AGE-Precursor- oder Glucose-vermittelte Inhibition der VEGFR2-Phosphorylierung:
Saved in:
| Main Author: | |
|---|---|
| Format: | Thesis Book |
| Language: | German |
| Published: |
Freiburg im Breisgau
[2023]
|
| Subjects: | |
| Online Access: | Inhaltsverzeichnis Inhaltsverzeichnis |
| Physical Description: | 85 Seiten Illustrationen, Diagramme 30 cm |
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|---|---|
| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
.........................................................................................................
1.
EINLEITUNG,
RELEVANZ
UND
HINTERGRUND
..........................................................................
1
1.1
DIABETES
MELLITUS
.......................................................................................................
1
1.2
DIABETISCHE
RETINOPATHIE
..........................................................................................
1
1.3
VEGFNEGFR2
SIGNALWEG
......................................................................................
3
1.3.1
HISTORIE
..................................................................................................................
3
1.3.2
DER
WACHSTUMSFAKTOR
VEGF
................................................................................
4
1.3.3
AKTIVIERUNG
UND
SIGNALKASKADE
VON
REZEPTORTYROSINKINASEN
................................
5
1.3.4
DIE
REZEPTOREN
DER
VEGFR-FAMILIE
-
VEGFR1
UND
VEGFR3
.............................
6
1.3.5
VASCULAR
ENDOTHELIAL
GROWTH
FACTOR
RECEPTOR
2
(VEGFR2)
................................
7
1.3.6
ENDOTHELZELLREIHEN
ALS
MODELLORGANISMUS
...........................................................
10
1.4
ADVANCED
GLYCATION
END-PRODUCTS
.....................................................................
10
1.4.1
DIE
AGE-VORLAEUFERMOLEKUELE
METHYLGLYOXAL,
GLYOXAL
UND
DAS
A-DIKETON
PENTANDION
..........................................................................................................
12
1.4.2
DIE
ENTGIFTUNG
BZW.
DER
ABBAU
VON
REAKTIVEN
DICARBONYLEN
................................
14
1.4.3
DIE
BILDUNG
VON
IRREVERSIBLEN
AGES
DURCH
DIE
DICARBONYLE
METHYLGLYOXAL
UND
GLYOXAL
.................................................................................................................
15
2.
FRAGESTELLUNGEN
DER
ARBEIT
...........................................................................................
17
3.
MATERIAL
UND
METHODEN
.................................................................................................
18
3.1
ZELLKULTUR
...................................................................................................................
19
3.2
ZELLERNTE
UND
STIMULATION
.......................................................................................
20
3.3
ELISA
.......................................................................................................................
22
3.3.1
COATING
...............................................................................................................
22
3.3.2
BLOCKING
..............................................................................................................
23
3.3.3
INKUBATION
MIT
PROBE/ANTIGEN
.............................................................................
23
3.3.4
DETEKTION
MIT
PRIMAEREM
UND
SEKUNDAEREM
ANTIKOERPER
.........................................
23
3.3.5
SUBSTRAT
UND
MESSUNG
........................................................................................
24
3.3.6
STATISTISCHE
AUSWERTUNG
DER
ELISA-RESULTATE
...................................................
25
3.4
IMMUNPRAEZIPITATION
.................................................................................................
25
3.5
WESTERN
BLOT
............................................................................................................
28
3.5.1
HERSTELLUNG
DES
GELS
...........................................................................................
28
3.5.2
AUFTRENNUNG
DER
PROTEINE
NACH
MOLEKULARGEWICHT
UND
LADUNG
IN
DER
GELELEKTROPHORESE
...............................................................................................
29
3.5.3
PROBENTRANSFER
VOM
GEL
AUF
EINE
CELLULOSE-MEMBRAN
........................................
30
3.5.4
DETEKTION
VON
PROTEINBANDEN
AUF
DER
MEMBRAN
..................................................
31
3.6
MTT-ASSAY
..............................................................................................................
34
3.7
BICINCHONINSAEURE
(BCA)
ASSAY
.............................................................................35
3.7.1
VORBEREITUNG
STANDARDKURVE
MIT
RINDERSERUMALBUMIN
(BSA)
.............................
35
3.7.2
VORBEREITUNG
DER
PROBEN
....................................................................................
35
3.7.3
VORBEREITUNG
DER
BCA-LOESUNG
UND
MESSUNG
......................................................
35
4.
ERGEBNISSE
.....................................................................................................................36
4.1
AUSWIRKUNG
DER
INKUBATIONSDAUER
MIT
VEGF
AUF
DIE
PHOSPHORYLIERUNG
DES
VEGFR2
..................................................................................................................
36
4.2
AUSWIRKUNG
DER
VEGF-KONZENTRATION
AUF
DIE
PHOSPHORYLIERUNG
DES
VEGFR2
..................................................................................................................
37
4.3
AUSWAHL
EINER
GEEIGNETEN
ZELLLINIE
.......................................................................38
4.4
AUSWIRKUNGEN
DER
INKUBATION
MIT
METHYLGLYOXAL
(MGO)
AUF
VEGFR2
............
40
4.4.1
VERMINDERUNG
DER
PHOSPHORYLIERUNG
AN
TYROSINRESTEN
DES
VEGFR2
DURCH
INKUBATION
MIT
UNTERSCHIEDLICHEN
METHYLGLYOXAL-KONZENTRATIONEN
.....................
40
4.4.2
VERMINDERUNG
DER
PHOSPHORYLIERUNG
AN
TYROSINRESTEN
DES
VEGFR2
BEI
UNTERSCHIEDLICHER
INKUBATIONSZEIT
MIT
METHYLGLYOXAL
..............................
42
4.4.3
VERMINDERUNG
DER
PHOSPHORYLIERUNG
AN
TYROSINRESTEN
DES
VEGFR2
DURCH
INKUBATION
MIT
UNTERSCHIEDLICHEN
METHYLGLYOXAL-KONZENTRATIONEN
(WESTERN
BLOT)
........................................................................................................
43
4.4.4
MTT-ASSAY
MIT
STEIGENDER
KONZENTRATION
UND
INKUBATIONSZEIT
VON
MGO
.........
45
4.4.5
LICHTMIKROSKOPISCHE
ANALYSE
DER
HUAEC
NACH
INKUBATION
MIT
MGO
...............
46
4.5
AUSWIRKUNGEN
DER
INKUBATION
MIT
GLYOXAL
(GO)
AUF
VEGFR2
...........................
48
4.5.1
KEIN
EFFEKT
AUF
DIE
PHOSPHORYLIERUNG
AN
TYROSINRESTEN
DES
VEGFR2
DURCH
INKUBATION
MIT
UNTERSCHIEDLICHEN
GLYOXAL-KONZENTRATIONEN................................
48
4.5.2
MTT-ASSAY
MIT
STEIGENDER
KONZENTRATION
UND
INKUBATIONSZEIT
VON
GO
............
49
4.6
AUSWIRKUNGEN
DER
INKUBATION
MIT
PENTANDION
(PD)
AUF
VEGFR2
....................
50
4.6.1
VERMINDERUNG
DER
PHOSPHORYLIERUNG
AN
TYROSINRESTEN
DES
VEGFR2
DURCH
INKUBATION
MIT
UNTERSCHIEDLICHEN
PENTANDION-KONZENTRATIONEN...........................
50
4.6.2
MTT-ASSAY
MIT
STEIGENDER
KONZENTRATION
UND
INKUBATIONSZEIT
VON
PD
.............
51
4.7
AUSWIRKUNGEN
DER
INKUBATION
MIT
GLUCOSE
AUF
VEGFR2
...................................52
4.7.1
ABNAHME
DER
VEGFR2-PHOSPHORYLIERUNG
BEI
INKUBATION
MIT
GLUCOSE
..............
52
5.
DISKUSSION
......................................................................................................................
55
5.1
EVALUATION
DES
ENDOTHELZELLKULTUR-MODELS
...........................................................56
5.2
KINETIK
DER
PHOSPHORYLIERUNG
DES
VEGFR2
BEI
STIMULATION
MIT
VEGF
..........
57
5.3
REDUKTION
DER
PHOSPHORYLIERUNG
AN
VERSCHIEDENEN
TYROSINRESTEN
DES
VEGFR2
DURCH
MGO
..............................................................................................
58
5.4
INKUBATION
MIT
PD
FUEHRT
ZU
AEHNLICHEN
EFFEKTEN
WIE
MGO
...................................
60
5.5
KEINE
BEEINFLUSSUNG
DER
PHOSPHORYLIERUNG
DES
VEGFR2
DURCH
GO
.............
60
5.6
AUSWIRKUNG
VON
HOHEN
GLUCOSE-KONZENTRATIONEN
AUF
DIE
FUNKTION
DES
VEGFR2
..................................................................................................................
61
5.7
AUSBLICK
....................................................................................................................
62
6.
ZUSAMMENFASSUNG
........................................................................................................
64
7.
LITERATURVERZEICHNIS
......................................................................................................
65
8.
ANHANG
...........................................................................................................................
80
8.1
PUBLIKATION
..............................................................................................................
80
8.2
LEBENSLAUF
..............................................................................................................
81
8.3
EIDESSTATTLICHE
VERSICHERUNG
...............................................................................
82
8.4
ERKLAERUNG
ZUM
EIGENANTEIL
...................................................................................
83
8.5
DANKSAGUNG
...........................................................................................................
84
|
| adam_txt |
INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
.
1.
EINLEITUNG,
RELEVANZ
UND
HINTERGRUND
.
1
1.1
DIABETES
MELLITUS
.
1
1.2
DIABETISCHE
RETINOPATHIE
.
1
1.3
VEGFNEGFR2
SIGNALWEG
.
3
1.3.1
HISTORIE
.
3
1.3.2
DER
WACHSTUMSFAKTOR
VEGF
.
4
1.3.3
AKTIVIERUNG
UND
SIGNALKASKADE
VON
REZEPTORTYROSINKINASEN
.
5
1.3.4
DIE
REZEPTOREN
DER
VEGFR-FAMILIE
-
VEGFR1
UND
VEGFR3
.
6
1.3.5
VASCULAR
ENDOTHELIAL
GROWTH
FACTOR
RECEPTOR
2
(VEGFR2)
.
7
1.3.6
ENDOTHELZELLREIHEN
ALS
MODELLORGANISMUS
.
10
1.4
ADVANCED
GLYCATION
END-PRODUCTS
.
10
1.4.1
DIE
AGE-VORLAEUFERMOLEKUELE
METHYLGLYOXAL,
GLYOXAL
UND
DAS
A-DIKETON
PENTANDION
.
12
1.4.2
DIE
ENTGIFTUNG
BZW.
DER
ABBAU
VON
REAKTIVEN
DICARBONYLEN
.
14
1.4.3
DIE
BILDUNG
VON
IRREVERSIBLEN
AGES
DURCH
DIE
DICARBONYLE
METHYLGLYOXAL
UND
GLYOXAL
.
15
2.
FRAGESTELLUNGEN
DER
ARBEIT
.
17
3.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
18
3.1
ZELLKULTUR
.
19
3.2
ZELLERNTE
UND
STIMULATION
.
20
3.3
ELISA
.
22
3.3.1
COATING
.
22
3.3.2
BLOCKING
.
23
3.3.3
INKUBATION
MIT
PROBE/ANTIGEN
.
23
3.3.4
DETEKTION
MIT
PRIMAEREM
UND
SEKUNDAEREM
ANTIKOERPER
.
23
3.3.5
SUBSTRAT
UND
MESSUNG
.
24
3.3.6
STATISTISCHE
AUSWERTUNG
DER
ELISA-RESULTATE
.
25
3.4
IMMUNPRAEZIPITATION
.
25
3.5
WESTERN
BLOT
.
28
3.5.1
HERSTELLUNG
DES
GELS
.
28
3.5.2
AUFTRENNUNG
DER
PROTEINE
NACH
MOLEKULARGEWICHT
UND
LADUNG
IN
DER
GELELEKTROPHORESE
.
29
3.5.3
PROBENTRANSFER
VOM
GEL
AUF
EINE
CELLULOSE-MEMBRAN
.
30
3.5.4
DETEKTION
VON
PROTEINBANDEN
AUF
DER
MEMBRAN
.
31
3.6
MTT-ASSAY
.
34
3.7
BICINCHONINSAEURE
(BCA)
ASSAY
.35
3.7.1
VORBEREITUNG
STANDARDKURVE
MIT
RINDERSERUMALBUMIN
(BSA)
.
35
3.7.2
VORBEREITUNG
DER
PROBEN
.
35
3.7.3
VORBEREITUNG
DER
BCA-LOESUNG
UND
MESSUNG
.
35
4.
ERGEBNISSE
.36
4.1
AUSWIRKUNG
DER
INKUBATIONSDAUER
MIT
VEGF
AUF
DIE
PHOSPHORYLIERUNG
DES
VEGFR2
.
36
4.2
AUSWIRKUNG
DER
VEGF-KONZENTRATION
AUF
DIE
PHOSPHORYLIERUNG
DES
VEGFR2
.
37
4.3
AUSWAHL
EINER
GEEIGNETEN
ZELLLINIE
.38
4.4
AUSWIRKUNGEN
DER
INKUBATION
MIT
METHYLGLYOXAL
(MGO)
AUF
VEGFR2
.
40
4.4.1
VERMINDERUNG
DER
PHOSPHORYLIERUNG
AN
TYROSINRESTEN
DES
VEGFR2
DURCH
INKUBATION
MIT
UNTERSCHIEDLICHEN
METHYLGLYOXAL-KONZENTRATIONEN
.
40
4.4.2
VERMINDERUNG
DER
PHOSPHORYLIERUNG
AN
TYROSINRESTEN
DES
VEGFR2
BEI
UNTERSCHIEDLICHER
INKUBATIONSZEIT
MIT
METHYLGLYOXAL
.
42
4.4.3
VERMINDERUNG
DER
PHOSPHORYLIERUNG
AN
TYROSINRESTEN
DES
VEGFR2
DURCH
INKUBATION
MIT
UNTERSCHIEDLICHEN
METHYLGLYOXAL-KONZENTRATIONEN
(WESTERN
BLOT)
.
43
4.4.4
MTT-ASSAY
MIT
STEIGENDER
KONZENTRATION
UND
INKUBATIONSZEIT
VON
MGO
.
45
4.4.5
LICHTMIKROSKOPISCHE
ANALYSE
DER
HUAEC
NACH
INKUBATION
MIT
MGO
.
46
4.5
AUSWIRKUNGEN
DER
INKUBATION
MIT
GLYOXAL
(GO)
AUF
VEGFR2
.
48
4.5.1
KEIN
EFFEKT
AUF
DIE
PHOSPHORYLIERUNG
AN
TYROSINRESTEN
DES
VEGFR2
DURCH
INKUBATION
MIT
UNTERSCHIEDLICHEN
GLYOXAL-KONZENTRATIONEN.
48
4.5.2
MTT-ASSAY
MIT
STEIGENDER
KONZENTRATION
UND
INKUBATIONSZEIT
VON
GO
.
49
4.6
AUSWIRKUNGEN
DER
INKUBATION
MIT
PENTANDION
(PD)
AUF
VEGFR2
.
50
4.6.1
VERMINDERUNG
DER
PHOSPHORYLIERUNG
AN
TYROSINRESTEN
DES
VEGFR2
DURCH
INKUBATION
MIT
UNTERSCHIEDLICHEN
PENTANDION-KONZENTRATIONEN.
50
4.6.2
MTT-ASSAY
MIT
STEIGENDER
KONZENTRATION
UND
INKUBATIONSZEIT
VON
PD
.
51
4.7
AUSWIRKUNGEN
DER
INKUBATION
MIT
GLUCOSE
AUF
VEGFR2
.52
4.7.1
ABNAHME
DER
VEGFR2-PHOSPHORYLIERUNG
BEI
INKUBATION
MIT
GLUCOSE
.
52
5.
DISKUSSION
.
55
5.1
EVALUATION
DES
ENDOTHELZELLKULTUR-MODELS
.56
5.2
KINETIK
DER
PHOSPHORYLIERUNG
DES
VEGFR2
BEI
STIMULATION
MIT
VEGF
.
57
5.3
REDUKTION
DER
PHOSPHORYLIERUNG
AN
VERSCHIEDENEN
TYROSINRESTEN
DES
VEGFR2
DURCH
MGO
.
58
5.4
INKUBATION
MIT
PD
FUEHRT
ZU
AEHNLICHEN
EFFEKTEN
WIE
MGO
.
60
5.5
KEINE
BEEINFLUSSUNG
DER
PHOSPHORYLIERUNG
DES
VEGFR2
DURCH
GO
.
60
5.6
AUSWIRKUNG
VON
HOHEN
GLUCOSE-KONZENTRATIONEN
AUF
DIE
FUNKTION
DES
VEGFR2
.
61
5.7
AUSBLICK
.
62
6.
ZUSAMMENFASSUNG
.
64
7.
LITERATURVERZEICHNIS
.
65
8.
ANHANG
.
80
8.1
PUBLIKATION
.
80
8.2
LEBENSLAUF
.
81
8.3
EIDESSTATTLICHE
VERSICHERUNG
.
82
8.4
ERKLAERUNG
ZUM
EIGENANTEIL
.
83
8.5
DANKSAGUNG
.
84 |
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