Entwicklung eines automatisierten durchflußzytometrischen Verfahrens zur Mikrokernanalyse in Säugerzellen und humanen Lymphozyten:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1993
|
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| Beschreibung: | München, Univ., Fak. für Biologie, Diss., 1993 |
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INHALT
ABKUERZUNGEN
.
1
1.
EINLEITUNG
.
3
1.1.
ENTSTEHUNG
VON
MIKROKERNEN
.
.4
1.2.
ENTWICKLUNG
DES
MK-TESTS
.5
2.
GRUNDLAGEN
ZUR
AUTOMATISIERUNG
DES
MK-TESTS
FUER
HUMANE
LYMPHOZYTEN
.
7
2.1.
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
.
8
2.2.
EINFUEHRUNG
IN
DAS
PRAESENTIERTE
VERFAHREN
.10
2.2.1.
DISKRIMINIERUNG
VON
MK
UND
ZELLTRUEMMERN
.
10
2.2.2.
QUANTITATIVE
ZELLZYKLUSANALYSE
.14
3.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
17
3.1.
MATERIAL
.
17
3.1.1.
CHEMIKALIEN
(ALLGEMEIN)
.
17
3.1.2.
BLUTABNAHME
UND ZELLKULTIVIERUNG
.
17
3.1.3.
ANTIKOERPER
.
.18
3.1.4.
GERAETE
.
18
3.1.5.
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
.
18
3.1.6.
HARD
UND
SOFTWARE
.
18
3.2.
LOESUNGEN,
PUFFER
UND
MEDIEN
.19
3.3.
METHODEN
.
21
3.3.1.
STRAHLENEXPOSITIONEN
.
21
3.3.2.
ZELLINIEN
.
21
3.3.2.1
.
EAT-KULTIVIERUNG
.
21
3.32.2.
3T3-KULTIVLERUNG
.
22
3.3.2.3.
HERSTELLUNG
VON
MK/K-SUSPENSIONEN
AUS
EAT
UND
3T3-ZELLEN
.22
3.3.2.4.
ETHANOL-FIXIERUNG
VON
ZELLEN
.22
3.3.3.
HUMANE
LYMPHOZYTEN
.
22
3.3.3.1,
BLUTSPENDER/INNEN
UND
LYMPHOZYTENKULTIVIERUNG
.22
3.3.3.2.
ERNTE
DER
LYMPHOZYTEN
ZUR
DURCHFLUSSZYTOMETRISCHEN
BRDURD/HOECHST
QUENCHING
ZELLZYKLUSANALYSE
UND
ZUR
MK-FREQUENZBESTIMMUNG
.
23
3.3.3.3.
ZELLZYKLUSKONTROLLE
DURCH
ZYTOKINESEBLOCK
MIT
CYTOCHALASIN
B
.
24
3.3.3.4.
ZELLZYKLUSKONTROLLE
DURCH
IMMUNOCHEMISCHE
DETEKTION VON
BRDURD
.
24
3.3.4.
CHROMOSOMENPRAEPARATION
ZUR
DURCHFLUSSZYTOMETRISCHEN
AUFNAHME
.
24
3.3.4.1.
EAT-ZELLEN
.
24
3.3.42.
3T3-ZELLEN
.
.25
3.3.4.3.
LYMPHOZYTEN
.
25
3.3.5.
ANREGUNGS
UND
EMISSLONSWELLENLAENGENBERELCHE
VON
GEBUNDENEN
DNA
FLUORESZENZFARBSTOFFEN
IN
LSG.L/LSG.2
.
25
3.3.6.
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
.
25
3.3.6.1
.
AUFNAHME
VON
FITC-MARKIERTEN
POLYSTRYOLPARTLKELN
ZUR
BESTIMMUNG
DER
MESSGENAUIGKEITEN
.
28
3.3.62.
MESSUNG
VON
MK/K-SUSPENSLONEN
.
28
3.3.6.3.
AUFNAHMEN
ZUR
BRDURD/HOECHST
QUENCHING
ZELLZYKLUSANALYSE
.
29
3.3.6.4.
AUFNAHMEN
ZUR
IMMUNOCHEMISCHEN
ZELLZYKLUSKONTROLLE
.
29
3.3.6.5.
DNA-FARBSTOFFKOMBLNATLON:
MITHRAMYCLN
-
PROPLDLUMJODLD
.
29
3.3.7.
AUTOMATISIERTE
DATENAUSWERTUNG
.
J9
3.3.7.1.
BERECHNUNG
DER
MK-FREQUENZ
.
29
3.3.7.2.
BRDURD/HOECHST-ZELLZYKLUS
AUSWERTUNG
.
33
3.3.8.
ZEITLICHER
VERLAUF
DER
AUTOMATISIERTEN
ZELLZYKLUSKONTROLLIERTEN
MK-FREQUENZBESTIMMUNG
.
39
4.
ERGEBNISSE
.
.40
4.1.
YY
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
REPRODUZIERBARKEIT
QUANTITATIVER
OURCHFLUSSZYTO
METRISCHER
MESSUNGEN
.
40
4.1.1.
MESSUNG
VON
FITC-MARKIERTEN
POLYSTYROLPARTIKELN
.
40
4.1.2.
ABHAENGIGKEIT
DER
MK-FREQUENZ
VON
DER
ANZAHL
AUFGENOMMENER
PARTIKEL
.
42
4.2.
ENERGIETRANSFER
.
43
4.2.1.
FARBSTOFFKOMBINATION:
MITHRAMYCLN
-
PROPLDLUMJODLD
.
45
4.2.2.
VERGLEICH
VON
DAPI
UND
HOECHST
33258
ALS
DONOREN
FUER
EB
UND
PI
.
46
4.2.3.
ENERGIETRANSFER:
HOECHST
33258
-
EB
.
47
4.2.3.1.
VERGLEICH
DER
DIREKT
UND
INDIREKT
ANGEREGTEN
EB-FLUORESZENZEN
.
50
4.2.3.2.
DNA-SPEZIFIKATION
DURCH
QUOTIENTENBILDUNG
VON
JEWEILS
ZWEI
FLUORESZENZINTENSITAETEN
.
53
4.2.3.3.
KRITERIEN
ZUR
DURCHFLUSSZYTOMETRLSCHEN
UNTERSCHEIDUNG
VON
ZELLDEBRLS
UND
MK
-
ENTWICKLUNG
EINER
DURCHFLUSSZYTOMETRLSCHEN
MK-DEFLNITION
ZUM
AUSSCHLUSS
VON
ZELLDEBRLS
.
54
4.2.3.4.
UEBERPRUEFUNG
DER
MK-DEFINITION
.
58
4.2.3.4.1
.
EINFLUSS
DER
FENSTERAKTIVIERUNG
AUF
DIE
ERRECHNETE
MK-FREQUENZ
.
58
4.2.3.4.2.
VERGLEICH
VON
MK
UND
CHROMOSOMENSPEKTREN
.
61
4.2.3.4.3.
VERGLEICH
VON
MIKROSKOPISCH
UND
DURCHFLUSSZYTOMETRISCH
BESTIMMTEN
MK-FREQUENZEN
.
63
4.2.3.4.4.
VERGLEICH
DES
ZEITLICHEN
VERLAUFES
STRAHLENINDUZIERTER
MK-FREQUENZEN
AN
EAT
UND
3T3-ZELLEN
.
63
4.2.3.4.S.
MK-FREQUENZEN
DES
ENERGIETRANSFERSYSTEMS
IM
VERGLEICH
ZU
MK-FREQUENZEN
BERECHNET
AUF
GRUND
DER
DIREKT
ANGEREGTEN
EB-FLUORESZENZEN
.
65
4.2.3.4.6.
KLEINSTER
ERFASSBARER
MK
.
69
4.2.4.
ZWISCHENZUSAMMENFASSUNG
.
70
4.3.
OPTIMIERUNGEN
DER
MK-FREQUENZ
MESSUNG
FUER
DIE
ANWENDUNG
AN
HUMANEN
LYMPHOZYTEN
.
70
4.3.1.
VORWAERTSLICHTSTREUUNG
VON
CHROMOSOMEN
UND
MK
.
71
4.3.2.
VERAENDERUNG
DER
LSG.L
/LSG.2-KOMPONENTEN
.
71
4.3.3.
STANDARDISIERTE
BEDINGUNGEN
ZUR
IDENTIFIZIERUNG
VON
MK
UND
AUTOMATISIERTE
BERECHNUNG
DER
MK-FREQUENZ
VON
LYMPHOZYTEN
.72
4.4.
AUSWAHL
EINER
DURCHFLUSSZYTOMETRISCHEN
TECHNIK
ZUR
ZELLZYKLUSKONTROLLE
.
.
73
4.4.1.
DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE
UNTERSUCHUNGEN
AN
CYT
B
BEHANDELTEN
LYMPHOZYTEN
.73
4.4.2.
QUANTITATIVE
ZELLZYKLUSANALYSE
VON
LYMPHOZYTEN
MIT
DER
BRDURD/HOECHST
QUENCHLNG
TECHNIK
.73
4.5.
QUANTITATIVE
ZELLZYKLUSANALYSE
DURCH
BRDURD/HOECHST
QUENCHING:
OPTIMIERUNG
DER
ISOLIER
UND
KULTURBEDINGUNGEN
FUER
LYMPHOZYTEN
.
76
4.5.1.
EINFLUSS
VON
A-THIOGLYCEROL
AUF
DIE
PROLIFERATION
.
76
4.5.2.
ISOLIERUNG
VON
LYMPHOZYTEN
.77
4.5.3.
ZEIT
UND
DOSISABHAENGIGKEIT
DER
PROLIFERATION
.
77
4.5.4.
AUTOMATISIERTE
DATENAUSWERTUNG
ZUR
ZELLZYKLUSKONTROLLE
.79
4.6.
MK-FREQUENZBESTIMMUNG
IN
BRDURD-MARKIERTEN
ZELLEN
.
60
4.6.1.
BRDURD/HOECHST
QUENCHING
IN
LSG.L/LSG.2
.
80
4.6.2.
MK-FREQUENZ
NACH
BRDURD-EINBAU
.
81
4.7.
AUTOMATISIERTE
ZELLZYKLUSKONTROLLIERTE
MK-FREQUENZBESTIMMUNG
AN
HUMANEN
LYMPHOZYTEN
.
82
4.7.1.
SPONTANE
MK-FREQUENZEN
.83
4.7.2.
STRAHLENINDUZIERTE
MK-FREQUENZEN
IN
LYMPHOZYTEN
VERSCHIEDENER
SPENDER
.86
4.7.2.1.
SPENDERIN
23:
NICHTRAUCHERIN,
'
37
CS
Y-BESTRAHLUNG
.
86
4.7.2.2.
SPENDER
24:
NICHTRAUCHER,
137
CS
Y-BESTRAHLUNG
.87
4.7.2.3.
SPENDER
32:
RAUCHER,
,37
CSY-
UND
ROENTGEN-BESTRAHLUNG
.89
4.7.2.4.
SPENDER
36:
NICHTRAUCHER,
,37
CSY
UND
ROENTGENBESTRAHLUNG
.
89
4.7.2.OE.
SPENDER
54:
NICHTRAUCHER,
'
37
CSY-
UND
ROENTGENBESTRAHLUNG
.
.90
4.7.2.6.
VERGLEICH
DER
MK-FREQUENZEN
NACH
'
37
CSY-
UND
ROENTGENBESTRAHLUNG
.
92
4.7.2.7.
ZUSAMMENFASSUNG
DER
MK-FREQUENZEN
NACH
,37
CS
Y-BESTRAHLUNG
.
93
4.7.3.
STATISTISCHE
ANALYSE
.
94
5.
DISKUSSION
.97
5.1.
ENERGIETRANSFER.
97
5.2.
OPTIMIERUNGEN
FUER
LYMPHOZYTEN
.
98
5.2.1.
STANDARDISIERUNG
UND
AUTOMATISIERUNG
DER
DATENANALYSE
ZUR
MK
FREQUENZBESTIMMUNG
.
.99
5.3.
QUANTITATIVE
ZELLZYKLUSKONTROLLE
.
100
5.3.1.
AUTOMATISIERTE
ZELLZYKLUSKONTROLLE
.
.102
5.4.
BEHANDLUNG
DER
LYMPHOZYTEN
.
102
5.5.
ENERGIETRANSFER
AN
BRDURD-BEHANDELTEN
ZELLEN
.
102
5.6.
ANALYSEGESCHWINDIGKEIT
.
.103
5.7.
MK-FREQUENZEN
VON
HUMANEN
LYMPHOZYTEN
.103
5.8.
BEURTEILUNG
DER
EINSATZMOEGLICHKEITEN
DES
AUTOMATISIERTEN
MK-TESTS
.
.105
5.9.
AUSBLICK
.106
ZUSAMMENFASSUNG
.
108
LITERATUR
.
111
DANKSAGUNG
.
116
ANHANG
.
117
1.
DAS-MAKROS
ZUR
AUTOMATISCHEN
DATENAUSWERTUNG
.
117
1.1.
LYMNAU:
MAKRO
ZUR
BERECHNUNG
DER
MK-FREQUENZ
.
117
1.2.
CCAUTO:
MAKRO
ZUR
BERECHNUNG
DES
ANTEILS
VON
ZELLEN
IM
2.
ZYKLUS
.
120
1.2.1.
DETMIN
.
.128
LEBENSLAUF.129 |
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