Die Überexpression des Sphingosin-1-phosphat-Rezeptors 3 verursacht eine akute myeloische Leukämie im Mausmodell:
Saved in:
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|---|---|
| Format: | Thesis Book |
| Language: | German |
| Published: |
Freiburg im Breisgau
[2023]
|
| Subjects: | |
| Online Access: | Inhaltsverzeichnis Inhaltsverzeichnis |
| Physical Description: | 149 Blätter Illustrationen, Diagramme 30 cm |
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|---|---|
| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
5
1.1
H
AEMATOPOESE
....................................................................................................................................................
5
1.2
S
PHINGOSIN
-1
PHOSPHAT
(S1P)
...........................................................................................................................
9
1.2.1
BIOSYNTHESE
UND
METABOLISMUS
VON
SIP
................................................................................................
9
1.2.2
FUNKTION
VON
SIP
...................................................................................................................................
10
1.2.3
DIE
ROLLE
VON
SIP
BEI
ONKOLOGISCHEN
ERKRANKUNGEN
.............................................................................
12
1.2.4
SPHINGOSIN-1-PHOSPHAT-REZEPTOREN....................................................................................................
16
1.2.5
SIP-REZEPTOR-MODULATOR
FINGOLIMOD
...................................................................................................18
1.3
.
A
KUTE
MYELOISCHE
L
EUKAEMIE
...................................................................................................................
20
1.3.1
EPIDEMIOLOGIE,
KLINIK
UND
DIAGNOSTIK
...................................................................................................
20
1.3.2
KLASSIFIKATION
.......................................................................................................................................
21
1.3.3
THERAPIE
................................................................................................................................................
24
1.3.4
GENETISCHE
VERAENDERUNGEN
DER
AML.
27
1.4
Z
IELE
DIESER
A
RBEIT
..........................................................................................................................................
33
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
..............................................................................................................
34
2.1
M
OLEKULARBIOLOGISCHE
M
ETHODEN
..................................................................................................................
34
2.1.1
PROTEINKONSERVIERUNG
...........................................................................................................................
34
2.1.2
SODIUM-DODECYPSULFATE-POLYACRYLAMIDE-GELELEKTROPHORESE
(SDS-PAGE)
...........................................
38
2.1.3
WESTERN
BLOT
.........................................................................................................................................
41
2.1.4
ISOLIERUNG
VON
GENOMISCHER
DNA
AUS
MAUSGEWEBE
............................................................................
43
2.1.5
MESSUNG
DER
DNA/RNA
KONZENTRATION
...............................................................................................43
2.1.6
GENOTYPISIERUNG
DER
MAEUSE
MITTELS
PCR
..............................................................................................
44
2.1.7
AGAROSEGEL-ELEKTROPHORESE
..................................................................................................................
46
2.2
Z
ELLBIOLOGISCHE
M
ETHODEN
.............................................................................................................................
47
2.2.1
ZELLZAHLBESTIMMUNG
IN
DER
NEUBOUERZAEHLKAMMER.
..............................................................................
47
2.3
M
AUSSTAEMME
.................................................................................................................................................
48
2.3.1
LYSM-CRE
...............................................................................................................................................
48
2.3.2
F4/80-CRE
.............................................................................................................................................48
2.3.3
CAG-SIP3
..............................................................................................................................................48
2.3.4
LYSM-SLP
3
TG
........................................................................................................................................
49
2.3.5
F4/8O-SIP3
TG
.......................................................................................................................................
49
2.3.6
PEP
BOYS
...............................................................................................................................................
50
2.4
.T
IERVERSUCHSMETHODEN
.........................................................................................................................
51
2.4.1
NARKOSEFUEHRUNG
...................................................................................................................................
51
1
2.4.2
BLUTPROBEN
.............................................................................................................................................
51
2.4.3
ABSCHLUSSANALYSE
DER
MAEUSE
.................................................................................................................
54
2.4.4
TRANSPLANTATION
MURINEN
KNOCHENMARKS
.............................................................................................
57
2.4.5
INTRAPERITONEALE
INJEKTION
VON
FINGOLIMOD
ZUR
BEHANDLUNG
DER
MAEUSE
...............................................
59
2.4.6
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
(FACS)
.................................................................................................................
60
2.5
STATISTISCHE
A
NALYSEN
......................................................................................................................................
67
3.
ERGEBNISSE
.............................................................................................................................................
68
3.1
SIP3-UEBEREXPRESSION
IM
TRANSGENEN
MAUSMODELL
.......................................................................................................................
68
3.2
H
AEMATOLOGISCHER
P
HAENOTYP
DER
L
YS
M-S1P
3
TG
T
IERE
IM
A
LTER
VON
8
W
OCHEN
...................................................
71
3.3
UEBERLEBENSZEITANALYSE
DER
LYSM-SIP3TG
TIERE
MIT
BLUTWERTEN
IM
LANGZEITVERLAUF
.....................................................
74
3.4
A
BSCHLUSSANALYSE
DER
L
YS
M-S1P
3
TG
T
IERE
.......................................................................................................
76
3.4.1
ANALYSE
DES
KNOCHENMARKS
..................................................................................................................
76
3.4.2
ANALYSE
DER
MILZ
...................................................................................................................................
79
3.5
C
HARAKTERISIERUNG
DER
E
MPFAENGERTIERE
VON
L
YS
M-S1P
3
TG
K
NOCHENMARK
.......................................................
81
3.5.1
ENGRAFTMENT
.........................................................................................................................................
81
3.6
S1P3-UEBEREXPRESSION
IN
EINEM
DIFFERENZIERTEREN
STADIUM
DER
HAEMATOPOESE
....................................................................
88
3.6.1
F4/80
EXPRESSION
IN
DER
MURINEN
HAEMATOPOESE
..................................................................................88
3.6.2
ANALYSE
DER
F4/80-S1P3
TG
TIERE
..........................................................................................................
89
3.7S1P3
E
XPRESSIONSMUSTER
VON
P
ATIENTEN
MIT
AML
............................................................................................
91
3.8
T
HERAPIE
MIT
F
INGOLIMOD
.................................................................................................................................
93
3.8.1
EFFEKTE
DER
THERAPIE
MIT
FINGOLIMOD
....................................................................................................
93
3.9
F
INGOLIMOD
-T
HERAPIE
EINES
ANDEREN
AML-M
AUSMODELLS
..................................................................................
96
3.9.1
TRANSPLONTATIONSREIHE
MIT
MLL-PTD-FLT3-ITD-MILZZELLEN......................................................................
96
3.9.2
THERAPIE
DER
MIT
10.000
MLL-PTD-FLT3-ITD-MILZZELLEN
TRANSPLANTIERTEN
TIERE
....................................
98
4.
DISKUSSION
...........................................................................................................................................
101
4.1
D
IE
UE
BEREXPRESSION
DES
S1P
3
IM
M
AUSMODELL
FUEHRT
ZU
EINER
AKUTEN
MYELOISCHEN
L
EUKAEMIE
............................
101
4.2
D
ER
U
RSPRUNG
DER
E
RKRANKUNG
MUSS
IM
K
NOCHENMARK
LIEGEN
.......................................................................
104
4.3
D
IE
UE
BEREXPRESSION
DES
S1P3
MUSS
BEREITSAUF
DEM
N
IVEAU
DER
HAEMATOPOETISCHEN
S
TAMMZELLEN
ERFOLGEN
,
UM
EINE
AML
VERURSACHEN
ZU
KOENNEN
..............................................................................................................................................................
106
4.4
D
ER
E
INSATZ
DES
S
PHINGOSIN
-I
PHOSPHAT
-R
EZEPTOR
-M
ODULATORS
F
INGOLIMOD
FUEHRT
ZU
EINER
N
ORMALISIERUNG
DER
B
LUTWERTE
DER
L
YS
M-S1P3
TRANSGENEN
T
IERE
UND
STELLT
DAMIT
EINE
NEUE
T
HERAPIEOPTION
DER
AML
DAR
.................
110
5.
ZUSAMMENFASSUNG
........................................................................................................................
113
6.
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
................................................................................................................
114
7.
TABELLENVERZEICHNIS
......................................................................................................................
116
8.
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
..............................................................................................................
117
2
9.
LITERATURVERZEICHNIS
.....................................................................................................................
121
10.
DANKSAGUNG
...................................................................................................................................
143
11.
APPENDIX
............................................................................................................................................
145
3
|
| adam_txt |
INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
5
1.1
H
AEMATOPOESE
.
5
1.2
S
PHINGOSIN
-1
PHOSPHAT
(S1P)
.
9
1.2.1
BIOSYNTHESE
UND
METABOLISMUS
VON
SIP
.
9
1.2.2
FUNKTION
VON
SIP
.
10
1.2.3
DIE
ROLLE
VON
SIP
BEI
ONKOLOGISCHEN
ERKRANKUNGEN
.
12
1.2.4
SPHINGOSIN-1-PHOSPHAT-REZEPTOREN.
16
1.2.5
SIP-REZEPTOR-MODULATOR
FINGOLIMOD
.18
1.3
.
A
KUTE
MYELOISCHE
L
EUKAEMIE
.
20
1.3.1
EPIDEMIOLOGIE,
KLINIK
UND
DIAGNOSTIK
.
20
1.3.2
KLASSIFIKATION
.
21
1.3.3
THERAPIE
.
24
1.3.4
GENETISCHE
VERAENDERUNGEN
DER
AML.
27
1.4
Z
IELE
DIESER
A
RBEIT
.
33
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
34
2.1
M
OLEKULARBIOLOGISCHE
M
ETHODEN
.
34
2.1.1
PROTEINKONSERVIERUNG
.
34
2.1.2
SODIUM-DODECYPSULFATE-POLYACRYLAMIDE-GELELEKTROPHORESE
(SDS-PAGE)
.
38
2.1.3
WESTERN
BLOT
.
41
2.1.4
ISOLIERUNG
VON
GENOMISCHER
DNA
AUS
MAUSGEWEBE
.
43
2.1.5
MESSUNG
DER
DNA/RNA
KONZENTRATION
.43
2.1.6
GENOTYPISIERUNG
DER
MAEUSE
MITTELS
PCR
.
44
2.1.7
AGAROSEGEL-ELEKTROPHORESE
.
46
2.2
Z
ELLBIOLOGISCHE
M
ETHODEN
.
47
2.2.1
ZELLZAHLBESTIMMUNG
IN
DER
NEUBOUERZAEHLKAMMER.
.
47
2.3
M
AUSSTAEMME
.
48
2.3.1
LYSM-CRE
.
48
2.3.2
F4/80-CRE
.48
2.3.3
CAG-SIP3
.48
2.3.4
LYSM-SLP
3
TG
.
49
2.3.5
F4/8O-SIP3
TG
.
49
2.3.6
PEP
BOYS
.
50
2.4
.T
IERVERSUCHSMETHODEN
.
51
2.4.1
NARKOSEFUEHRUNG
.
51
1
2.4.2
BLUTPROBEN
.
51
2.4.3
ABSCHLUSSANALYSE
DER
MAEUSE
.
54
2.4.4
TRANSPLANTATION
MURINEN
KNOCHENMARKS
.
57
2.4.5
INTRAPERITONEALE
INJEKTION
VON
FINGOLIMOD
ZUR
BEHANDLUNG
DER
MAEUSE
.
59
2.4.6
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
(FACS)
.
60
2.5
STATISTISCHE
A
NALYSEN
.
67
3.
ERGEBNISSE
.
68
3.1
SIP3-UEBEREXPRESSION
IM
TRANSGENEN
MAUSMODELL
.
68
3.2
H
AEMATOLOGISCHER
P
HAENOTYP
DER
L
YS
M-S1P
3
TG
T
IERE
IM
A
LTER
VON
8
W
OCHEN
.
71
3.3
UEBERLEBENSZEITANALYSE
DER
LYSM-SIP3TG
TIERE
MIT
BLUTWERTEN
IM
LANGZEITVERLAUF
.
74
3.4
A
BSCHLUSSANALYSE
DER
L
YS
M-S1P
3
TG
T
IERE
.
76
3.4.1
ANALYSE
DES
KNOCHENMARKS
.
76
3.4.2
ANALYSE
DER
MILZ
.
79
3.5
C
HARAKTERISIERUNG
DER
E
MPFAENGERTIERE
VON
L
YS
M-S1P
3
TG
K
NOCHENMARK
.
81
3.5.1
ENGRAFTMENT
.
81
3.6
S1P3-UEBEREXPRESSION
IN
EINEM
DIFFERENZIERTEREN
STADIUM
DER
HAEMATOPOESE
.
88
3.6.1
F4/80
EXPRESSION
IN
DER
MURINEN
HAEMATOPOESE
.88
3.6.2
ANALYSE
DER
F4/80-S1P3
TG
TIERE
.
89
3.7S1P3
E
XPRESSIONSMUSTER
VON
P
ATIENTEN
MIT
AML
.
91
3.8
T
HERAPIE
MIT
F
INGOLIMOD
.
93
3.8.1
EFFEKTE
DER
THERAPIE
MIT
FINGOLIMOD
.
93
3.9
F
INGOLIMOD
-T
HERAPIE
EINES
ANDEREN
AML-M
AUSMODELLS
.
96
3.9.1
TRANSPLONTATIONSREIHE
MIT
MLL-PTD-FLT3-ITD-MILZZELLEN.
96
3.9.2
THERAPIE
DER
MIT
10.000
MLL-PTD-FLT3-ITD-MILZZELLEN
TRANSPLANTIERTEN
TIERE
.
98
4.
DISKUSSION
.
101
4.1
D
IE
UE
BEREXPRESSION
DES
S1P
3
IM
M
AUSMODELL
FUEHRT
ZU
EINER
AKUTEN
MYELOISCHEN
L
EUKAEMIE
.
101
4.2
D
ER
U
RSPRUNG
DER
E
RKRANKUNG
MUSS
IM
K
NOCHENMARK
LIEGEN
.
104
4.3
D
IE
UE
BEREXPRESSION
DES
S1P3
MUSS
BEREITSAUF
DEM
N
IVEAU
DER
HAEMATOPOETISCHEN
S
TAMMZELLEN
ERFOLGEN
,
UM
EINE
AML
VERURSACHEN
ZU
KOENNEN
.
106
4.4
D
ER
E
INSATZ
DES
S
PHINGOSIN
-I
PHOSPHAT
-R
EZEPTOR
-M
ODULATORS
F
INGOLIMOD
FUEHRT
ZU
EINER
N
ORMALISIERUNG
DER
B
LUTWERTE
DER
L
YS
M-S1P3
TRANSGENEN
T
IERE
UND
STELLT
DAMIT
EINE
NEUE
T
HERAPIEOPTION
DER
AML
DAR
.
110
5.
ZUSAMMENFASSUNG
.
113
6.
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
.
114
7.
TABELLENVERZEICHNIS
.
116
8.
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
.
117
2
9.
LITERATURVERZEICHNIS
.
121
10.
DANKSAGUNG
.
143
11.
APPENDIX
.
145
3 |
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