Elektronenmikroskopische Methodik in der Zell- und Molekularbiologie: ein kritischer Leitfaden zur biologischen Ultrastrukturforschung für Biologen und Mediziner ; 23 Tabellen
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Fischer
1987
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INHALT
1. EINFUEHRUNG 1
1.1. MODERNE KONZEPTE DER ZEIL- UND MOLEKULARBIOLOGIE AUS DER SICHT DES
ELEKTRONENMIKROSKOPIKERS 1
1.2. DIE MOEGLICHKEITEN UND GRENZEN DES ELEKTRONENMIKROSKOPES 7
2. DAS ELEKTRONENMIKROSKOP 10
2.1. DIE SIGNALENTSTEHUNG IM ELEKTRONENMIKROSKOP 10
2.2. DIE ARBEITSWEISEN ELEKTRONENMIKROSKOPISCHER GERAETE 14
2.3. DIE BILDENTSTEHUNG IM TRANSMISSIONSELEKTRONENMIKROSKOP 19 2.4.
SPEZIELLE ABBILDUNGSVERFAHREN IN DER DURCHSTRAHLUNGSELEKTRONEN-
MIKROSKOPIE 24
2.4.1. ELEKTRONENBEUGUNG UND DUNKELFELDABBILDUNG 24
2.4.2. ENERGIEVERLUST-SPEKTROSKOPISCHE VERFAHREN UND Z-KONTRAST 27 2.5.
OBERFLAECHENABBILDUNG 27
2.6. BILDREGISTRIERUNG 29
3. PRAEPARATIONS- UND UNTERSUCHUNGSVERFAHREN UNTER STRUKTURELLEN
GESICHTSPUNKTEN 31
3.1. CHEMISCHE METHODEN 31
3.1.1. CHEMISCHE FIXATION 34
3.1.2. OSMOTISCHE EMPFINDLICHKEIT UND PERMEABILISIERUNG VON ZELLEN . .
.. 42 3.1.3. DEHYDRATATION 43
3.1.4. EINBETTUNG UND ULTRADUENNSCHNITTE 45
3.1.5. KONTRASTIERUNG (STAINING) 48
3.2. PHYSIKALISCHE METHODEN 49
3.2.1. KRYOFIXATION UND GEFRIERSUBSTITUTION 49
3.2.2. ULTRAKRYOTOMIE 62
3.2.3. GEFRIERBRUCH UND GEFRIERAETZUNG 63
3.2.4. OBERFLAECHENABDRUECKE 69
3.2.5. GEFRIERTROCKNUNG UND KRITISCH-PUNKT-TROCKNUNG 79
3.2.6. OBERFLAECHENBESCHICHTUNG 83
3.2.7. RASTERELEKTRONENMIKROSKOPIE VON OBERFLAECHEN 85
3.2.8. VERWENDUNG VON RUECKSTREUELEKTRONEN ALS SIGNAL 88
3.2.9. HOCHVOLT-ELEKTRONENMIKROSKOPIE 88
4. PRAEPARATIONS- UND UNTERSUCHUNGSVERFAHREN UNTER FUNKTIONELLEN
GESICHTSPUNKTEN 91
4.1. SPEZIFISCHE KONTRASTIERUNGEN UND ENZYMATISCHER ABBAU 91
4.2. ENZYMCYTOCHEMIE 100
4.3. MARKERMOLEKUELE 117
IX
IMAGE 2
4.4. IMMUNCYTOCHEMIE 125
4.5. MARKIERUNG MIT LECTINEN 138
4.6. AFFINITAETSMARKIERUNGEN 142
4.7. AUTORADIOGRAPHIE 149
4.8. MORPHOMETRIE 158
4.9. ROENTGENMIKROANALYSE 163
4.10. ELEKTRONEN-ENERGIEVERLUST-ANALYSE UND ELEKTRONEN-ENERGIEVERLUST-
SPEKTROSKOPISCHE ABBILDUNG 174
4.11. IONENFAELLUNG 176
5. MOLEKULARE ELEKTRONENMIKROSKOPIE 178
5.1. ALLGEMEINE ASPEKTE 178
5.2. STRAHLENSCHAEDEN 180
5.3. PRAEPARATIVE FRAGEN 183
5.3.1. TRAEGERFOLIEN 183
5.3.2. NEGATIVKONTRASTIERUNG (NEGATIVE STAINING) 186
5.3.3. STUETZSUBSTANZEN (SUSTAINING) 190
5.3.4. HYDRATISIERTE OBJEKTE 191
5.3.5. NUCLEINSAEUREN UND CHROMATIN 192
5.3.6. KARTIERUNG VON MOLEKUELREGIONEN 198
5.4. GERAETETECHNISCHE ASPEKTE 201
5.5. DATENANALYSE (BILDVERARBEITUNG) 206
6. EINHEITEN UND KONVENTIONEN 214
7. AUSBLICK 216
8. NACHWORT 218
9. LITERATUR 219
10. REZEPTTEIL 273
10.1. CHEMISCHE FIXIERUNG (STANDARDMETHODE FUER ULTRADUENNSCHNITTECHNIK) .
273 10.2. KOMBINIERTE FORMALDEHYD-GLUTARALDEHYD-FIXIERUNG 274
10.3. PERFUSIONSFIXIERUNG VON SAEUGETIERGEWEBE 274
10.4. PERJODAT-LYSIN-PARAFORMALDEHYD-FIXIERUNG FUER DIE IMMUNCYTOCHEMIE .
275 10.5. FIXATION VON PFLANZENGEWEBE MIT PERMANGANAT 276
10.6. FIXATION VON BAKTERIEN 276
10.7. TANNINIMPRAEGNATION 277
10.8. FAERBUNG NEGATIVER OBERFLAECHEN MIT KATIONISIERTEM FERRITIN 277
10.9. FAERBUNG VON POLYSACCHARIDEN AN MEMBRANEN MIT RUTHENIUMROT . . .
278 10.10. GEFRIERSUBSTITUTION 278
10.11. ENTWAESSERUNG DER PROBEN FUER EINBETTUNG UND ULTRADUENNSCHNITTECHNIK
279 10.12. IMPRAEGNATION MIT EINBETTUNGSMITTEL 279
10.13. ALLGEMEINE BEMERKUNGEN ZUR EINBETTUNG 280
10.14. EINBETTUNG IN NIEDERVISKOSEN EPOXIDHARZEN 280
10.15. EINBETTUNG IN EPON 812 281
X
IMAGE 3
10.16. EINBETTUNG IN DURCUPAN ACM (FLUKA) 281
10.17. EINBETTUNG IN LOWICRYL K4M 282
10.18. REINIGUNG VON DIAMANTMESSERN 282
10.19. HERSTELLUNG VON TRAEGERFOLIEN 282
10.20. STANDARDMETHODE DER SCHNITTKONTRASTIERUNG 283
10.21. SCHNITTKONTRASTIERUNG MIT PERMANGANAT 284
10.22. SCHNITTKONTRASTIERUNG MIT WISMUTTARTRAT 284
10.23. SCHNITTKONTRASTIERUNG MIT HEISSEM ALKOHOLISCHEM URANYLACETAT . .
.. 285 10.24. ENZYMATISCHER ABBAU AM ULTRADUENNSCHNITT 285
10.25. SEMIDUENNSCHNITTE FUER LICHTMIKROSKOPISCHE KONTROLLEN 285
10.26. REINIGUNG VON GEFRIERAETZREPLIKAS 286
10.27. MONTAGE VON PROBEN FUER DIE OBERFAECHENABBILDUNG MITTELS RASTER-
ELEKTRONENMIKROSKOP 286
10.28. STANDARDMETHODE ZUR KRITISCH-PUNKT-TROCKNUNG 286
10.29. ALLGEMEINE BEMERKUNGEN ZUR ENZYMCYTOCHEMIE-GEWEBEZERHACKER
(TISSUE CHOPPER) 287
10.30. NACHWEIS (PER-)OXIDATIVER ENZYME MIT 3,3 -DIAMINOBENZIDIN (DAB) .
287 10.31. LOKALISIERUNG VON SUCCINATDEHYDROGENASE 288
10.32. NACHWEIS VON CHOLINESTERASEN MIT DER THIOCHOLIN-KUPFERROCYANID-
METHODE 288
10.33. NACHWEIS DER SAUREN PHOSPHATASE 289
10.34. CYTOCHEMISCHE DARSTELLUNG VERSCHIEDENER HYDROLASEN MITTELS
CER-IONEN 290
10.35. PEROXIDASE-MARKIERUNG (KONJUGATION) VON PROTEINEN FUER AFFINITAETS-
UND IMMUNMARKIERUNG 291
10.36. LECTIN-PEROXIDASE MARKIERUNG VON GLYKOSYLRESTEN AN
ZELLOBERFLAECHEN 291 10.37. LOKALISIERUNG INTRAZELLULAERER
STRUKTURGEBUNDENER ANTIGENE 292 10.38. LOKALISIERUNG INTRAZELLULAERER
LECTINBINDUNGSSTELLEN MITTELS PEROXIDASE- KONJUGATEN 293
10.39. HERSTELLUNG VON KOLLOIDALEN GOLDPARTIKELN DEFINIERTER GROESSE 294
10.40. PROTEINBESCHICHTUNG (LECTINE, PROTEIN A, ANTIKOERPER) VON
KOLLOIDALEN GOLDPARTIKELN 294
10.41. IMMUNMARKIERUNG VON ZELLOBERFLAECHEN MITTELS PROTEIN A-GOLD UND
RE- PLIKA TECHNIK 295
10.42. GEFRIERBRUCH-MARKIERUNGSMETHODE FUER ZELLOBERFLAECHEN,
FRACTURELABEL 296
10.43. HERSTELLUNG VON FERRITIN-ANTIKOERPER-KONJUGATEN FUER DIE IMMUNCYTO-
CHEMIE 297
10.44. IMMUNCYTOCHEMISCHE OBERFLAECHENMARKIERUNG (HAEMOCYANIN-PROTEIN A)
FUER DIE RASTERELEKTRONENMIKROSKOPIE 297
10.45. ELEKTRONENMIKROSKOPISCHE AUTORADIOGRAPHIE 298
10.46. SEMIDUENNSCHNITTE FUER DIE LICHTOPTISCHEN KONTROLLEN DER AUTORADIO-
GRAPHIE 300
10.47. PRAEPARATION FUER DIE ROENTGENMIKROANALYSE AN ULTRADUENNSCHNITTEN . .
. 301 10.48. PRAEPARATION VON DUENNSCHNITTEN FUER DIE
ELEKTRONENENERGIEVERLUST- SPEKTROSKOPIE (EELS) 301
10.49. NEGATIVKONSTRASTIERUNG VON SUSPENSIONEN 301
XI
IMAGE 4
10.50. ADSORPTION UND METALL-BEDAMPFUNG VON MAKROMOLEKUELEN AUF
EM-TRAEGERNETZCHEN 302
10.51. SPREITUNGS- UND BEDAMPFUNGSTECHNIK FUER DNS 303
10.52. PROTEINFREIE SPREITMETHODE FUER DIE DARSTELLUNG VON DNS MIT
BENZYL- DIMETHYLALKYLAMMONIUMCHLORID (BAC) 303
VERZEICHNIS VON LIEFERFIRMEN 305
AUTORENREGISTER 307
SACHREGISTER 317
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