Einführung in die praktische Mikrobiologie: mikrobiologische Arbeitsmethoden und Versuche
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Format: | Buch |
Sprache: | German |
Veröffentlicht: |
Frankfurt am Main u.a.
Diesterweg u. a.
1983
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Ausgabe: | 1. Aufl. |
Schriftenreihe: | Laborbücher Biologie
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Schlagworte: | |
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adam_text | Mikrobiologische Arbeitsmethoden und Versuche
Vorwort
1 Methodische Grundlagen der Mikrobiologie.................... 7
1.1 Umgang mit Mikroorganismen........................... 7
1.2 Bereitung von Nährböden.............................. 9
1.3 Sterilisationstechniken ............................... 13
1.3.1 Sterilisation durch trockene Hitze ..................... 14
1.3.2 Sterilisation durch feuchte Hitze (Dampf)................. 15
1.3.3 Andere Sterilisationsmethoden....................... 18
1.4 Kulturgefäße..................................... 18
1.5 Impftechniken.................................... 22
1.6 Kulturtechniken................................... 27
1.7 Beschaffung und Aufbewahrung von Mikroorganismen............. 30
2 Übersicht über mikroskopische Methoden ..................... 33
2.1 Lichtmikroskopische Methoden.......................... 33
2.2 Elektronenmikroskopische Methoden....................... 34
3 Untersuchungsmethoden für Pilze.......................... 39
3.1 Mikroskopische Untersuchung an lebenden Pilzzellen.............. 39
3.1.1 Einfaches Frischpräparat.......................... 39
3.1.2 Vitalfärbung................................. 39
3.1.3 Objektträgerkultur.............................. 39
3.1.4 Klebstreifenmethode ............................ 40
3.2 Einfache Methoden zur Untersuchung von pilzinfiziertem Material....... 40
3.2.1 Quetschpräparat............................... 41
3.2.2 Schnittpräparat ............................... 41
3.3 Messung der Objektgröße im Mikroskop ..................... 42
4 Morphologische und cytologische Untersuchung von Bakterien.......... 44
4.1 Untersuchung und Beschreibung von Bakterienkolonien............. 44
4.2 Beobachtung lebender Bakterien.......................... 45
4.2.1 Einfaches Deckglaspräparat........................ 45
4.2.2 Hängetropfenpräparat ........................... 46
4.2.3 Objektträgerkultur.............................. 47
4.2.4 Prüfung der Beweglichkeit......................... 49
4.3 Untersuchung fixierter und gefärbter Bakterien.................. 49
4.3.1 Herstellung eines hitzefixierten Ausstrichs................. 50
4.3.2 Einfache Färbung zur Kontrastierung................... 52
4.3.3 GRAM-Färbung................................ 52
4.3.4 Sporenfärbung................................ 53
3
4.3.5 Geißelfärbung nach Leifson........................ 54
4.3.6 Negativdarstellung von Bakterien..................... 54
5 Anreicherung»- und Reinkulturverfahren...................... 56
5.1 Anreicherung und Isolierung von Pilzen...................... 58
5.1.1 Anreicherungsverfahren........................... 59
5.1.2 Reinkulturverfahren............................. 62
5.2 Anreicherung und Isolierung von Bakterien.................... 63
5.2.1 Bacillus subtilis................................ 63
5.2.2 Micrococcus luteus.............................. 65
5.2.3 Janthinobacterium lividum.......................... 67
5.2.4 Proteus vulgaris................................ 69
5.2.5 Pseudomonasfluorescens.......................... 70
5.2.6 Leuchtbakterien............................... 70
5.2.7 Phototrophe Schwefelbakterien ...................... 71
5.2.8 Anreicherung und Kultur buttersäurebildender Clostridien („Butter-
säurebakterien ) ............................... 73
5.2.9 Nachweis und Isolierung von Mikroorganismen in der Umgebung des
Menschen .................................. 77
6 Identifizieren von Bakterien............................. 79
7 Nachweis von physiologischen und biochemischen Leistungen............ 83
7.1 Nachweis des oxidativen bzw. fermentativen Abbaus von Zuckern (Oxidations-
Fermentations-Test)................................. 83
7.2 Katalase- und Oxidasenachweis.......................... 85
7.3 Nachweis des Stärkeabbaus............................. 85
7.4 Nachweis eiweißabbauender (proteolytischer) Enzyme.............. 86
7.5 Untersuchung der Säure- und Gasbildung aus verschiedenen Zuckern - kleine
„Bunte Reihe .................................... 87
7.6 Methylrot-und VoGES-PROSKAUER-Reaktion................... 88
7.7 Nachweis von Abbauprodukten des Eiweißstoffwechsels (H2S, Indol, Ammo-
niak) ......................................... 89
7.8 Nachweis der Citratverwertung........................... 90
7.9 Nachweis der Phenylalanindesaminase im Schnelltest.............. 91
7.10 Nachweis der Nitratreduktion........................... 91
7.11 Multitest zum Nachweis mehrerer Stoffwechselleistungen............ 92
7.12 Übersicht über vereinfachte mikrobiologische Bestimmungsverfahren an Hand
physiologischer und biochemischer Leistungen.................. 93
8 Methoden zur Bestimmung der Konzentration und Dichte von Mikroorganismen . 96
8.1 Messung der Zellkonzentration (Zellzahl/ml)................... 96
8.1.1 Bestimmung der Gesamtzellzahl...................... 97
8.1.2 Bestimmung der Lebendzellzahl...................... 99
8.2 Bestimmung der Dichte von Mikroorganismen.................. 101
8.2.1 Gewichtsbestimmung............................ 101
8.2.2 Volumetrische Messung........................... 102
8.2.3 Trübungsmessung.............................. 102
8.2.4 Weitere Methoden.............................. 104
8.3 Wachstumsmessungen an Pilzhyphen....................... 104
8.4 Versuche zur Bestimmung der Konzentration und Dichte von Mikroorganis-
men .......................................... 105
8.4.1 Ermittlung der Gesamtzellzahl einer Kultur von Escherichia coli mit der
Zählkammer................................. 105
8.4.2 Bestimmung der Keimzahl (Lebendzellzahl) einer Kultur von E. coli
durch Plattieren............................... 107
8.4.3 Photometrische Trübungsmessung und Erstellung einer Eichkurve für
das Wachstum von E. coli.......................... 107
8.4.4 Photometrische Wachstumsmessung bei einer Kultur von E. coli .... 110
8.4.5 Bestimmung des Ertrags einer Kultur von Saccharomyces cerevisiae
(Bäckerhefe)................................. 110
9 Methoden zum Nachweis und zur Untersuchung der Wirksamkeit
von Hemmstoffen................................... 112
9.1 Nachweis der Antibiotikumproduktion bei Penicillium notatum im Strichtest . . 115
9.2 Untersuchung der Penicillinwirkung im Agarzylindertest............. 115
9.3 Untersuchung der antibiotischen Aktivität eines Kulturfiltrats von Penicillium
notatum........................................ 116
9.4 Bestimmung der Penicillinkonzentration mittels Antibiogramm......... 118
9.5 Anwendung des Keimschichtverfahrens bei der quantitativen Bestimmung von
Antibiotika...................................... 120
9.6 Untersuchung der Wirkung keimschädigender Substanzen durch die Suspen-
sionsmethode .................................... 121
10 Versuche mit dem BaeteriophagenT 4........................ 123
10.1 Gewinnung von Phagenlysat............................ 124
10.2 Bestimmung des Phagentiters in einem Lysat................... 124
11 Untersuchung von keimhaltigen Substraten..................... 126
11.1 Ermittlung der Gesamtkeimzahl (Koloniezahl) und Coli-Zahl in einer Wasser-
probe ......................................... 126
11.2 Untersuchungen zur Mikrobiologie des Bodens.................. 131
11.2.1 Nachweis einiger physiologischer Leistungen von Bodenmikroorganis-
men ...................................... 131
11.2.2 Bestimmung der Keimzahl im Boden ................... 132
Hinweise für den Aufbau eines Anfängerpraktikums.................... 135
Anhang............................................ 136
5
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