Die mitochondriale 3,2-trans-Enoyl-CoA Isomerase: Reinigung, Klonierung, Expression und Kristallisation des Schlüsselenzyms der Beta-Oxidation ungesättigter Fettsäuren
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
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1993
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| Beschreibung: | 89 S. Ill., graph. Darst. |
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
.
3
1.1.
DER
FETTSAEURESTOFFWECHSEL
.
3
1.2.
DIE
SS-OXIDATION
DER
GESAETTIGTEN
FETTSAEUREN
.
4
1.3,
DIE
B-OXIDATION
DER
UNGESAETTIGTEN
FETTSAEUREN
.
8
1.4.
AUFGABENSTELLUNG:
DIE
MITOCHONDRIALE
3.2-TRANS-ENOYL-COA
ISOMERASE
.
10
2.
ERGEBNISSE
.
11
2.1.
REINIGUNG
DER
3.2-TRAN
S-ENOVL-COA
ISOMERASE
AUS
RATTENLEBER
.
11
2.1.1.
MITOCHONDRIENPRAEPARATION
.
11
2.1.2.
HITZEDENATURIERUNGSSCHRITT
UND
ENZYMAKTIVITAETSTEST
.
11
2.1.3.
LONENAUSTAUSCHERCHROMATOGRAPHIE
.
12
2.2.
PROTEINSEQUENZANALYSE
DER
GEREINIGTEN
3.2-TRANS-ENOYL-COA
ISOMERASE
.
15
2.2.1.
BROMCYANSPALTUNG
DER
3,2-TRANS-ENOYL-COA
ISOMERASE
UND
GLASFASERELEKTROBLOTTING
DER
PEPTIDE.
.
15
2.2.2.
ENZYMATISCHE
SPALTUNGEN
DER
3,2-TRANS-ENOYL-COA
ISOMERASE
UND
ELUTION
DER
PEPTIDE
AUS
GELSTUECKEN
.
16
2.3.
CDNA-SEQUENZ
UND
VOLLSTAENDIGE
AMINOSAEURESEQUENZ
DER
3.2-TRANS
E
N
O
YL-COA
IWMERA
SE
.
19
2.3.1.
ISOLIERUNG
UND
SEQUENZIERUNG
ISOMERASE-SPEZIFISCHER
C-DNA
KLONE.
.
19
2.3.2.
SEQUENZHOMOLOGIEN
.
24
2.3.3.
NORTHERN-BLOT
ANALYSE:
MRNA
UND
GEWEBEVERTEILUNG
DER
3,2
TRANS-ENOYL-COA
ISOMERASE
.
25
2.3.4.
UNTERSUCHUNGEN
ZUM
MITOCHONDRIALEN
IMPORT
DER
3,2-TRANS-ENOYL
COA
ISOMERASE.
.
27
2.4.
EXPRESSION
DA
3.2-TRANS-ENOYL-COA
ISOMERASE
IN
E.
COLI:
MUTAGENESE
UND
KRISTALLISATION
.
31
2.4.1.
DIE
FUNKTIONELLE
EXPRESSION
REKOMBINANTER
3,2-TRANS-ENOYL-COA
ISOMERASE
IN
E.
COLI
.
31
2.4.2.
REINIGUNG
DER
REKOMBINANTEN
3,2-TRANS-ENOYL-COA
ISOMERASE
.
34
2.4.3.
MUTAGENESE
I:
AUSTAUSCH
VON
HISTIDINRESTEN,
DIE
IN
HUMAN
UND
RATTEN-3,2-TRANS-ENOYL-COA
ISOMERASE
KONSERVIERT
SIND.
.
36
2.4.4.
MUTAGENESE
II:
AUSTAUSCH
VON
AMINOSAEUREN,
DIE
INNERHALB
DER
ISOMERASE/
HYDRATASE
ENZYMFAMILIE
KONSERVIERT
SIND.
.
40
2.4.5.
KRISTALLISATION
REKOMBINANTER
3,2-TRANS-ENOYL-COA
ISOMERASE
.
48
3.
ZUSAMMENFASSUNG
DER
ERGEBNISSE
.
52
4.
DISKUSSION
.
54
5.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
63
6.
ANHANG
.
75
7.
LITERATUR.
.
79 |
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