Bindungsstudien und Strukturaufklärung an Fettsäurebindungsproteinen durch Photoaffinitätsmarkierung:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
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1993
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| Beschreibung: | Münster, Univ., Diss., 1993 |
| Beschreibung: | 108 Bl. Ill., graph. Darst. |
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INHALTSVERZEICHNIS
1 GLOSSAR 1
2 ZUSAMMENFASSUNG 3
3 EINLEITUNG 5
4 ZIELSETZUNG 15
5 KOVALENTE MODIFIZIERUNG VON FETTSAEUREBINDUNGSPROTEINEN
MIT 12-[(AZIDOCARBONYL)OXY]-[9,10
3H]-OCTADECANSAEURE 16
5.1 PHOTOAFFINITAETSMARKIERUNG DER FETTTSAEUREBINDUNGSPROTEINE 17
5.1.1 VERSUCHE ZUR MODIFIZIERUNG VON HFABP MIT 12-(2-DIAZO-
CYLOPENTADIENAMINO)-[LI
3H]
2
~DODECANSAEURE 18
5.2 MODIFIZIERUNGSAUSBEUTEN IN ABHAENGIGKEIT VON DEN
REAKTIONSGEFAEBEN 22
5.3 LIMITIERTE PROTEOLYSE VON T-AOS MODIFIZIERTEM HFABP
MIT V8-PROTEASE 23
5.4 ZEITABHAENGIGE LIMITIERTE PROTEOLYSE VON HFABP MIT
V8-PROTEASE 26
6 SEQUENZANALYSE DER KOVALENT MODIFIZIERTEN PEPTIDE DES
HEPATISCHEN FETTSAEUREBINDUNGSPROTEINS 28
6.1 MASSENSPEKTROMETRIE DER 7,0 UND 9,5 KDA PROTEINFRAGMENTE 31
6.2 ELUTION DER PROTEINFRAGMENTE VON DER PVDF-MEMBRAN 33
6.3 UMKEHRPHASENCHROMATOGRAPHIE TRYPTISCHER PEPTIDE DES HFABP 37
6.4 AUFTRENNUNG DER TRYPTISCHEN PEPTIDE UEBER HPLC-GELFILTRATION 39
6.4.1 EICHUNG DER GELFILTRATIONSSAEULE 41
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
HTTP://D-NB.INFO/940205149
6
.
4.2
GELFILTRATION VON TRYPTISCH GESPALTENEM UND MIT T-AOS
MARKIERTEM HFABP
44
6.4.3 RADIOAKTIVE MARKIERUNG DES PEPTIDS ASP^-GLU^
45
7 VERSUCHE ZUR MARKIERUNG DES REKOMBINANTEN CARDIALEN FETTSAEUREBIN
DUNGSPROTEINS MIT 12-[(AZIDOCARBONYL)OXY]-[9,10
3H]-OCTADECANSAEURE 47
7.1 ANALYSE DER TRYPTISCHEN PEPTIDE
47
8 DISKUSSION
51
9 EXPERIMENTELLER TEIL 62
9.1 MATERIALIEN UND REAGENZIEN 62
9.2 GERAETE, HARDWARE, SOFTWARE, DATENBANKEN 63
9.3 REINIGUNG UND UEBERPRUEFUNG DER 12-[(AZIDOCARBONYL)OXYL-
C9,10
3
H]-OCTADECANSAEURE (T-AOS) UND 12-(2-DIAZO-
CYCLOPENTADIENCARBONYLAMINOL-DODECANSAEURE (DCP-ADS) 65
9.3.1 REINIGUNG DES T-AOS ROHPRODUKTS 65
9.3.2 CHROMATOGRAPHISCHE UND PHOTOCHEMISCHE UEBERPRUEFUNG
DER T-AOS AUF AUTORADIOLYSEPRODUKTE 69
9.3.3 REINHEIT UND PHOTOLYTISCHE REAKTIVITAET DER 12-(2-DIAZO-
CYCLOPENTADIENCARBONYLAMINO)-[LL
3
HL2-DODECANSAEURE 73
9.4 LIPIDIERUNG UND DELIPIDIERUNG VON FABP 75
9.4.1 LIPIDIERUNG 75
9.4.2 DELIPIDIERUNG MIT LIPIDEX 1000 UND N-BUTANOL 76
9.5 LAGERUNG UND HANDHABUNG DER T-AOS 77
9.6 PHOTOLYSE
77
9.7 TRITIUMDETEKTION AUF DUENNSCHICHTCHROMATOGRAMMEN 78
9.8 PROTEOLYSE VON HFABP UND REKOMBINANTEM CFABP 78
9.8.1 LIMITIERTE PROTEOLYSE MIT V
8
-PROTEASE 79
9.8.2 PROTEOLYSE MIT TRYPSIN 79
9.9 POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE
79
9.9.1 GELZUSAMMENSETZUNG 81
9.10 WESTERNBLOT 82
9.11 FAERBEMETHODEN 82
9.11.1 COOMASSIE FAERBUNG 82
9.11.2 PONCEAU S FAERBUNG 83
9.11.3 TRANSLUMINESZENZ 83
9.11.4 SILBERANFAERBUNG VON PA-GELEN 84
9.12 PROTEINELUTION VON PVDF-MEMBRANEN 84
9.12.1 SDS-FAELLUNG UND EXTRAKTION 85
9.13 FLUOROGRAPHIE 87
9.13.1 FLUOROGRAPHIE VON SDS-TRICIN-PA-GELEN 87
9.13.2 FLUOROGRAPHIE VON DUENNSCHICHTCHROMATOGRAMMEN UND
BLOTMEMBRANEN
88
9.14 SZINTILLATIONSZAEHLUNG
88
9.14.1 SZINTILLATIONZAEHLUNG VON RADIOAKTIVEN GELSTUECKEN
88
9.15 DIALYSEMETHODEN
88
9.15.1 EPPENDORFMETHODE 89
9.15.2 ZENTRICONMETHODE 89
9.16 VINYLPYRIDINYLIERUNG UND FAELLUNG MIT TRICHLORESSIGSAEURE 89
9.17 HPLC-ANALYTIK
90
9.17.1 TRENNUNG VON PEPTIDEN DURCH UMKEHRPHASENCHROMATOGRAPHIE 90
9.17.2 TRENNUNG VON PEPTIDEN DURCH GELFILTRATIONSCHROMATOGRAPHIE 91
10 LITERATURVERZEICHNIS
92
ANHANG
100
I PRIMAERSTRUKTUR DES HEPATISCHEN FETTSAEUREBINDUNGSPROTEINS 100
11 MAASTRICHT POSTER
101
III DANKSAGUNG
102
IV STICHWORTREGISTER 103
LEBENSLAUF
108 |
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