Beteiligung von G-Proteinen beim insulinotropen Effekt von Cholecystokinin und Carbachol an der Langerhansschen Insel der Ratte:
Gespeichert in:
| 1. Verfasser: | |
|---|---|
| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1993
|
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| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | Münster, Univ., Diss., 1993 |
| Beschreibung: | VI, 154 S. graph. Darst. |
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INHALTSVERZEICHNIS
I
INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
.
1
1.1
G-PROTEINE
.
1
1.1.1
EINLEITUNG
.
1
1.1.2
HETEROTRIMERE
STRUKTUR
.
1
1.1.3
A-UNTEREINHEITEN
.
2
1.1.4
SS
UND
Y-UNTEREINHEITEN
.
6
1.1.5
GTPASE
ZYKLUS
.
7
1.1.6
ZELLULAERE
LOKALISATION
.
8
1.1.7
REZEPTOREN
.
9
1.1.8
EFFEKTOREN
.
12
1.1.8.1
ADENYLATCYCLASE
.
12
1.1.8.2
PHOSPHOLIPASE
C
.
13
1.1.8.3
PHOSPHOLIPASE
A.
2
.
13
1.1.8.4
PHOSPHOLIPASE
D
.
13
1.1.8.5
CGMP-PHOSPHODIESTERASE
.
13
1.1.8.6
KALIUMKANAELE
.
14
1.1.8.7
CALCIUMKANAELE
.
15
1.1.9
DESENSIBILISIERUNG
.
15
1.1.10
G-PROTEIN
NETZWERK
.
17
1.1.11
HILFSSTOFFE
ZUR
G-PROTEINERFORSCHUNG
.
18
1.1.11.1
GTPYS
.
18
1.1.11.2
PERTUSSISTOXIN
.
19
1.1.11.3
CHOLERATOXIN
.
20
1.1.11.4
ANTIKOERPER
.
20
1.2
INSULINSEKRETION
.
20
1.2.1
ANATOMIE
DER
LANGERHANSSCHEN
INSEL
.
20
1.2.2
DIE
B-ZELLE
.
21
1.2.3
GLUCOSE-INDUZIERTE
INSULINSEKRETION
.
22
1.2.3.1
GLUCOSESTOFFWECHSEL
.
22
1.2.3.2
ATP-SENSITIVE
KALIUMKANAELE
.
23
1.2.3.3
SPANNUNGSABHAENGIGE
CALCIUMKANAELE
.
23
1.2.3.4
INTRAZELLULAERES
CALCIUM
.
24
1.2.3.5
CALCIUM-EFFLUX
.
25
1.2.4
SIGNALTRANSDUKTIONSWEGE,
DIE
ZUR
INSULINSEKRETION
FUEHREN
.
25
1.2.4.1
ADENYLATCYCLASE
.
25
II
INHALTSVERZEICHNIS
1.2.4.2
PHOSPHOLIPASEN
.
26
1.2.5
EINFLUSS
VON
CHOLECYSTOKININ
AUF
DIE
INSULINSEKRETION
.
27
1.2.6
EINFLUSS
VON
CARBACHOL
AUF
DIE
INSULINSEKRETION
.
28
1.3
G-PROTEINE
UND
INSULINSEKRETION
.
29
1.3.1
IMMUNOLOGISCH
NACHGEWIESENE
G-PROTEINE
IN
INSULINSEZERNIERENDEN
ZELLEN
.
29
1.3.2
G-PROTEIN-GEKOPPCLTE
REZEPTOREN
IN
INSULINSEZERNIERENDEN
ZELLEN
.
30
1.3.2.1
SS-ADRENERGE
REZEPTOREN
.
30
1.3.2.2
A-ADRENERGE
REZEPTOREN
.
30
1.3.2.3
SOMATOSTATIN
.
31
1.3.2.4
GALANIN
.
32
1.3.2.5
WEITERE
REZEPTOREN
.
33
1.3.2.6
CCK
8
.
34
1.3.2.7
CARBACHOL
.
34
1.3.3
G-PROTEIN-GEKOPPELTE
EFFEKTOREN
IN
INSULINSEZERNIERENDEN
ZELLEN
.
34
1.4
ZIELSETZUNG
DER
ARBEIT
.
35
2
MATERIAL
.
37
2.1
VERSUCHSTIERE
.
37
2.2
GERAETE
.
37
2.3
CHEMIKALIEN,
REAGENZIEN
.
39
2.4
LOESUNGEN
.
42
2.4.1
KREBS-RINGER-HEPES-PUFFER
.
42
2.4.2
ELEKTROPORATIONS-PUFFER
.
43
2.4.3
REAGENZIENMBT
FUER
LDH-BESTIMMUNG
.
44
2.4.4
LOESUNGEN
FUER
INSULIN-RIA
.
44
2.4.4.1
RIA-PUFFER
.
44
2.4.4.2
ISOTOPEN-PUFFER
.
44
2.4.4.3
PEG-PUFFER
.
44
2.4.4.4
STAMMLOESUNG
STANDARDINSULIN
.
45
2.4.4.5
STAMMLOESUNG
L25
J-INSULIN
.
45
2.4.4.6
STAMMLOESUNG
FUER
ANTI-RATTENINSULIN-IGG
.
45
2.4.4.7
STAMMLOESUNG
ANTI-IGG-MEERSCHWEIN-IGG
.
45
2.4.4.8
STAMMLOESUNG
CARRIER-IGG
.
46
2.4.4.9
SPUL-PUFFER
.
46
INHALTSVERZEICHNIS
III
2.4.4.10
TRIS-AZID-PUFFER
.
46
2.4.5
LOESUNGEN
FUER
ELEKTROPHORESE
.
46
2.4.5.1
STAMMPUFFER
.
46
2.4.5.2
GELPUFFER
.
47
2.4.5.3
NICHT-REDUZICRCNDER
PROBENPUFFER
.
47
2.4.5.4
DTT-LOESUNG
.
47
2.4.5.5
REDUZIERENDER
PROBENPUFFER
.
47
2.4.5.6
APS-LOESUNG
.
47
2.4.5.7
KATHODENPUFFER
.
48
2.4.5.8
ANODENPUFFER
.
48
2.4.5.9
KAPSENBERGSCHMIERE
.
48
2.4.6
BLOTTINGPUFFER
.
48
2.4.7
PBS-PUFFER
.
49
2.4.8
PBST-PUFFER
.
49
2.4.9
NEUTRALISIERUNGSLOESUNG
FUER
IPJ-VERSUCHE
.
49
2.4.10
STAMMLOESUNGEN
.
49
2.4.10.1
CCK,
.
49
2.4.10.2
CARBACHOL
.
49
2.4.10.3
PERTUSSISTOXIN
.
50
2.4.10.4
CHOLERATOXIN
.
50
2.4.10.5
GTPYS
.
50
2.4.10.6
ANTI-(G-PROTEIN)-IGG
.
50
2.4.10.7
ANTI-KANINCHEN-IGG,
BIOTIN-SP
KONJUGIERT
.
51
2.4.10.8
STREPTAVIDIN-PEROXIDASE
.
51
1
METHODEN
.
52
3.1
ISOLIERUNG
DER
LANGERHANSSCHEN
INSELN
.
52
3.2
PERMEABILISIERUNG
VON
LANGERHANSSCHEN
INSELN
.
53
3.2.1
EINLEITUNG
.
53
3.2.2
METHODEN
ZUR
PERMEABLISIERUNG
.
54
3.2.2.1
PERMEABILISIERUNG
DURCH
DETERGENTIEN
UND
STREPTOLYSIN
O
.
55
3.2.2.2
ELEKTROPORATION
.
55
3.2.3
BERECHNUNG
DER
FREIEN
CALCIUMIONENKONZENTRATION
.
57
3.2.4
LDH-BESTIMMUNG
.
58
3.2.5
INSULIN-BESTIMMUNG
AUS
ELEKTROPORIERTEN
INSELN
.
59
3.3
VERSUCHE
ZUR
INSULINSEKRETION
.
60
33.1
ELEKTROPORIERTE
INSELN
.
60
3.3.2
NICHT
ELEKTROPORIERTE
INSELN
.
60
IV
INHALTSVERZEICHNIS
3.3.3
VORINKUBATION
MIT
PERTUSSISTOXIN
.
61
3.3.4
VORINKUBATION
MIT
CHOLERATOXIN
.
61
3.4
BESTIMMUNG
DES
INSULINS
.
61
3.4.1
RIA
IN
MUNSTER
.
61
3.4.2
RIA
IN
TUEBINGEN
.
62
3.5
VERSUCHE
ZUM
IP
3
-GEHALT
.
63
3.5.1
INKUBATION
UND
PROBENVORBEREITUNG
.
63
3.5.2
BESTIMMUNG
VON
IP
3
.
YY
.
64
3.6
VERSUCHE
ZUR
DESENSIBILISIERUNG
.
64
3.7
SDS-POLYACRYLAMIDGCL-ELEKTROPHORESE
.
65
3.7.1
PROBENAUFBEREITUNG
.
65
3.7.2
GELHCRSTCLLUNG
.
65
3.7.3
GCLZUSAMMENSETZUNG
.
66
3.7.4
ELEKTROPHORESE-LAUF
.
67
3.8
BLOTTING
.
67
3.8.1
BLOTTING-APPARATUR
.
68
3.8.2
BLOT-MCMBRAN
.
68
3.8.3
BLOT-SANDWICH
.
69
3.8.4
BLOTTING-BCDINGUNGEN
.
70
3.9
DCTEKTIERUNG
DER
PROTEINE
AUF
DEM
BLOT
.
71
3.9.1
IMMUNOBLOTTING
.
71
3.9.2
ECL-KIT
.
72
3.10
DENSITOMETRIE
.
73
3.11
STATISTIK
.
74
4
ERGEBNISSE
.
75
4.1
VERSUCHE
MIT
GTPYS
.
75
4.1.1
UEBERPRUEFUNG
DER
ELEKTROPORTION
.
75
4.1.1.1
LDH-AUSSTROM
.
76
4.1.1.2
INSULIN-AUSSTROM
.
78
4.1.1.3
FAZIT
.
79
4.1.2
ELEKTROPORATION
UND
INSULINSEKRETION
.
79
INHALTSVERZEICHNIS
V
4.1.3
EFFEKT
VON
GTPYS
AUF
DIE
INSULINSEKRETION
.
81
4.1.4
EFFEKT
VON
GTPYS
AUF
DIE
CCK,-INDIZIERTE
INSULINSEKRETION
.
82
4.1.5
EFFEKT
VON
GTPYS
AUF
DIE
CARBACHOL-INDUZIERTE
INSULINSEKRETION
.
83
4.2
VERSUCHE
MIT
PERTUSSISTOXIN
.
86
4.2.1
EFFEKT
VON
PT
AUF
DIE
CCK,-INDUZIERTE
INSULINSEKRETION
.
89
4.2.2
EFFEKT
VON
PT
AUF
DIE
CARBACHOL-INDUZIERTE
INSULINSEKRETION
.
89
4.3
VERSUCHE
MIT
CHOLERATOXIN
.
92
4.3.1
EFFEKT
VON
CT
AUF
DIE
CCK,-INDUZIERTE
INSULINSEKRETION
.
92
4.3.2
EFFEKT
VON
CT
AUF
DIE
CARBACHOL-INDUZIERTE
INSULINSEKRETION
.
92
4.4
VERSUCHE
ZUM
INOSITOL-L,4,5-TRISPHOSPHAT-GEHALT
.
96
4.4.1
EFFEKT
VON
PT
AUF
DEN
CCK,-MODULIERTEN
IP
R
GCHALT
.
96
4.4.2
EFFEKT
VON
PT
AUS
DEN
CARBACHOL-MODULICRTCN
IP
3
-GCHALT
.
96
4.5
VERSUCHE
ZUM
IMMUNOBLOTTING
.
99
4.5.1
NACHWEIS
DER
G-PROTEIN-A-UNTCREINHCITCN
.
99
4.5.2
DAUERSTIMMULATIONSVERSUCH
MIT
CCK,
.
101
4.5.3
DAUERSTIMMULATIONSVERSUCH
MIT
CARBACHOL
.
101
5
DISKUSSION
.
103
5.1
VERSUCHE
MIT
GTPYS
.
103
5.1.1
EFFEKT
VON
GTPYS
AUF
DIE
GLUCOSE-INDUZICRTE
INSULINSEKRETION
.
103
5.1.2
EFFEKT
VON
GTPYS
AUF
DIE
CCK,-TNDUZICRTC
INSULINSEKRETION
.
104
5.1.3
EFFEKT
VON
GTPYS
AUF
DIE
CARBACHOL-INDUZIERTE
INSULINSEKRETION
.
104
5.2
VERSUCHE
MIT
PERTUSSISTOXIN
.
105
5.2.1
EFFEKT
VON
PT
AUF
DIE
GLUCOSE-INDUZIERTE
INSULINSEKRETION
.
105
5.2.2
EFFEKT
VON
PT
AUF
DIE
CCK,-INDUZIERTE
INSULINSEKRETION
.
105
5.2.3
EFFEKT
VON
PT
AUF
DIE
CARBACHOL-INDUZIERTE
INSULINSEKRCTION
.
107
5.3
VERSUCHE
MIT
CHOLERATOXIN
.
109
5.3.1
EFFEKT
VON
CT
AUF
DIE
GLUCOSE-INDUZIERTE
INSULINSEKRETION
.
109
5.3.2
EFFEKT
VON
CT
AUF
DIE
CCK,-INDUZIERTE
INSULINSEKRETION
.
109
5.3.3
EFFEKT
VON
CT
AUF
DIE
CARBACHOL-INDUZIERTE
INSULINSEKRETION
.
109
5.4
VERSUCHE
ZUM
IPJ-GEHALT
.
110
5.4.1
EFFEKT
VON
PT
AUF
DEN
GLUCOSE-MODULIERTEN
IP
3
-GEHALT
.
110
5.4.2
EFFEKT
VON
PT
AUF
DEN
CCK,-MODULIERTEN
IPJ-GEHALT
.
111
VI
INHALTSVERZEICHNIS
5.4.3
EFFEKT
VON
PT
AUS
DEN
CARBACHOL-MODULIERTEN
IPJ-GEHALT
.
111
5.5
IMMUNODETEKTION
VON
G-PROTEIN
A-UNTEREINHEITEN
.
112
5.6
VERSUCHE
ZUR
DESENSIBILISIERUNG
.
113
5.6.1
METHODENKRITIK
ZUR
QUANTIFIZIERUNG
DER
G-PROTEINE
.
113
5.6.2
DESENSIBILISIERUNG
DURCH
EINE
CCK,-DAUERSTIMULATION
.
114
5.6.2
DESENSIBILISIERUNG
DURCH
EINE
CARBACHOL-DAUERSTIMULATION
.
116
5.7
SCHLUSSBETRACHTUNG
.
116
6
ZUSAMMENFASSUNG
.
119
6.1
FRAGESTELLUNG
.
119
6.2
ERGEBNISSE
.
120
6.3
SCHLUSSFOLGERUNG
.
121
7
LITERATURVERZEICHNIS
.
122 |
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| author | Herrmann, Klaus |
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