Herstellung von Antikörpern gegen Dystrophin und immunhistochemische Colokalisation in Muskulatur und Endothelzellen:
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1992
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-I
INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
1
1.1
1.2
13
1.4
1.5
DAS
MEMBRANZYTOSKELETT
1
SPECTRIN
2
A-ACTININ
3
DYSTROPHIN
4
PROBLEMSTELLUNG
8
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
9
2.1
2.2
2.3
2.3.1
2.3.1.1
2.3.1.2
2.3.1.3
2.3.1.4
2.3.1.5
2.3.1.5.1
2.3.1.5.2
2.3.2
2.3.2.1
23.2.2
23.2.3
23.2.4
23.2.5
23.2.6
23.2.6.1
23.2.6.2
23.2.7
23.2.8
23.2.9
MATERIALIEN
UND
HERSTELLER
9
HAEUFIG
VERWENDETE
LOESUNGEN
UND
PUFFER
13
METHODEN
15
HERSTELLUNG
VON
PEPTIDEN
ZUR
ANTIKOERPERPRODUKTION
15
PEPTIDSYNTHESE
15
ABSPALTUNG
DES
PEPTIDS
VON
DER
MATRIX.
17
REINHEITSBESTIMMUNG
DES
ROHPEPTIDS
17
HYDROLYSE
DES
PEPTIDS
UND
DUENNSCHICHTCHROMATOGRAPHIE.
18
KOVALENTE
VERKNUEPFUNG
DER
PEPTIDE
AN
TRAEGERPROTEINE
18
VERKNUEPFUNG
MIT
KEYHOLE
LIMPET
HAEMOCYANIN
18
VERKNUEPFUNG
MIT
OVALBUMIN
UND
RINDERSERUMALBUMIN
19
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
20
KLONIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
20
BAKTERIENKULTUREN
21
HERSTELLUNG
EINER
BAKTERIEN-GLYCERINKULTUR
22
HERSTELLUNG
TRANSFORMATIONSKOMPETENTER
ZELLEN
22
TRANSFORMATION
KOMPETENTER
BAKTERIEN
MIT
PLASMID-DNA
23
PRAEPARATION
VON
PLASMID-DNA
23
MINIPRAEPARATION
23
MAXIPRAEPARATION
24
BESTIMMUNG
DER
DNA-KONZENTRATION
25
RESTRIKTIONSVERDAU
25
AGAROSEGELELEKTROPHORESE
ZUR
AUFTRENNUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
25
-N
2.3.2.10
INSERT-ISOLIERUNG
26
2.3.2.11
KLENOW-AUFFUELL-REAKTION
26
2.3.2.12
LIGATION
27
23.2.13
EXPRESSION
DES
FUSIONSPROTEINS
27
2.3.2.14
ISOLIERUNG
DES
FUSIONSPROTEINS
28
23.3
HERSTELLUNG
UND
REINIGUNG
VON
ANTIKOERPERN
28
2.33.1
IMMUNISIERUNG
28
2.33.2
AFFINITAETSREINIGUNG
VON
ANTIKOERPERN
28
23.3.2.1
AFFINITAETSREINIGUNG
AN
NITROZELLULOSE
29
23.3.2.2
AFFINITAETSREINIGUNG
AN
AFFI-GEL
15
29
23.4
ANREICHERUNG
VON
DYSTROPHIN
AUS
MUSKELPROTEINEN
29
2.3.5
ISOLIERUNG
VON
HIRNKAPILLAREN
30
23.6
PROTEINBESTIMMUNGSMETHODEN
31
2.3.6.1
PROTEINBESTIMMUNG
NACH
BRADFORD
31
23.63
PROTEINBESTIMMUNG
NACH
LOWRY
31
2.3.7
BIOCHEMISCHE
METHODEN
32
23.7.1
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
32
23.7.1.1
DURCHFUEHRUNG
DER
ELEKTROPHORESE
32
23.7.1.2
FAERBUNG
DER
PROTEINGELE
32
23.7.2
ELEKTROTRANSFER
VON
PROTEINEN
AUF
NITROZELLULOSE
32
23.73
IMMUNREPLIK-ANALYSE
32
23.8
IMMUNZYTOCHEMIE
33
23.8.1
GEWEBEPRAEPARATION
FUER
IMMUNFAERBUNG
33
23.8.2
IMMUNFAERBUNG
DER
KRYOSTATSCHNITTE
33
2.3.83
DOPPELFLUORESZENZTECHNIK
34
23.8.4
ELEKTRONENMIKROSKOPIE
34
3.
ERGEBNISSE
36
3.1
PEPTIDSYNTHESE
36
33
FUSIONSPROTEINEXPRESSION
38
33
IMMUNISIERUNG
42
3.4
POLYKLONALE
ANTIKOERPER
42
33
ANREICHERUNG
VON
DYSTROPHIN
43
3.6
IMMUMREPLIKANALYSE
44
3.7
IMMUNZYTOCHEMIE
47
3.8
ISOLIERUNG
VON
KAPILLAREN
62
-NI
64
4.
DISKUSSION
4.1
ANTIKOERPERCHARAKTERISIERUNG
UND
LOKALISATION
VON
DYSTROPHIN
IN
DER
SKELETTMUSKELFASER
66
4.2
DYSTROPHIN
IM
ENDOTHEL
DER
HIRN-KAPILLAREN
69
5.
ZUSAMMENFASSUNG
72
6.
LITERATUR
73 |
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