Isolierung und Charakterisierung einer pflanzlichen Glucosyltransferase für den DDT-Metaboliten 2,2-Bis-(4-chlorphenyl)essigsäure (DDA):
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1993
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adam_text | 3 ISOLIERUNG UND CHARAKTERISIERUNG EINER PFLANZLICHEN
GLUCOSYLTRANSFERASE FUER DEN DDT-METABOLITEN
2,2-BIS-(4-CHLORPHENYL)ESSIGSAURE (DDA) INAUGURAL-DISSERTATION ZUR
ERLANGUNG DER DOKTORWUERDE DER FAKULTAET FUER BIOLOGIE DER
LUDWIG-MAXIMILIANS-UNIVERSITAET IN MUENCHEN VORGELEGT VON ANDREA WETZEL
AUS KARLSRUHE 1993 INHALTSVERZEICHNIS A. EINLEITUNG 1 A.L. DDT 1 A.L.L.
DDT - DIE CHEMISCHE VERBINDUNG UND IHRE 1 EIGENSCHAFTEN A.L.2. DDT - DAS
INSEKTIZID/GESCHICHTLICHER 2 HINTERGRUND A.L.3. DDT - DER
UMWELTSCHADSTOFF 3 A.L.4. DDT - TOXIZITAET 4 A.L.5. DDT - METABOLISMUS 6
A.L.5.1. DDT-METABOLISMUS IN PFLANZEN 6 A.L.5.2. DDT-METABOLISMUS IN
VERTEBRATEN 8 A.L.5.3. DDT-METABOLISMUS IN INSEKTEN 10 A.L.5.4.
DDT-METABOLISMUS IN MIKROORGANISMEN 11 A.2. XENOBIOTIKA-METABOLISMUS 12
A.2.1. METABOLISMUS VON XENOBIOTIKA IN 13 MIKROORGANISMEN A.2.2.
METABOLISMUS VON XENOBIOTIKA IN TIEREN 13 A.2.3. METABOLISMUS VON
XENOBIOTIKA IN PFLANZEN 14 A.2.3.1. PHASE-I-REAKTIONEN 15 A.2.3.2.
PHASE-II-REAKTIONEN 16 A.2.3.2.1. GLYCOSIDIERUNGEN 16 A.2.3.2.2.
MALONYLIERUNGEN 22 A.2.3.2 3. KONJUGATION MIT GLUTATHION 23 A.2.3.2.4.
AMINOSAEUREKONJUGATION 23 A.2.4. SCHLUSSBETRACHTUNG 23 A.3.
PROBLEMSTELLUNG 25 B. MATERIAL UND METHODEN 27 B.L. MATERIALIEN 27
B.L.L. GERAETE 27 B.L.2. CHEMIKALIEN 28 B.L.2.1. RADIOCHEMIKALIEN 28
B.L.2.2. SUBSTRATE FUER DIE SUBSTRATSPEZIFITAETSTESTS 28 B.L.2.3.
PUFFERSYSTEME 29 B.L.2.4. MARKERPROTEINE UND FARBSTOFFE 30
INHALTSVERZEICHNIS B.1.2.5. ENZYME 31 B.L.2.6. SONSTIGE CHEMIKALIEN 31
B.1.2.7. MATERIALIEN FUER DIE CHROMATOGRAPHIE 32 B.L.2.7.1.
DUENNSCHICHTCHROMATOGRAPHIE 32 B.1.2.7.2. SAEULENCHROMATOGRAPHIE 32
B.1.2.7.2.1. CHROMATOGRAPHIEMATERIALIEN 3 2 B.1.2.7.2.2. FERTIGSAEULEN 32
B.1.2.7.2.3. LEERSAEULEN 33 B.L.2.8. PUFFER UND LOESUNGEN FUER DIE
ELEKTROPHORESE 33 B.L.2.8.1. SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE 33
B.1.2.8.2. NATIVE GELELEKTROPHORESE 35 B.1.2.9. SONSTIGE MATERIALIEN 36
B.2. METHODEN 36 B.2.1. KULTIVIERUNG DER ZEILSUSPENSIONSKULTUREN 36
B.2.2. MESSUNG- DER RADIOAKTIVITAET 38 B.2.2.1. RADIOAKTIVITAETSBESTIMMUNG
AUF DUENNSCHICHT- 38 PLATTEN B.2.2.2. FLUESSIGKEITSSZINTILLATIONSMESSUNG
38 B.2.2.3. RADIOAKTIVITAETSBESTIMMUNG IN HPLC-ELUATEN 38 B.2.2.4.
RADIOAKTIVITAETSBESTIMMUNG VON FESTEN PROBEN 38 B.2.3. CHROMATOGRAPHISCHE
METHODEN 39 B.2.3.1. DUENNSCHICHTCHROMATOGRAPHIE 39 B.2.3.2.
HOCHLEISTUNGSFLUESSIGKEITSCHROMATOGRAPHIE 40 B.2.4. METHODEN ZUR
IDENTIFIZIERUNG DES IN VITRO 41 GEBILDETEN DDA-METABOLITEN B.2.4.1.
SYNTHESE VON REFERENZSUBSTANZEN 41 B.2.4.1.1. SYNTHESE DES
DDA-SS-D-GLUCOSEESTERTETRA- 41 ACETATS B.2.4.1.1. SYNTHESE DES
DDA-GLUCOSEESTERS 41 B.2.4.2. REINIGUNG DES ENZYMATISCH GEBILDETEN DDA-
42 METABOLITEN B.2.4.3. ACETYLIERUNG DES GEREINIGTEN DDA-METABOLITEN 43
B.2.4.4. IDENTIFIZIERUNG DES DDA-METABOLITEN; 43 VERSUCHE ZUR
COCHROMATOGRAPHIE B.2.4.5. SPALTUNG DES DDA-METABOLITEN 43 B.2.4.5.1.
SPALTUNG MIT ESTERASE 43 B.2.4.5.2. SPALTUNG MIT SS-GLUCOSIDASE 44
B.2.4.5.3. ALKALISCHE HYDROLYSE 44 B.2.5. METHODEN DER PROTEINCHEMIE 44
INHALTSVERZEICHNIS B.2.5.1. PROTEINBESTIMMUNG 44 B.2.5.2. UNTERSUCHUNGEN
ZUR ENZYMSTABILITAET 45 B.2.5.3. ENZYMTESTS 45 B.2.5.4. UNTERSUCHUNGEN
ZUM VERLAUF DER DDA-GLUCO- 47 SYLTRANSFERASE-AKTIVITAET WAEHREND DES
WACHS- TUMSZYKLUS EINER SOJAZELLSUSPENSIONSKULTUR B.2.5.5. REINIGUNG DER
DDA-O-GLUCOSYLTRANSFERASE 48 B.2.5.5.1. ZELLERNTE UND -AUFSCHLUSS (STUFE
1) 48 B.2.5.5.2. FRAKTIONIERTE AMMONIUMSULFATFAELLUNG 48 (STUFE 2)
B.2.5.5.3 . HYDROPHOBE INTERAKTIONSCHROMATOGRAPHIE 49 (STUFE 3)
B.2.5.5.4. HOCHAUFLOESENDE IONENAUSTAUSCHCHROMATO- 50 GRAPHIE AN MONO
Q/FPLC (STUFE 4) B.2.5.5.5. AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE AN UDP-GLUCURON-
51 SAEUREAGAROSE (STUFE 5) B.2.5.5.6. CHROMATOGRAPHISCHES VERHALTEN DER
DDA- 52 GLUCOSYLTRANSFERASE AN WEITEREN SAEULEN-
CHROMATOGRAPHIEMATERIALIEN B.2.5.5.6.1. HYDROXYLAPATIT 52 B.2.5.5.6.2.
FARBLIGANDEN-CHROMATOGRAPHIEMATERIALIEN 52 B.2.5.5.6.3. VERGLEICH DES
CHROMATOGRAPHISCHEN 53 VERHALTENS DER DDA-GT UND DER PCP-GT AN
UDP-GLUCURONSAEUREAGAROSE B.2.5.6. CHARAKTERISIERUNG DER DDA-O-GLUCOSYL-
54 TRANSFERASE B.2.5.6.1. ZEIT- UND PROTEINLINEARITAET 54 B.2.5.6.2.
ERMITTELN DES PH-OPTIMUMS 54 B.2.5.6.3. BESTIMMUNG DES MOLEKULARGEWICHTS
54 B.2.5.6.3.1. GELFILTRATION AN SEPHADEX G-100 54 B.2.5.6.3.2.
GELFILTRATION AN SUPERDEX 200 PREP GRADE 55 HILOAD B.2.5.6.3.3.
GELFILTRATION AN SUPEROSE 12 HR/FPLC 56 B.2.5.6.3.4. AUFLICHTSCANS
VERSCHIEDENER SDS-PAGE 57 GELSPUREN B.2.5.6.4 BESTIMMUNG DES
ISOELEKTRISCHEN PUNKTS 57 B.2.5.6.4.1. CHROMATOFOKUSSIERUNG AN MONO
P/FPLC 57 B.2.5.6.4.2. ISOELEKTRISCHE FOKUSSIERUNG 58 B.2.5.6.5.
UNTERSUCHUNGEN ZUR ENZYMKINETIK 59 B.2.5.6.6. SUBSTRATSPEZIFITAETSTESTS
60 B.2.5.7. ELEKTROPHORETISCHE METHODEN 63 INHALTSVERZEICHNIS B.2.5.7.1.
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE 63 B.2.5.7.2. NATIVE
GELELEKTROPHORESE^ 64 B.2.6. BESTIMMUNG DER DDA- UND PCP-O-GLUCOSYL- 65
TRANSFERASE AKTIVITAET IN VERSCHIEDENEN PFLANZENMATERIALIEN
(ZELLKULTUREN, BLAETTER, NADELN) C. ERGEBNISSE 67 C.L. NACHWEIS UND
IDENTIFIZIERUNG DES IN VITRO 67 GEBILDETEM DDA-GLUCOSEESTERS C.L.L. HPLC
69 C.L.2. DC 70 C.2. REINIGUNG DER DDA-O-GLUCOSYLTRANSFERASE 73 C.2.1.
ZELLAUFSCHLUSS ZUR GEWINNUNG DES 73 ROHHOMOGENATS C.2.2. FRAKTIONIERTE
AMMONIUMSULFATFAELLUNG 74 C.2.3. HYROPHOBE INTERAKTIONSCHROMATOGRAPHIE AN
7 5 PHENYLSEPHAROSE CL-4B C.2.4. HOCHAUFLOESENDE IONENAUSTAUSCHCHROMATO-
77 GRAPHIE AN MONO Q/FPLC C.2.5. AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE AN UDP- 82
GLUCURONSAEUREAGAROSE C.2.6. ZUSAMMENFASSUNG DER REINIGUNG 84 C.2.7.
CHROMATOGRAPHISCHES VERHALTEN DER DDA-O- 87 GLUCOSYLTRANSFERASE AN
WEITEREN SAEULENCHROMATOGRAPHIEMATRICES C.2.7.1. HYDROXYLAPATIT 87
C.2.7.2. FARBLIGANDEN-CHROMATOGRAPHIEMATERIALIEN 88 C.2.7.2.1.
DYE-MATREX SCREENING KIT 88 C.2.7.2.2. CHROMATOGRAPHIE AN BLUE-SEPHAROSE
CL-6B 91 C.2.7.2.3. VERGLEICH DES CHROMATOGRAPHISCHEN 92 VERHALTENS DER
DDA-GLUCOSYLTRANSFERASE UND DER PCP-GLUCOSYLTRANSFERASE AN
UDP-GLUCURONSAEUREAGAROSE C.3. CHARAKTERISIERUNG DER DDA-O-GLUCOSYLTRANS-
96 FERASE C.3.1. ENZYMSTABILITAET 96 C.3.2. PH-OPTIMUM 97
INHALTSVERZEICHNIS C.3.3. ZEIT- UND PROTEINLINEARITAET 98 C.3.4.
MOLEKULARGEWICHT S 99 C.3.4.1. GELFILTRATION AN SEPHADEX G-100 99
C.3.4.2. GELFILTRATION AN SUPERDEX 200 101 C.3.4.3. GELFILTRATION AN
SUPEROSE-12/FPLC 103 C.3.4.4. AUFLICHTSCANS VERSCHIEDENER SDS-PAGE 106
GELSPUREN C.3.4.5. NATIVE GELELEKTROPHORESE 110 C.3.5. ISOELEKTRISCHER
PUNKT 112 C.3.6. ENZYMKINETIK 114 C.3.7. SUBSTRATSPEZIFITATSTESTS 119
C.4. VERLAUF DER DDA-O-GLUCOSYLTRANSFERASE 126 AKTIVITAET WAEHRENDDES
WACHSTUMSZYKLUS EINER SOJAZELLSUSPENSIONSKULTUR C.5. BESTIMMUNG DER
DDA-GLUCOSYLTRANSFERASE 129 UND DER PCP-GLUCOSYLTRANSFERASEAKTIVITAET IN
VERSCHIEDENEN PFLANZENMATERIALIEN (ZELLKULTUREN, BLAETTER,NADELN) D.
DISKUSSION 136 D.I. NACHWEIS DER IN VITRO BILDUNG DES DDA- 136
GLUCOSEESTERS D.2. ISOLIERUNG EINER DDA-GLUCOSYLTRANSFERASE 136 D.3.
GLUCOSYLTRANSFERASEN IM PFLANZLICHEN 140 XENOBIOTIKA-METABOLISMUS;
VERBREITUNG UND BEDEUTUNG DER DDA-GLUCOSYLTRANSFERASE D.4. ABSCHLIESSENDE
VERGLEICHENDE BETRACHTUNG DES 142 XENOBIOTIKA-METABOLISMUS IM TIER UND
IN DER PFLANZE, SCHWERPUNKT: DDT-METABOLISMUS E. ZUSAMMENFASSUNG 145 F.
LITERATURVERZEICHNIS 147
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spelling | Wetzel, Andrea Verfasser aut Isolierung und Charakterisierung einer pflanzlichen Glucosyltransferase für den DDT-Metaboliten 2,2-Bis-(4-chlorphenyl)essigsäure (DDA) von Andrea Wetzel 1993 168, 7 Bl. Ill., graph. Darst. txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier München, Univ., Diss., 1993 DDT (DE-588)4148933-0 gnd rswk-swf Transferasen (DE-588)4185878-5 gnd rswk-swf Isolierung Chemie (DE-588)4122223-4 gnd rswk-swf Glucose (DE-588)4157675-5 gnd rswk-swf Metabolit (DE-588)4138579-2 gnd rswk-swf Sojabohne (DE-588)4136938-5 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Sojabohne (DE-588)4136938-5 s Glucose (DE-588)4157675-5 s Transferasen (DE-588)4185878-5 s Isolierung Chemie (DE-588)4122223-4 s DDT (DE-588)4148933-0 s Metabolit (DE-588)4138579-2 s DE-604 GBV Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=006042289&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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