Videomikroskopische Meßverfahren zur Erfassung der Wirkung von Schadstoffbelastungen:
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| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
München
Bayerisches Staatsministerium für Landesentwicklung und Umweltfragen
1992
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| Schriftenreihe: | [Umwelt & Entwicklung Bayern / Materialien]
93 |
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1. INHALTSÜBERSICHT
1. Inhaltsübersicht, Abkürzungen
2. Darstellung der Gesamtproblematik
2.1. Tierversuche
2.2. In-vitro-Test-Systeme
2.3. Videomikroskopie
2.4. Drag and Toxicity Assay System (DATAS)
2.5. Erfassung der Komplexität der Zelle
3. Zusammenfassung der bisher vorliegenden Erkenntnisse
3.1. Erkenntnisstand
3.1.1. In-vitro-Verfahren
3.1.2. Lichtmikroskopische Verfahren
3.2. Eigene Vorarbeiten
3.2.1. Mikroskopie
3.2.2. Zellorganellen und Zellmotilität
4. Fragestellung und Zielsetzung der Arbeit
4.1. Gesamtziel
4.2. Prinzip
4.3. Erwartungen
4.4. Prüfung der Anwendbarkeit
4.4.1. Auswahl geeigneter Meßparameter und Zellstämme
4.4.2. Ausbau der vorhandenen Bewegungsanalyse zur Quantifizierung der Effekte
toxischer Substanzen
4.4.3. Testung des Verfahrens mit bekannten Substanzen
5. Planung und Ablauf der Arbeiten
5.1. Aufbau eines verbesserten mikroskopischen Meßsystems
5.2. Auswahl besonders gut geeigneter Zellstämme
5.3. Auswahl geeigneter Meßparameter
5.4. Entwicklung spezieller Software
5.5. Quantitative Bestimmung der Kontrollwerte
5.6. Quantitative Studien mit Testsubstanzen
5.7. Vergleich der Ergebnisse mit denen herkömmlicher Testverfahren
5.8. Entwicklung eines einsatzfähigen Gerätes
6. Modifizierung der ursprünglichen Planung
7. Material und Methoden
7.1. Testsubstanzen
7.2. Zellkultur
7.3. Mikroskopische Methoden
7.3.1. Vitalitätstests
7.3.2. Präparatevorbereitung
7.3.3. Hochauflösende Videomikroskopie (AVEC-DIC-Mikroskopie)
7.3.4. Fluoreszenz-Mikroskopie
7.3.5. Restlicht-Videomikroskopie ("video intensified microscopy", VIM)
8. Ergebnisse
8.1. Aufbau eines verbesserten videomikroskopischen Echtzeit-Meßsystems
8.1.1. Mikroskop und Beleuchtung
8.1.2. Beispiele für Bild-Erzeugung und -Vorverarbeitung mittels Videomikroskopie
8.1.3. Das Echtzeit-Bildanalyse-System
8.2. Auswahl besonders gut geeigneter Zellstämme
8.2.1. Ausbau des Zellkulturlabors
8.2.2. Auswahl geeigneter Zellstämme
8.3. Auswahl geeigneter Meßparameter
8.3.1. Qualitative Ergebnisse mit der AVEC-DIC-Mikroskopie
8.3.2. Qualitative Ergebnisse mit selektiven Fluoreszenzfärbungen
8.3.3. Bewertung
8.4. Entwicklung spezieller Software zur Bewegungsanalyse
8.4.1. Erfassung und Analyse der Bewegung mikroskopischer Objekte
8.4.2. Erfassung der Bewegung von Einzelpartikeln
8.4.3. Erfassung der Bewegung multipler Objekte
8.4.4. Quantitative Analyse des Bewegungsverhaltens
8.5. Quantitative Bestimmung der Kontrollwerte
8.6. Quantitative Studien mit Testsubstanzen
8.6.1. Bestimmung des prozentualen Anteils transportaktiver Zellen
8.6.2. Bestimmung des prozentualen Anteils motiler Organellen
8.6.3. Bestimmung der Geschwindigkeit intrazellulärer Organellen
8.6.4. Untersuchung des Bewegungsverhaltens motiler Organellen
8.7. Vergleich der Ergebnisse mit denen herkömmlicher Testverfahren
8.7.1. Proliferationsversuche
8.7.2. Vergleich mit Iiteraturdaten
9. Diskussion
9.1. Die lebende Zelle wird untersucht
9.2. Empfindlichkeit der Verfahren
9.3. Vielfalt der quantifizierbaren Parameter
9.4. Erfassung der Integrität der Gesamtzelle
10. Weiteres Vorgehen und künftige Möglichkeiten
10.1. Einsatz weiterer mikroskopischer Verfahren
10.2. Zusätzliche Verfahren zur Quantifizierung von morphologischen Parametern
10.3. Entwicklung eines einsatzfähigen Gerätes
10.4. Anwendungsgebiete und Vorteile von DATAS
10.4.1. Allgemeine Toxikologie
10.4.2. Umwelttoxikologie
10.4.3. Pharmakologie
10.4.4. Pathologie
10.4.5. Ersatz- und Ergänzungsmethode zu Tierversuchen
10.5. Perspektiven und Fernziele
11. Zusammenfassung
12. Danksagung
13. Literaturverzeichnis |
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