Mutagenese und Expression der menschlichen Neutrophilen-Elastase:
Gespeichert in:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1993
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| Beschreibung: | Bonn, Univ., Diss., 1993 |
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INHALTSVERZEICHNIS
1. EINLEITUNG.1
1.1. HISTORISCHER UEBERBLICK.1
1.2. DIE PROTEASE-ANTIPROTEASE-THEORIE.2
1.3. DIE NEUTROPHILEN-ELASTASE.4
1.4. DER INHIBITOR ALPHA-L-ANTITRYPSIN.7
1.5. EXOGENE EINFLUESSE.9
1.6. STRUKTURUNTERSUCHUNGEN.10
1.7. ZIEL DER ARBEIT.11
2. MATERIAL UND METHODEN.13
2.1. MATERIAL.13
2.1.1. CHEMIKALIEN UND ENZYME.13
2.1.2. LOESUNGEN, NAEHRMEDIEN, PUFFER UND GELE.14
2.1.2.1. LOESUNGEN. 14
2.1.2.2 . NAEHRMEDIEN.15
2.1.2.3. PUFFER.15
2.1.2.4. GELE.17
2.1.3. OLIGONUKLEOTIDE (PRIMER).17
2.1.4. PLASMIDE.20
2.1.6. ZELLEN.20
2.2. METHODEN.20
2.2.1. METHODEN ZUR DNA-KLONIERUNG.20
2.2.1.1. BAKTERIEN-FLUESSIGKULTUR.20
2.2.1.2 . PLASMID-DNA-GEWINNUNG AUS BAKTERIENKLONEN.21
2.2.1.3. ENZYMATISCHE DNA-SPALTUNG MIT RESTRIKTIONSENDO-
NUKLEASEN.22
2.2.1.4. DEPHOSPHORYLIERUNG VON DNA.22
2.2.1.5. LIGATION.22
2.2.1.6. TRANSFORMATION.23
2.2.2. AUSWAHL DER OLIGONUKLEOTID-SEQUENZEN (PRIMER-DESIGN).23
2.2.3. SYNTHESE UND AUF REINIGUNG VON OLIGONUKLEOTIDEN.24
2.2.4. DNA- UND OLIGONUKLEOETID-KONZENTRATIONSBESTIMMUNGEN. 24
2.2.5. GELELEKTROPHORESE.25
2.2.5.1. AGAROSE-GELELEKTROPHORESE.25
2.2.5.2. POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE.25
2.2.6. DNA-ISOLIERUNG AUS AGAROSEGELEN.26
2.2.7. DNA-AMPLIFIKATION (POLYMERASE-KETTENREAKTION, PCR).27
2.2.7.1. PCR-REAKTIONSANSATZ.28
2.2.7.2 . REAKTIONSBEDINGUNGEN.29
2
.
2
.
1
.
3
. AUF REINIGUNG DER PCR-PRODUKTE.30
2.2.8. "AUTOMATISCHE" SEQUENZIERUNG PCR-AMPLIFIZIERTER DNA.30
2.2.9. VEKTORSYSTEM.32
2.2.10. COMPUTERMODELLANALYSE.33
2.2.11. MUTAGENESE.34
2.2.11.1. PRINZIP DER PCR-MUTAGENESE.34
2.2.11.2. HERSTELLUNG DER MUTANTEN.35
2.2.11.3. SEQUENZIERUNG DER MUTANTEN.37
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
HTTP://D-NB.INFO/940305313
2.2.12. EXPRESSION.37
2.2.12.1. VORKULTUR.37
2.2.12.2. TRANSFEKTION UND HAUPTKULTUR.38
2.2.13. ENZYMASSAY.38
2.2.13.1. PRAEZISION DES ASSAYS.39
2.2.13.2. LINEARITAET DES ASSAYS.39
2.2.14. KINETISCHE MESSUNGEN.39
2.2.14.1. HEMMKINETIK.39
2.2.14.2. DIXON PLOT.40
2.2.15. ELISA.40
2.2.16. WESTERN BLOT.41
3. ERGEBNISSE.42
3.1. COMPUTERMODELLANALYSE.42
3.2. VEKTOR SYSTEM.43
3.3. MUTAGENESE. 44
3.3.1. HERSTELLUNG DER MUTANTEN.44
3.3.2. UEBERPRUEFUNG DER MUTANTEN DURCH AUTOMATISCHE
SEQUENZIERUNG.48
3.3.3. NACHWEIS EINER MUTATION DURCH RESTRIKTIONSVERDAU.54
3.3.4. BILANZ DER MUTAGENESE.54
3.4. EXPRESSION.56
3.4.1. ZELLKULTUR.56
3.4.2. TRANSFEKTION.57
3.4.3. EXPRESSIONSAUSBEUTE.57
3.5. ENZYMASSAY.57
3.5.1. PRAEZISION DES ASSAYS.58
3.5.2. LINEARITAET DES ASSAYS.58
3.6. KINETIK.58
3.6.1. HEMMKINETIK.59
3.6.2. DIXON PLOT.59
3.6.3. ZUSAMMENFASSUNG DER KINETISCHEN DATEN.61
3.7. ELISA.61
3.8. WESTERN BLOT. 62
4. DISKUSSION.63
4.1. KLINISCHE ASPEKTE.63
4.2. STRUKTURANALYSE.65
4.3. METHODISCHE ASPEKTE.68
4.3.1. MUTAGENESE.68
4.3.2. EXPRESSION.72
4.2.3. KINETIK.73
4.4. AUSBLICK.75
5. ZUSAMMENFASSUNG.76
6 . LITERATURVERZEICHNIS.77 |
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