Untersuchungen zur Expression von cab-Genen in Gartenkresse (Lepidium sativum L.):
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1993
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adam_text | 3- 05A A UNTERSUCHUNGEN ZUR EXPRESSION VON CAB-GENEN IN GARTENKRESSE
(LEPIDIUM SATIVUM L.) DISSERTATION ZUR ERLANGUNG DES DOKTORGRADES DER
FAKULTAET FUER BIOLOGIE DER LUDWIG-MAXIMILIANS-UNIVERSITAET MUENCHEN
VORGELEGT VON HARALD BRUNNER AUS ROSENHEIM MAERZ 1993 INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGEN V I. EINLEITUNG 1 I. MATERIAL UND METHODEN 10 11.1. ANZUCHT
UND MANIPULATION DES PFLANZENMATERIALS 10 11.1.1. ANZUCHT 10 11.1.2.
BEHANDLUNG MIT TESTSUBSTANZEN 10 11.1.2.1. ALA, 2,2 -BIPYRIDYL,
SS-THUJAPLICIN 10 11.1.2.2. PORPHYRINE 11 11.1.2.3. PORPHYRINEXTRAKTE 11
11.1.3. BELICHTUNG 11 11.2. QUANTITATIVE PIGMENTANALYSEN 12 11.2.1.
PROTOCHLOROPHYLLIDBESTIMMUNG 12 11.2.2. HPLC-ANALYSE VON PORPHYRINEN 12
11.3. SYNTHESE VON PORPHYRINEN 13 11.3.1. ZNPPIX .....13 11.3.2. MGPPIX
13 11.4. GEWINNUNG VON PORPHYRINEXTRAKTEN 13 11.5. ISOLIERUNG UND
ANALYSE VON DNS 14 11.5.1. ALLGEMEINE METHODEN 14 11.5.2. TRANSFORMATION
VON BAKTERIEN 14 11.5.3. ISOLIERUNG VON PLASMID-DNS 15 11.5.4.
PRAEPARATION GENOMISCHER DNS 17 11.5.5. DNS-GELELEKTROPHORESE 18 11.5.6.
DNS-SEQUENZIERUNG 18 11.5.7. AMPLIFIZIERUNG VON CDNS-ENDEN 19 11.5.7.1.
CDNS-ERSTSTRANGSYNTHESE 19 11.5.7.2. AMPLIFIZIERUNG 19 11.5.8. PARTIELLE
DELETION VON DNS 20 II 11.5.9. MARKIERUNG VON NUKLEINSAEUREN FUER
HYBRIDISIERUNGSEXPERIMENTE 21 11.5.9.1. PCR-MARKIERUNG 21 11.5.9.2.
SYNTHESE MARKIERTER ANTISENSE-RNS 22 11.5.9.3. REINIGUNG MARKIERTER
NUKLEINSAEUREN 23 11.5.10. DNS-MEMBRANTRANSFER 23 11.5.10.1. SOUTHERN
BLOT 23 11.5.10.2. SLOT BLOT 24 11.5.11. HYBRIDISIERUNG
FILTERGEBUNDENER DNS 24 11.5.11.1. HYBRIDISIERUNG MIT RADIOAKTIVEN
SONDEN 24 11.5.11.2. HYBRIDISIERUNG MIT DIGOXIGENIN-MARKIERTEN SONDEN 26
11.6. ISOLIERUNG UND ANALYSE VON RNS 26 11.6.1. ISOLIERUNG VON
GESAMT-RNS , 27 11.6.2. ISOLIERUNG VON POLY A + -RNS 27 11.6.3.
RNS-GELELEKTROPHORESE 28 11.6.4. RNS-MEMBRANTRANSFER 29 11.6.4.1.
NORTHERN BLOT 29 11.6.4.2. SLOT BLOT 29 11.6.5. HYBRIDISIERUNG
FILTERGEBUNDENER RNS 30 11.7. IN WFRO-TRANSKRIPTION MIT ISOLIERTEN
ZELLKERNEN 31 11.7.1. ISOLIERUNG DER ZELLKERNE 31 11.7.2. IN
V/RRO-TRANSKRIPTION 32 11.7.3. ISOLIERUNG UND HYBRIDISIERUNG IN VITRO
SYNTHETISIERTER TRANSKRIPTE : 32 III. ERGEBNISSE UND DISKUSSION 34
III.1. KLONIERUNG UND CHARAKTERISIERUNG VON 3 CDNS-ENDEN VERSCHIEDENER
CAB-GENE AUS KRESSE 34 111.1.1. PCR-AMPLIFIZIERUNG VON CAB-SPEZIFISCHER
CDNS 34 111.1.1.1. AUSWAHL DER PRIMER 34 111.1.1.2.
CDNS-ERSTSTRANGSYNTHESE UND PCR-REAKTION 36 111.1.2. KLONIERUNG UND
CHARAKTERISIERUNG DER PCR-PRODUKTE 37 III III. 1.3. SUBKLONIERUNG UND
CHARAKTERISIERUNG VON 3 CDNS-ENDEN ALS GENSONDEN 41 III. 1.4. MARKIERUNG
DER 3 GENSONDEN FUER HYBRIDISIERUNGSEXPERIMENTE 44 III.1.5. ANALYSE
GENOMISCHER KRESSE DNS 45 III. 1.6. DISKUSSION 49 III.2. EXPRESSION VON
CAB-GENEN IN KRESSE 51 111.2.1. VERWENDUNG RADIOAKTIV MARKIERTER
3 SONDEN BEI DER RNS-ANALYSE 51 111.2.2. ORGANSPEZIFISCHE EXPRESSION IN
GRUENEN PFLANZEN 52 111.2.3. EXPRESSION IN KEIMLINGEN VERSCHIEDENER
ENTWICKLUNGSSTUFEN 54 111.2.4. EXPRESSION IN ETIOLIERTEN KEIMLINGEN 56
111.2.4.1. INDUKTION DER CAB-GENEXPRESSION DURCH HR 57 111.2.4.2.
EXPRESSION NACH DR- UND BL-BELICHTUNGEN 59 111.2.5. VERGLEICH RELATIVER
TRANSKRIPTMENGEN FUER EINZELNE GENE 60 111.2.5.1. RELATIVE
TRANSKRIPTMENGEN IN EINZELNEN PFLANZENORGANEN 61 111.2.5.2. VERGLEICH
RELATIVER TRANSKRIPTMENGEN IN KOTYLEDONEN UND BLAETTERN 62 111.2.5.3.
RELATIVE TRANSKRIPTMENGEN IN ETIOLIERTEN UND HR-BELICHTETEN KEIMLINGEN
63 111.2.6. DISKUSSION 64 IV III.3. EINFLUSS VON CHL-VORSTUFEN AUF
TRANSKRIPTION UND MRNS-SPIEAEL DER CAB-GENFAMILIE 68 111.3.1.
ETABLIERUNG EINES IN WFRO-TRANSKRIPTIONSSYSTEMS MIT ISOLIERTEN
ZELLKERNEN 68 111.3.1.1. ISOLIERUNG TRANSKRIPTIONELL AKTIVER ZELLKERNE
68 111.3.1.2. CHARAKTERISIERUNG DER ISOLIERTEN ZELLKERNE UND DES IN
V/FRO-TRANSKRIPTIONSSYSTEMS 69 111.3.2. EINFLUSS VON 2,2 -BIPYRIDYL AUF
DIE TRANSKRIPTION IN ISOLIERTEN ZELLKERNEN 72 111.3.3.
PORPHYRINAKKUMULATION IN ETIOLIERTER KRESSE NACH ALA- UND
SS-THUJAPLICIN-INKUBATION 73 111.3.4. ALTERSABHAENGIGER EINFLUSS VON ALA
AUF DEN CAB-MRNS-SPIEGEL 76 111.3.5. EINFLUSS VON SS-THUJAPLICIN AUF
TRANSKRIPTION UND MRNS-SPIEGEL DER CAB-GENE 78 111.3.6. INKUBATION
ETIOLIERTER KEIMLINGE MIT PORPHYRINEN 84 111.3.6.1. SYNTHESE VON MG- UND
ZN-PROTOPORPHYRIN IX 84 111.3.6.2. INKUBATION MIT MGPPIX, ZNPPIX UND
HAEMIN 86 111.3.6.3. INKUBATION MIT PORPHYRINEXTRAKTEN 87 111.3.7.
DISKUSSION 89 IV. ZUSAMMENFASSUNG 93 V. LITERATUR 95
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