Identifizierung, Isolierung und strukturelle Analyse von Genen einer YPT-ähnlichen Genfamilie aus Zea mays (L.):
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
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1989
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| adam_text | IDENTIFIZIERUNG, ISOLIERUNG UND STRUKTURELLE ANALYSE VON GENEN EINER YP
J-AEHNLICHEN GENFAMILIE AUS ZEA MAYS (L.) . INAUGURAL-DISSERTATION ZUR
ERLANGUNG DES DOKTORGRADES DER MATHEMATISCH-NATURWISSENSCHAFTLICHEN
FAKULTAET DER UNIVERSITAET ZU KOELN VORGELEGT VON THOMAS DIEFENTHAL AUS
KOELN KOELN 1989 INHALTSVERZEICHNIS SEITE 1. EINLEITUNG 1.1. DIE
ENTDECKUNG DER G -PROTEINE 4 1.2. C -PROTEINE; EINE OBERSICHT 5 1.3. C
-PROTEINE IN PFLANZEN (?) 10 1.4. ZIELSETZUNG 11 2. ERGEBNISSE 2.1
BIOCHEMISCHE IDENTIFIZIERUNG VON G-PROTEINEN IN MEMBRAN- 13 FRAKTIONEN
VON N ICOTIANA TABACUM 2.2. LOKALISIERUNG G-SPEZIFISCH KONSERVIERTER
DOMAENEN IN RAS- 16 PROTEINEN DRUCH EINEN VERGLEICH IHRER
PRIMAERSTRUKTUREN 2.3. KONSTRUKTION VON RAS-SPEZIFISCHEN
OLLGONUKLEOTIDSONDEN 18 2.4. ISOLIERUNG EINER RAS-AEHNLICHEN
REKOMBINANTE AUS EINER CDNA 21 GENBANK VON ZEA MAYS (L.) MIT HILFE DER
OLIGONUKLEOTIDE 2.5. ISOLIERUNG WEITERER MITGLIEDER EINER KPRAHNLICHEN
GEN- 25 FAMILIE AUS ZEA MAYS (L.) 2.6. DNA SEQUENZ-CHARAKTERISIERUNG DER
ISOLIERTEN YPT-CDNA 26 KLONE AUS ZEA MAYS (L.) 2.7. ISOLIERUNG
GENOMISCHER, JPT-KLONE AUS ZEA MAYS (L.) 31 2.8. CHARAKTERISIERUNG DER
YPT-OENE IN PFLANZEN DURCH 33 SOUTHERN HYBRIDISIERUNGSANALYSE 2.9.
ANALYSE DER I-TT-EXPRESSION IN MAIS DURCH NORTHERN 36 HYBRIDISIERUNGEN
2.10. IN VITRO MUTAGENESE DER MAIS- YPT CDNA GENE MIT HILFE VON 42
OLIGONUKLEOTIDEN UND DNA-AMPLIFLKATIONEN 2.11. SYNTHESE EINES MAIS- YPT
CRO-P-GALAKTOSLDASE HYBRIDPROTEINES 45 IN E.COLI 2.12. SYNTHESE DER P23
MA.IS-YPTM PROTEINE IN E.COLI 48 2.13. GTP-BINDUNGSEIGENSCHAFTEN DES
YPTM3 GENPRODUKTES 50 2.14. KONSTRUKTION VON VEKTOREN FUER DIE YPTM3
EXPRESSION IN 52 SACCHAROMYCES CEREVLSIAE 2.15. KONSTRUKTION VON MAIS-
YPTM3 VEKTOREN FUER DIE EXPRESSION 54 IN NICOTIANA TABACUM 3. DISKUSSION
58 4. MATERIAL UND METHODEN 72 4.1 MATERIAL: 4.1.1. PFLANZEN 4.1.2.
BAKTERIEN 4.1.3. VEKTOREN, GENE 73 4.2. MEDIEN UND LOESUNGEN: 4.2.1.
BAKTERIENKULTURMEDIEN 4.2.2. PHAGENKULTURMEDLEN 4.2.3. PFLANZENMEDIEN
4.2.4. ANTIBIOTIKA, HORMONE UND SONSTIGE STAMMLOESUNGEN. 74 4.2.5. PUFFER
-1.PUFFER FUER NUKLEINSAEUREN * 75 -2.PUFFER FUER PROTEINE 76 -3.PUFFER FUER
ENZYMATISCHE UMSETZUNGEN 4.2.6. LOESUNGEN 77 4.3. CHEMIKALIEN,
RADIOAKTIVE UKLEOTIDE. ENZYME, GERAETE . 78 DATENVERARBEITUNG UND
SONSTIGE MATERIALIEN 4.4. METHODEN: 79 4.4.1. DNA-PRAEPARATIONSMETHODEN
-1.ISOLIERUNG GENOMISCHER PFLANZEN-DNA -2.ISOLIERUNG BAKTERIELLER
PLASMID-DNA -3.ISOLIERUNG VON LAMBDA-PHAGEN-DNA -4.ISOLIERUNG VON
ELNZELSTRAENGIGER PHAGEN-DNA 80 4.4.2. RNA-PRAEPARATIONSMETHODEN
-1.ISOLIERUNG VON RNA AUS PFLANZEN -2.ISOLIERUNG VON POLYA*-RNA 4.4.3.
TRENNUNG UND TRANSFER VON NUKLEINSAEUREN -1. SOUTHERN BLOT -ANALYSEN
-2. NORTHERN BLOT -ANALYSEN 81 -3.ELUTION VON DNA AUS AGAROSEGELEN
-4.DNA-SEQUENZIERUNG 4.4.4. HYBRIDISIERUNG FILTERGEBUNDENER DNA UND RNA
-1.HYBRIDISIERUNG MIT OLIGONUKLEOTIDEN -2.HYBRIDISIERUNG MIT DNA UND RNA
82 -3.REHYBRIDISIERUNG 4.4.5. KLONIERUNGS- UND KULTIVIERUNGSTECHNIKEN IN
BAKTERIEN UND PHAGEN -1.MIKROBIOLOGISCHE UND BIOCHEMISCHE BASISTECHNIKEN
-2.KONSTRUKTION EINER C-DNA GENBANK 83 -3.DNA-AMPLIFIKATLON UND
MUTAGENESE 84 -4.HERSTELLUNG DER EXTRAKTE FUER DIE IN VITRO VERPACKUNG
VON REKOMBLNANTER LAMBDA-DNA -5.KONJUGATION ZWISCHEN E.COLI UND
AGROBACTERTUM 4.4.6. KULTLVLERUNGS- UND TRANSFORMATIONSTECHNIKEN VON
PFLANZEN 85 -1.KULTIVIERUNG VON N. TABACUM UND Z.MAYS PFLANZEN
-2.KULTIVIERUNG DER ZELLSUSPENSLONSLLNLEN VON N.TABACUM UND Z.MAYS
-3.TRANSFORMATION VON TABAKGEWEBE DURCH WUNDINFEKTION MIT AGROBAKTERIEN
-4.TRANSFORMATION VON MALSGEWEBE DURCH MERLSTEMATISCHE 86 INJEKTION MIT
AGROBAKTERIEN 4.4.7. MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN BEI HEFEN 4.4.8.
EXPRESSION, EXTRAKTION UND REINIGUNG VON PROTEINEN -1.IDENTIFIZIERUNG
VON G-PROTEINEN IN MEMBRANEN VON N.TABACUM -2.EXPRESSION UND REINIGUNG
EINES MAIS-LOT/CRO-0- 87 GALAKTOSIDASE FUSLONSPROTEINES IN E.COLI
-3.SCHNELLPRAEPARATION VON BAKTERIELL, SYNTHETISIERTEN PROTEINEN
-4.EXPRESSION VON MALS- KPF-PROTEINEN IN E.COLI 88
-OE.SDS-POLYACRYLAMLD-GEL-ELEKTORPHORESE (SDS-PAGE) UND WESTERN
BLOT -TECHNIK 4.4.9. CHARAKTERISIERUNG ENZYMATLSCHER EIGENSCHAFTEN VON
GTP- 89 BINDENDEN PROTEINEN -1.BESTIMMUNG DER GTP-BLNDUNGSAKTLVLTAET
-2.BESTIMMUNG DER GTPASE-AKTLVLTAET -3.SPEZIFISCHER GTP-BLNDUNGSTEST
VON MEMBRANGEBUNDENEN G-PROTEINEN 5. ZUSAMMENFASSUNG 90 6. ANHANG 6.1.
LISTE DER ABKUERZUNGEN 92 6.2. LISTE DER ABBILDUNGEN 94 6.3. LISTE DER
TABELLEN 95 6.4. SEQUENZEN 96 6.4.1. SEQUENZ DER YPTML CDNA 96 6.4.2.
SEQUENZ DER YPTM2 CDNA 97 6.4.3. SEQUENZ DER YPTM3 CDNA 98 6.4.4.
AUFLISTUNG DER AMINOSAEURESEQUENZEN 99 6.5. DANKSAGUNG 100 6.6.
LITERATURVERZEICHNIS 101
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