Hormonale und pharmakologische Beeinflussung der Angiotensinogensynthese in Hepatocyten:
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DER DOKTORWUERDE DER NATURWISSENSCHAFTLICH-MATHEMATI SEHEN GESAMTFAKUITAET
DER RUPRECHT-KARLS-UNIVERSI TAT HEI DELBERG VORGELEGT VON APOTHEKER
MICHAEL STUZMANN AUS HEIDELBERG 1985 INHALTSVERZEICHNIS EINLEITUNG 1 1.
DAS RENIN-ANGIOTENSIN-SYSTEM UND SEIN EFFEKTOR ANGIOTENSIN II 1 2. DIE
BIOSYNTHESE VON GLYCOPROTEINEN . 6 3. ANGIOTENSINOGEN 9 - STRUKTUR 9 -
SYNTHESE- 11 - REGUL ATION * 12 4. PROBLEMSTELLUNG * 14 MATERIALIEN
UND METHODEN 15 1. TIERE 15 1.1 UNVORBEHANDELTE TIERE 15 1.2
NEPHREKTOMIERTE TIERE 15 2. PRAEPARATION VON HEPATOCYTEN 16 2.1
MATERIALIEN 16 2.2 ENTNAHME DER LEBER 19 2.3 PERFUSION UND
HEPATOCYTENGEWINNUNG 21 2.3.1 CALCIUMFREIE VORPERFUSION 21 2.3.2
PERFUSION MIT COL1AGENASELOESUPG 21 2.3.3 INKUBATION IN COLLAGENASELOESUNG
22 2.3.4 GEWINNUNG DER PRIMAERSUSPENSION 22 2.4 REINIGUNG VON
PARENCHYMZEL1EN 23 2.4.1 DIFFERENTIALZENTRIFUGATION IN WASCHMEDIUM C 23
2.4.2 DER PERCOLLGRADIENT 24 2.4.3 SIEBEN UND VERDUENNEN 25 3.
CHARAKTERISIERUNG DER ZEL1 SUSPENSION 26 3.1 BESTIMMUNG VON ZELLZAHL UND
LEBENSFAEHIGKEIT 26 3.2 BESTIMMUNG DES MEMBRANPOTENTIALS 27 3.3
BESTIMMUNG VON FEUCHT- UND TROCKENGEWICHT 27 4. INKUBATION . 28 4.1
INKUBATIONSMEDIEN 28 4.2 ZUSAETZE ZUR ZEIL SUSPENSION 30 4.3 DURCHFUEHRUNG
DER INKUBATION * 33 5. PROBENAUFARBEITUNG 34 5.1 ZELLULAERES
GESAMTPROTEIN * 34 5.2 ANGIOTENSINOGEN UND ALBUMIN 34 5.3 EINBAUVERSUCHE
, * 35 6. EINBAU VON MARKIERTEN ZUCKERN UND AMINOSAEUREN IN TRICHLOR-
ESSIGSAEUREFAELIBARE PROTEINE 36 6.1 TRICHLORESSIGSAEUREFAEL1UNG, ZAEHLEN 36
6.2 ZAEHLAUSBEUTE, QUENCHPROBLEM 37 7. BESTIMMUNG VON ANGIOTENSINOGEN UND
RENIN 39 7.1 DER ANGIOTENSIN I RADIOIMMUNOASSAY 39 7.1.1 MATERIALIEN 39
7.1.2 DURCHFUEHRUNG 41 7.2 BESTIMMUNG DER PLASMA-RENIN-KONZENTRATION (PRO
41 7.2.1 MATERIALIEN 41 7.2.2 DURCHFUEHRUNG 42 7.3
ANGIOTENSINOGENBESTIMMUNG 42 7.3.1 MATARIALIEN 43 7.3.2 DURCHFUEHRUNG -
43 7.4 ENTWICKLUNG UND UEBERPRUEFUNG DES ZUR ANGIOTENSINOGEN- BESTIMMUNG
VERWENDETEN ENZYMATISCH-INDIREKTEN VERFAH- RENS 44 8. RENINPRAEPARATION
48 8.1 MATERIALIEN 48 8.2 DURCHFUEHRUNG 49 8.3 ERGEBNISSE 50 9.
ALBUMINBESTIMMUNG 54 9.1 MATERIALIEN 54 9.2 DURCHFUEHRUNG 60 9.3
CHARAKTERISIERUNG UND UEBERPRUEFUNG DES ALBUMIN-RADIOIMMUNOASSAYS 61 10.
PROTEINBESTIMMUNG NACH LOWRY 63 10.1 REAGENTIEN . 63 10.2 DURCHFUEHRUNG
. 63 11. STATISTIK 64 11.1 MITTELWERT UND MITTLERER FEHLER DES
MITTELWERTS 64 11.2 VERGLEICH ZWEIER MITTELWERTE , 64 11.3 KORRELATION
UND REGRESSION 65 ERGEBNISSE 67 1. OPTIMIERUNG UND CHARAKTERISIERUNG DES
PRAEPARATIONSVERFAH- RENS FUER HEPATOCYTEN 67 1.1 ZUSATZ EINES
CALCIUM-CHEL ATORS ZUR CALCIUMFREIEN VORPERFU- SION 68 1.2 EINFLUSS
VERSCHIEDENER COLLAGENASECHARGEN AUF LEBENSFAEHIG- - KEIT UND
ZELLAUSBEUTE DER HEPATOCYTENPRAEPARATION 69 1.3 EINFLUSS DES
NACHINKUBATIONSVERFAHRENS AUF ZELLAUSBEUTE UND ZELLQUALITAET 71 1.4
ABTRENNUNG VON NICHT-PARENCHYMZELLEN UND DEFEKTEN HEPA- TOCYTEN 73 1.5
CHARAKTERISIERUNG DER NACH DEM OPTIMIERTEN PRAEPARATIONS- UND
REINIGUNGSVERFAHREN ERHALTENEN HEPATOCYTENSUSPENSION 78 2.
CHARAKTERISIERUNG UND OPTIMIERUNG DER INKUBATIONSBEDIN- GUNGEN FUER
HEPATOCYTENSUSPENSIONEN UNTER BESONDERER BERUECKSICHTIGUNG DER
ANGIOTENSINOGENSYNTHESE 80 2.1 EINFLUSS DER INKUBATIONSDAUER AUF
SYNTHESELEISTUNGEN UND LEBENSFAEHIGKEIT DER HEPATOCYTEN 80 2.2
ABHAENGIGKEIT DER ANGIOTENSINOGENSYNTHESE VON ZELLKONZEN- TRATION UND
INKUBATIONSVOLUMEN 84 2.3 EINFLUSS VON ANSATZGEFAESSEN,
SCHUETTELGESCHWINDIGKEIT UND WASSERBAD AUF ANGIOTENSINOGENSEKRETION UND
LEBENSFAEHIG- KEIT VON HEPATOCYTEN 87 2.4 EINFLUSS DES INKUBATIONSMEDIUMS
AUF ANGIOTENSINOGENSYNTHE- SE, LEBENSFAEHIGKEIT UND KATABOLISMUS VON
HEPATOCYTEN 91 3. FUNKTIONELLE UNTERSUCHUNGEN ZU SYNTHESE UND SEKRETION
VON PROTEINEN DURCH HEPATOCYTENSUSPENSIONEN UNTER BESONDERER
BERUECKSICHTIGUNG DES GLYCOPROTEINS ANGIOTENSINOGEN 97 3.1 DE NOVO
SYNTHESE VON ANGIOTENSINOGEN 97 3.2 UNTERSUCHUNGEN ZUR M-RNA NEUSYNTHESE
IN HEPATOCYTENSUSPEN- SIONEN 99 3.3 UNTERSUCHUNGEN MIT COLCHICIN UND
VINBLASTIN 101 3.4 UNTERSUCHUNGEN ZUR ROLLE DER PROTEINGLYCOSILIERUNG
FUER SYNTHESE, SEKRETION UND KATABOLISMUS DER VON HEPATOCYTEN-
SUSPENSIONEN GEBILDETEN PROTEINE 105 4. EINFLUSS VON HORMONEN UND ANDEREN
FAKTOREN AUF DIE PRO- TEINBIOSYNTHESE IN HEPATOCYTENSUSPENSIONEN 114 4.1
EINFLUSS EINER BEIDSEITIGEN NEPHREKTOMIE DES VERSUCHSTIE- RES AUF DIE
GESAMTPROTEINSYNTHESE UND DIE ANGIOTENSINO- GENSEKRETION VON HEPATOCYTEN
114 4.2 WIRKUNG VON INSULIN AUF DIE SYNTHESELEISTUNGEN VON HEPA- TOCYTEN
117 4.3 UNTERSUCHUNGEN ZUR STIMULIERBARKEIT DER ANGIOTENSINOGEN-
SYNTHESE DURCH ANGIOTENSIN II 119 DISKUSSION , 122 ZUSAMMENFASSUNG 138
LITERATUR 143
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