Enzymologie der Fructan-Synthese im Gerstenblatt:
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1993
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I
NHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGEN
.
I
INHALTSVERZEICHNIS
.
II
DANK
.
VI
ZUSAMMENFASSUNG
.
VH
SUMMARY
.
X
EINLEITUNG
.
'
.
1
DIE
KOHLENSTOFF-ASSIMILATION
ALS
ZENTRALE
EIGENSCHAFT
DER
PFLANZEN
.
1
NICHTSTRUKTURELLE
KOHLENHYDRATE:
TRANSPORT
UND
SPEICHERFORMEN
DER
ASSIMILATE
.
3
SACCHAROSE,
DAS
ZENTRALE
MOLEKUEL
IM
PFLANZLICHEN
ASSIMILATTRANSPORT
.
3
SPEICHERUNG
VON
POLYSACCHARIDEN
.
4
STAERKE
ALS
HAUPTSPEICHEIFORM
.
5
FRUCTANE
.
6
CHEMISCHE
STRUKTUR
DER
FRUCTANE
.
6
LOKALISATION
UND
VERBREITUNG
DER
FRUCTANE
.
10
ENZYMOLOGIE
DES
FRUCTANMETABOLISMUS
.
11
FRUCTANMETABOLISMUS
IN
DEN
POACEEN
UND
ANDEREN
MONOKOTYLEDONEN
.
15
ZIELE
UND
AUFBAU
DER
ARBEIT
.
19
MATERIAL
UND
METHODEN
.
22
1.
PFLANZENMATERIAL
UND
KULTURBEDINGUNGEN
.
22
2.
EXTRAKTION
DER
WASSERLOESLICHEN
KOHLENHYDRATE
.
23
3,
PRAEPARATIVE
ISOLIERUNG
VON
OLIGOSACCHARIDEN
AUS
GERSTENSTENGELN
.
23
3.1.
EXTRAKTION
DER
LOESLICHEN
KOHLENHYDRATE
.
23
32.
AUFTRENNUNG
DER
KOHLENHYDRATE
MIT
EINER
BIOGEL
P4-SAEULE
.
23
4.
ANALYSE
DER
KOHLENHYDRATE
.
24
4.1.
ANIONENAUSTAUSCH-HPLC
.
24
42.
PROBENAUFBEREITUNG
FUER
DIE
ANIONENAUSTAUSCH-HPLC-ANALYSE
.
26
4.5.
IDENTIFIZIERUNG
UND
QUANTIFIZIERUNG
DER
MIT
ANIONENAUSTAUSCH-HPLC
GETRENNTEN
KOHLENHYDRATE
.
27
4.4.
SEMIPRAEPARATIVE
DUENNSCHICHT-CHROMATOGRAPHIE
(DC)
.
28
5.
CHROMATOGRAPHIE
VERSCHIEDENER
ENZYMFIRAKTIONEN
MIT
MONOQ
UND
ALKYL-SUPEROSE
.
29
5.1.
PRAEPARATION
VON
ENZYMEXTRAKTEN
.
29
52.
ANIONENAUSTAUSCH-CHROMATOGRAPHIE
MIT
MONOQ
.
29
53.
HYDROPHOBE-INTERAKTIONS-CHROMATOGRAPHIE
MIT
ALKYL-SUPEROSE
.
29
6.
REINIGUNG
DER
6-SST
AUS
INDUZIERTEN
GERSTENBLAETTEM
.
30
6.1.
ROH-ENZYM
.
30
62.
AMMONIUMSULFAT
UND
SAEUREFAELLUNG
.
30
63.
ANIONENAUSTAUSCH-CHROMATOGRAPHIE
MITDEAE-TRISACRYL
.
30
6.4.
AFFINITAETS-CHROMATOGRAPHIE
MIT
CONCANAVALIN
A-SEPHAROSE
4B
.
31
63.
ERSTE
ANIONENAUSTAUSCH-CHROMATOGRAPHIE
MIT
MONOQ
.
31
6.6.
HYDROPHOBE-INTERAKTIONS-CHROMATOGRAPHIE
MIT
ALKYL-SUPEROSE
.
31
6.7.
GELFILTRATIONS-CHROMATOGRAPHIE
MIT
SUPERDEX
75
.
32
6.8.
ZWEITE
ANIONENAUSTAUSCH-CHROMATOGRAPHIE
MIT
MONOQ
.
32
7.
BESTIMMUNG
DER
ENZYMAKTIVITAETEN
VON
FRUCTOSYLTRANSFERASEN
UND
INVERTASEN
.
32
7.1.
INKUBATIONSBEDINGUNGEN
IN
VITRO
.
32
72.
GOD-PERID-METHODE
(GLUCOSE-OXIDASE-ANSATZ)
.
33
73.
PROTEINBESTIMMUNG
NACH
BRADFORD
(1976)
.
33
8.
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE,
IMMUNOBLOTTING
UND
PROTEINFAERBUNG
.
34
8.1.
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
.
34
8.2.
IMMUNOBLOTTING
.
34
83.
SILBERFAERBUNG
VON
PROTEINEN
IN
10%
SDS-GELEN
NACH
BLUM
ET
AL.
(1987)
.
35
9.
GEWEBESPEZIFISCHE
LOKALISIERUNG
DER
FRUCTOSYLTRANSFERASEN
UND
INVERTASEN
.
35
9.1.
ISOLIERUNG
DER
ABAXIALEN
EPIDERMIS
VON
GERSTENBLAETTERN
.
35
92.
ISOLIERUNG
VON
EPIDERMIS
UND
MESOPHYLLPROTOPLASTEN
(MODIFIZIERT
NACH
DIETZ
ET
AL.,
1992)
.
36
9.4.
MESSUNG
DER
A-MANNOSIDASE
IN
ISOLIERTEN
PROTOPLASTEN
.
37
93.
FAERBUNG
MIT
NEUTRALROT
.
37
RESULTATE
.
38
I.
IDENTIFIZIERUNG
UND
QUANTIFIZIERUNG
VON
MONO-,
DI
UND
OLIGOSACCHARIDEN
MIT
ANIONENAUSTAUSCH-HPLC
.
38
II.
FRUCTAN-SYNTHESE
BEI
GERSTE
.
41
A.
FRUCTAN-SYNTHESE
IN
VIVO
.
41
B.
FRUCTAN-SYNTHESE
IN
VITRO
.
43
1.
AUFTRENNUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
VON
INVERTASE
UND
FRUCTOSYLTRANSFERASE-AKTIVITAETEN
.
43
2.
INDUKTION
DER
TRANSFERASE
UND
INVERTASE-AKTIVITAETEN
.
49
3.
CHARAKTERISIERUNG
DER
ANGEREINIGTEN
1-SST,
6-SST
UND
INVERTASEN
.
51
3.1.
ABHAENGIGKEIT
VON
DER
SUBSTRATKONZENTRATION
.
51
32.
TEMPERATURABHAENGIGKEIT
.
53
3.3.
WIRKUNG
VON
PYRIDOXAL
.
54
3.4.
BILDUNG
VON
BIFURCOSE
MIT
ANGEREINIGTER
6-SST.
.
55
35.
BILDUNG
VON
HOEHEREN
OLIGOSACCHARIDEN
(DP 4)
MIT
ANGEREINIGTER
6-SST
.
56
3.6.
REINIGUNG
DER
6-SST
IM
GROESSEREN
MASSSTAB
.
61
3.7.
ANALYSE
DER
GEREINIGTEN
6-SST
MIT
SDS-PAGE
UND
IMMUNOBLOTTING
.
63
3.8.
MOLEKULARGEWICHTS-BESTIMMUNG
DER
FRUCTOSYLTRANSFERASEN
UND
INVERTASEN
MIT
SUPERDEX
75
.
64
3.9.
BINDUNG
VON
1-SST,
6-SST,
INVERTASE
I
UND
II
AN
CONCANAVALIN
A
.
66
3.10.
IDENTIFIZIERUNG
EINER
FRUCTAN-FRUCTAN
FRUCTOSYLTRANSFERASE
(FFT)
UND
EINER
HYDROLASE
.
66
C.
ASPEKTE
DER
KOMPARTIMENTIERUNG
AUF
DER
EBENE
VON
GEWEBEN
UND
VON
ZELLEN
BEI
GERSTENBLAETTEM
.
68
1.
FRUCTAN-SYNTHESE
IN
VIVO
.
68
A.
ANALYSE
DER
LOESLICHEN
KOHLENHYDRATE
IN
ISOLIERTEN
EPIDERMIS-STREIFEN
.
68
B.
ANALYSE
DER
LOESLICHEN
KOHLENHYDRATE
IN
ISOLIERTEN
EPIDERMIS
UND
MESOPHYLLPROTOPLASTEN
.
69
2.
FRUCTAN-SYNTHESE
IN
VITRO
.
71
A.
IDENTIFIZIERUNG
EINER
INVERTASE-AKTIVITAET
IN
DER
ABAXIALEN
EPIDERMIS
.
.71
B.
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
EPIDERMIS-INVERTASE
UND
ZU
DEN
FRUCTOSYL
TRANSFERASE
UND
INVERTASE-AKTIVITAETEN
IM
MESOPHYLL
.
74
III.
FRUCTAN-SYNTHESE
BEI
ARRHENATHERUM
ELATIUS
L.,
J.
UND
C.
PRESL,
VAR.
BULBOSUM
"ONION
COUCH"
.
76
1.
FRUCTAN-SYNTHESE
IN
VIVO
.
76
2.
ENZYMOLOGIE
DER
FRUCTAN-SYNTHESE
IN
KNOELLCHEN
VON
ARRHENATHERUM
.
78
A.
BEOBACHTUNGEN
IM
ROHEXTRAKT
.
78
B.
REINIGUNGSVERSUCH
VON
FRUCTOSYLTRANSFERASE
UND
INVERTASE
AKTIVITAETEN
AUS
KNOELLCHEN
VON ARRHENATHERUM
.
79
DISKUSSION
.
81
AUFTRENNUNG
UND
IDENTIFIZIERUNG
VON
KOHLENHYDRATEN
MIT
ANIONENAUSTAUSCH
HPLC
.
81
FRUCTAN-SYNTHESE
IN
ABGESCHNITTENEN
UND
BELICHTETEN
GERSTENBLAETTEM
.
81
ENZYMOLOGIE
DER
FRUCTAN-SYNTHESE
BEI
GERSTE
.
82
KOMPARTIMENNERUNG
DES
FRUCTAN-STOFFWECHSELS
AUF
DER
EBENE
VON
GEWEBEN
UND
ZELLEN
IN
GERSTENBLAETTEM
.
89
ENZYMOLOGIE
DER
FRUCTAN-SYNTHESE
IN
ARRHENATHERUM
ELATIUS
VAR.
BULBOSUM
.
91
SCHLUSSFOLGERUNGEN
UND
AUSBLICK
.
93
LITERATURVERZEICHNIS
.
94
LEBENSLAUF
.
105 |
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