Grundlagen der enzymatischen Analyse:
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| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Weinheim [u.a.]
Verl. Chemie
1977
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Inhaltsverzeichnis
Vorwort . V
Inhaltsverzeichnis. VII
Verzeichnis der Autoren. XI
Verzeichnis der Abkürzungen. XIII
I. Einführung
1. Begriffe, Bedeutung und Grenzen der enzymatischen Analyse . 1
2. Nomenklatur und Einheiten in der Enzymologie . 6
II. Theoretische Grundlagen
1. Reaktionskinetik
1.1. Die Basis der Reaktionskinetik . 13
1.2. Kinetik Enzym-katalysierter Reaktionen. 18
2. Bestimmung von Michaelis-Konstanten und Inhibitor-Konstanten
2.1. Michaelis-Konstanten. 30
2.2. Inhibitor-Konstanten. 36
3. Bestimmung der Substanz-Konzentration von Metaboliten (Endwert-Methoden)
3.1. Einfache Endwert-Methoden . 41
3.2. Messungen mit Hilfe gekoppelter Reaktionen. 48
4. Bestimmung der katalytischen Aktivität von Enzymen
4.1. Die katalytische Aktivität beeinflussende Faktoren . 58
4.2. Ermittlung optimaler Substanz-Konzentration der Substrate. 62
4.3. Ermittlung optimaler Bedingungen der Hilfs- und Indikator-Reaktion
bei gekoppelten Enzymreaktionen . 71
4.4. Zur Meßtechnik . 78
5. Bestimmung von Substanz-Konzentrationen von Metaboliten (kinetische
Methoden)
5.1. Reaktionskinetische Basis . 81
5.2. Kinetische Tests . 83
5.3. Katalytische Tests . 86
5.4. Kinetik des „Enzymatic Cycling". 89
6. Visualisierung NAD(P)-abhängiger Reaktionen
6.1. Tetrazoliumsalze und ihre Reduktion . 91
6.2. Anwendung auf enzymatische Reaktionen . 94
VIII Inhaltsverzeichnis
7. Prinzip des Enzym-Immunoassay
7.1. Einführung . 96
7.2. Heterogener Enzym-Immunoassay (EIA/ELISA) . 96
7.3. Homogener Enzym-Immunoassay (EMIT) . 99
7.4. Folgerung . 100
III. Umgang mit biochemischen Reagentien und Probematerial
1. Reagentien für die enzymatische Analyse
1.1. Nomenklatur, Abkürzungen und Standardisierung. 103
1.2. Qualitätsanforderungen. 104
1.3. Lagerung, Stabilität und Kontrolle der Substanzen und Lösungen. 111
2. Die Probe
2.1. Probenahme. 114
2.2. Stabilität von Metaboliten und Enzymen in der Probe. 115
2.3. Vorbereitung der Probe zur Analyse. 119
IV. Meßtechniken und Geräte
1. Volumen-Dosierung
1.1. Einleitung . 125
1.2. Pipetten. 128
1.3. Mechanische Dosiergeräte . 138
2. Absorptionsphotometrie
2.1. Meßprinzip und Begriffe. 142
2.2. Meßraum, Meßgefäße, Messung und Auswertung . 150
2.3. Systembedingte Fehler und Kontrollmethoden . 154
3. Andere Meßtechniken
3.1. Konduktometrie . 160
3.2. Potentiometrie und Polarometrie . 163
3.3. Mikrocalorimetrie. 171
3.4. Meßtechniken mit immobilisierten Enzymen . 176
4. Die Automation der Analyse
4.1. Automaten für die enzymatische Analyse. 184
4.2. Arbeitstechnik mit Analysenautomaten. 191
4.3. Das Schnell-Analysensystem (Fast Analyzer). 203
5. Enzymatische Analyse mit Radiobiochemikalien
5.1. Allgemeines. 212
5.2. Bestimmung von Substraten mit Radiobiochemikalien. 214
5.3. Bestimmung der katalytischen Aktivität von Enzymen mit Radiobiochemikalien . 217
Inhaltsverzeichnis IX
V. Ermittlung und Beurteilung von Meßergebnissen
1. Meßdaten. 223
2. Meßergebnisse und Bezugsgrößen. 226
3. Beurteilung und Kontrolle der Qualität von Meßergebnissen
3.1. Statistische Verfahren und Begriffe. 229
3.2. Rechnerische Versuchsauswertung. 234
3.3. Beurteilende Statistik. 236
3.4. Qualitätskontrolle. 244
4. Formeln . 247
Sachregister. 251
Anhang
Numerierung und Klassifizierung von Enzymen. 262
Atomgewichte. 267
Bericht über das neue SI-Einheitensystem. 268 |
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