Untersuchungen zur Solubilisierung, Struktur und Proteolyse von Insulin in inversen Mizellen:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
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1993
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I
INHALTSVERZEICHNIS
ZUSAMMENFASSUNG
ABKUERZUNGEN
INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
1
1
LIPID/PROTEIN-WECHSELWIRKUNGEN
1
2
STRUKTURIERTE
AMPHIPHIL-SELBSTASSOZIATE
ALS
MODELLMEMBRANEN
3
3
INVERSE
MIZELLEN
6
4
INVERS-MIZELLARE
SOLUBILISIERUNG
VON
PROTEINEN
11
5
INSULIN
-
EIN
PROTEOHORMON
MIT
AMPHIPHILER
STRUKTUR
UND
LIGAND
EINES
MEMBRAN-INTEGRALEN
REZEPTORS
13
6
MARKIERUNG
VON
PROTEINEN
MIT
SPEKTROSKOPISCHEN
SONDEN
UND
SEMISYNTHESE
VON
INSULIN-DERIVATEN
17
II
PROBLEMSTELLUNG
19
111
ERGEBNISSE
UND
DISKUSSION
21
1
SEMISYNTHESE,
CHARAKTERISIERUNG
UND
EIGENSCHAFTEN
VON
INSULIN-DERIVATEN
21
1.1
INSULIN-DERIVATE
MIT
VERAENDERTEN
INTRINSISCHEN
EIGENSCHAFTEN
22
1.2
INSULIN-DERIVATE
MIT
SPEKTROSKOPISCHEN
SONDEN
24
1.3
EIN
FLUOROGENES
INSULIN-DERIVAT
ZUM
NACHWEIS
VON
ENZYMATISCHEN
HYDROLYSEN
27
1.4
CHARAKTERISIERUNG
MITTELS
RP-HPLC,
CZE,
IEF,
AMINOSAEUREANALYSE
UND
AMINO-ENDGRUPPENBESTIMMUNG
29
1.5
UV/VIS-SPEKTROSKOPISCHE
CHARAKTERISIERUNG
34
1.6
FLUORESZENZ-SPEKTROSKOPISCHE
CHARAKTERISIERUNG
36
1.7
STRUKTUR
UND
EIGENSCHAFTEN
DER
INSULIN-DERIVATE
MIT
SPEKTROSKOPISCHEN
SONDEN
40
1.7.1
KONFORMATION
UND
ASSOZIATION
IN
WAESSRIGER
LOESUNG
40
1.7.2
REZEPTOR-AFFINITAET
UND
BIOLOGISCHE
AKTIVITAET
IN
VITRO
47
II
2
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
INVERS-MIZELLAREN
SOLUBILISIERUNG
VON
INSULIN
49
2.1
SOLUBILISIERUNG
AUS
DEM
FESTEN
ZUSTAND
49
2.1.1
EINFLUSS
EXTERNER
PARAMETER
50
2.1.2
EINFLUSS
DER
EIGENSCHAFTEN
DES
SOLUBILISATS
53
2.2
FLUESSIG-FLUESSIG-EXTRAKTION
MITTELS
WINSOR-II-SYSTEMEN
56
2.2.1
EXTRAKTIONSKINETIK
56
2.2.2
EXTRAKTION
IN
ABHAENGIGKEIT
VON
DER
ART
UND
KONZENTRATION
IONISCHER
ADDITIVE
IN
DER
WAESSRIGEN
PHASE
57
2.2.3
EXTRAKTION
IN
ABHAENGIGKEIT
VOM
PH-WERT
DER
WAESSRIGEN
PHASE
60
3
STRUKTUR
UND
LOKALISATION
VON
SOLUBILISATEN
63
3.1
CIRCULARDICHROISMUS-SPEKTROSKOPIE
UND
KONFORMATIONSANALYSE
63
3.1.1
VERGLEICH ZWISCHEN
INSULIN
UND
VERWANDTEN
EINKETTEN-PROTEINEN
63
3.1.2
INSULINE
MIT
AROMATISCHEN
CHROMOPHOREN
NICHT-PROTEINOGENER
AMINOSAEUREN
IN
VERSCHIEDENEN
POSITIONEN
DES
MOLEKUELS
72
3.2
SPEKTROPHOTOMETRISCHE
PH-TITRATION
PHENOLISCHER
SEITENKETTEN
76
3.2.1
3-NITROTYROSIN
ALS
PH-SONDE
77
3.2.2
EINFLUSS
DISKONTINUIERLICHER
LOESUNGSMITTELEIGENSCHAFTEN
AUF
DIE
DISSOZIATION
VON
TYRLNC^L-MARKIERTEN
INSULINEN
80
3.3
FLUORESZENZ-SPEKTROSKOPIE
VON
DANSYL-
UND
ABZ-MARKIERTEN
INSULINEN
82
3.3.1
EINFLUSS
DER
LOESUNGSMITTELPOLARITAET
AUF
DIE
SPEKTRALEN
EIGENSCHAFTEN
82
3.3.2
EINFLUSS
DES
MOLAREN
WASSER/AMPHIPHIL-VERHAELTNISSES
AUF
DIE
SPEKTRALEN
EIGENSCHAFTEN
84
3.3.3
UNTERSUCHUNG
DER
QUARTAERSTRUKTUR
AN
INTERMOLEKULAR
FLUORESZENZ
GELOESCHTEN
HETERODIMEREN
86
3.4
ZEITAUFGELOESTE
FLUORESZENZ-ANISOTROPIE
VON
ABZ-MARKIERTEN
INSULINEN
92
3.4.1
ROTATIONSDYNAMIK
IN
ABHAENGIGKEIT
VON
DER
SELBSTASSOZIATION
IN
WAESSRIGER
LOESUNG
94
3.4.2
ROTATIONSDYNAMIK
IN
ABHAENGIGKEIT
VON
DER
GROESSE
DER
MIZELLEN
UND
DER
LADUNG
DER
POLAREN
AMPHIPHIL-KOPFGRUPPEN
99
4
ENZYMATISCHE
HYDROLYSEN
IN
INVERSEN
MIZELLEN
107
4.1
FLUORIMETRISCHER
NACHWEIS
DER
SPALTBARKEIT
HOEHERMOLEKULARER
SUBSTRATE
107
4.2
ENZYMATISCHER
ABBAU
VON
INSULIN
109
4.2.1
ANALYSE
VON
AMPHIPHIL
/PROTEIN-GEMISCHEN
MITTELS
RP-HPLC
UND
CZE
109
4.2.2
TRYPTISCHER,
A-CHYMOTRYPTISCHER
UND
PEPSINOLYTISCHER
ABBAU
113
4.2.3
ISOLIERUNG
DER
PROTEOLYSE-PRODUKTE
116
III
5
ZUSAMMENFASSENDE
DISKUSSION
1
'
8
5.1
SEMISYNTHESE
UND
EIGENSCHAFTEN
VON
INSULIN-DERIVATEN
118
5.2
METHODEN
DER
SOLUBILISIERUNG
VON
INSULIN
119
5.3
VARIABILITAET
DER
INSULIN-STRUKTUR
IN
LOESUNG
UND
AMPHIPHIL/LNSULIN-WECHSELWIRKUNGEN
120
5.4
ENZYMATISCHE
REAKTIONEN
IN
INVERSEN
MIZELLEN
122
IV
EXPERIMENTELLER
TEIL
124
1
CHEMIKALIEN
124
2
GERAETE
125
3
ANALYTISCHE
METHODEN
125
3.1
RP-HOCHLEISTUNGSFLUESSIGCHROMATOGRAPHIE
125
3.2
KAPILLARELEKTROPHORESE
125
3.3
ISOELEKTRISCHE
FOKUSSIERUNG
127
3.4
AMINO-ENDGRUPPENBESTIMMUNG
127
3.5
AMINOSAEUREANALYSE
129
3.5.1
ANALYSE
VON
PROTEINOGENEN
UND
NICHT-PROTEINOGENEN
AMINOSAEUREN
129
3.5.2
BESTIMMUNG
DER
MOLAREN
EXTINKTIONSKOEFFIZIENTEN
VON
INSULIN-DERIVATEN
MITTELS
QUANTITATIVER
AMINOSAEUREANALYSE
129
3.6
COULOMETRISCHE
WASSER-BESTIMMUNG
NACH
KARL
FISCHER
129
4
PRAEPARATIVE
TRENNMETHODEN
130
4.1
GELPERMEATIONSCHROMATOGRAPHIE
130
4.2
LONENAUSTAUSCHCHROMATOGRAPHIE
130
4.3
RP-MITTELDRUCK
UND
RP-HOCHLEISTUNGSFLUESSIGCHROMATOGRAPHIE
131
5
REINIGUNG
VON
AUSGANGSSTOFFEN
131
6
METHODEN
DER
INVERS-MIZELLAREN
SOLUBILISIERUNG
VON
PROTEINEN
133
6.1
SOLUBILISIERUNG
AUS
DER
FESTEN
PHASE
133
6
L
2
FLUESSIG-FLUESSIG-EXTRAKTION
133
7
SPEKTROSKOPISCHE
METHODEN
133
7.1
UV/VIS-SPEKTROSKOPIE
133
7.1.1
ABSORPTIONSSPEKTREN
133
7.1.2
SPEKTROPHOTOMETRISCHEPH-TITRATIONEN
134
IV
7.2
CD-SPEKTROSKOPIE
135
7.3
FLUORESZENZ-SPEKTROSKOPIE
136
7.3.1
GLEICHGEWICHTS-MESSUNGEN
136
7.3.2
ZEITAUFGELOESTE
MESSUNGEN
137
7.3.3
FLUORIMETRISCHES
PROTEASE-ASSAY
138
8
BIOLOGISCHE
IN-VITRO-TESTUNG
139
8.1
REZEPTOR-AFFINITAET
139
8.2
BIOLOGISCHE
AKTIVITAET
140
9
PEPTIDCHEMISCHE
METHODEN
140
9.1
DARSTELLUNG
VON
ACYLIERUNGSREAGENZIEN,
N-ACYLIERTEN
UND
BOC-GESCHUETZTEN
NICHT-PROTEINOGENEN
AMINOSAEUREN
140
9.2
DARSTELLUNG
VON
N-ACYLSUCCINIMIDEN
BOC-GESCHUETZTER
NICHT-PROTEINOGENER
AMINOSAEUREN
144
10
PROTEINCHEMISCHE
ARBEITSVORSCHRIFTEN
UND
METHODEN
146
10.1
ALLGEMEINE
ARBEITSVORSCHRIFTEN
146
10.1.1
PRAEPARATIVE
OXIDATIVE
SULFITOLYSEN
146
10.1.2
SCHUTZGRUPPENABSPALTUNGEN
146
10.2
LITERATURPRAEPARATE
146
10.3
DARSTELLUNG
VON
AMINOACYLIERTEN
INSULINEN
151
10.4
DARSTELLUNG
VON
INSULINEN
MIT
SPEKTROSKOPISCHEN
SONDEN
155
10.4.1
N
EB29
-MARKIERTE
|
NSU
II
NE
155
10.4.2
BL-PHENYLALANIN-SUBSTITUIERTE
INSULINE
157
10.4.3
N
AB
'-DANSYL-INSULIN
159
10.4.4
N
"
A1,N
"
B1
,N
EB29
-TRIS(TYR(NO,))INSULIN
160
10.5
DARSTELLUNG
VON
N
AA
L-ABZ-N
EB
-TYR(NC 2)-LNSULIN
161
11
ENZYMATISCHE
HYDROLYSEN
IN
INVERS-MIZELLAREN
LOESUNGSMITTELSYSTEMEN
161
11.1
ALLGEMEINE
ARBEITSVORSCHRIFT
161
11.2
BEISPIEL
FUER
EINEN
ENZYMATISCHEN
INSULIN-ABBAU
IM
PRAEPARATIVEN
MASSSTAB
UND
FUER
DIE
ISOLIERUNG
DER
PROTEOLYSE-PRODUKTE
162
V
LITERATUR
163
VI
ANHANG
173
DANKSAGUNG
LEBENSLAUF |
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