NIEDERMOLEKULAREM HYALURONAT
DARSTELLUNG VON METABOLISCH [3H]-MARKIERTEM HY- 90
LURONAT AUS KULTUREN LANGSAM ADHERIERENDER SYNOVIAL
MEMBRANZELLEN
DARSTELLUNG VON [
3H]-MARKIERTEM HYALURONAT AUS 92
RHEUMATISCH ARTHRITISCHEN SYNOVIALGEWEBEKULTUREN
DARSTELLUNG VON FREIEM UND GEWEBEGEBUNDENEM 94
[3HL-HYALURONAT AUS RHEUMATISCH ARTHRITISCHEN
SYNOVIALGEWEBEKULTUREN
ABGABE VON HYALURONAT NACH BLOCKIERUNG DER 96
SYNTHESE
DEGRADIERUNG VON HYALURONAT DURCH SYNOVIALMEM- 99
BRANZELLEN UND ZELLEN AUS DER SYNOVIALFLUSSIGKEIT
ZUR NATUR DER HYALURONATDEGRADIERUNG DURCH 104
SYNOVIALMEMBRANZELLEN
POTENTIELL HYALURONAT DEGRADIERENDE AKTIVITAETEN 104
INTERNALISIERUNG UND DEGRADIERUNG VON EXOGENEM 105
HYALURONAT DURCH EXTRA- ODER INTRAZELLULAERE ENZYMA
TISCHE AKTIVITAETEN
EXOZYTOSE VON NIEDERMOLEKULAREM HYALURONAT UND 109
EXTRAZELLULAERE ENZYMATISCHE HYALURONATDEGRADIERUNG
HYALURONATDEGRADIERUNG DURCH FREIE SAUERSTOFF- 112
RADIKALE
RADIKALPRODUKTION DURCH INTAKTES SYNOVIALGEWEBE 113
UND SYNOVIALMEMBRANZELLEN
EINFLUSS UNTERSCHIEDLICHER ANTIOXIDANTIEN AUF DIE 117
DEGRADIERUNG VON HYALURONAT IN ZELL- UND GEWEBE
KULTUREN
EINFLUSS VON A-TOCOPHEROL AUF DIE DEGRADIERUNG VON 117
HYALRONAT
4.6.3.2
4.6.3.3
4.6.3.4
4.6.3.5
5.
5.1
5.2
5.3
5.4
5.5
5.6
6
.
7.
8.
EINFLUSS VON DIPHENYLENJODONIUM (DPI) UND FORMYL-
METHIONYL-LEUCYL-PHENYLALANIN (FMLP) AUF DIE DEGRA
DIERUNG DES HYALURONATS
EINFLUSS VON SALICYLAT AUF DIE DEGRADIERUNG VON
HYALURONAT IN SYNOVIALGEWEBEKULTUREN
EINFLUSS VON SALICYLAT AUF DIE DEGRADIERUNG VON HY
ALURONAT IN GEWEBEKULTUR IN ABHAENGIGKEIT VON FMLP
HEMMUNG DER HYALURONATDEGRADIERUNG DURCH
DETAPAC, METHIONIN, SUPEROXIDDISMUTASE UND
CATALASE
DISKUSSION
METHODENENTWICKLUNG ZUR ISOLATION VON HYALURONAT
NIEDERMOLEKULARES HYALURONAT IN RHEUMATISCH
ARTHRITISCHEN SYNOVIALMEMBRANGEWEBE- UND SYNOVIAL
MEMBRANZELLKULTUREN
ISOLIERUNG UND IDENTIFIZIERUNG VON SYNOVIALMEMBRAN
ZELLEN
HYALURONATSYNTHESELEISTUNG VERSCHIEDENER SYNOVIAL
MEMBRANZELLEN
PRODUKTION NIEDERMOLEKULAREN HYALURONATS IN
RHEUMATISCH ARTHRITISCHEN SYNOVIALGEWEBEKULTUREN
DURCH DISSOZIATION ODER DEGRADATION
ZUR NATUR DER HYALURONATDEGRADIERUNG DURCH SYNOVIAL'
MEMBRANZELLEN
ZUSAMMENFASSUNG
LITERATUVERZEICHNIS
DANKSAGUNG
119
122
124
127
129
130
132
134
137
137
- 142
151
153
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