Aktivierungsspezifische Bindung von Designed-Ankyrin-Repeat-Proteinen an Integrin αMβ2: Detektierung der Monozytenaktivierung nach Myokardinfarkten
Saved in:
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| Format: | Thesis Book |
| Language: | German |
| Published: |
Freiburg im Breisgau
2022
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Record in the Search Index
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|---|---|
| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
1
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
........................................................................................................
1
2
EINLEITUNG
..................................................................................................................
4
2.1
ATHEROSKLEROSE,
KHK
UND
MYOKARDINFARKT
..............................................................
4
2.1.1
EPIDEMIOLOGIE
.................................................................................................
4
2.1.2
PATHOPHYSIOLOGIE
DER
ATHEROSKLEROSE
.............................................................
4
2.1.3
KHK
UND
MYOKARDINFARKT:
DEFINITION UND
DIFFERENZIERUNG
..........................
6
2.1.4 IMMUNREAKTION
NACH
MYOKARDINFARKTEN
..........................................................
7
2.2
MONOZYTEN
UND
INTEGRINE
..........................................................................................
8
2.2.1
MONOZYTEN
.......................................................................................................
8
2.2.2
INTEGRINE
...........................................................................................................
8
2.2.3
SS2-INTEGRINE
UND
MAC
1
..................................................................................
10
2.2.4 INTEGRINE BEI
DER
LEUKOZYTENADHAESION
UND
-MIGRATION
..................................
12
2.3
ANTIKOERPER
IN
DER
DIAGNOSTIK
UND
THERAPIE
............................................................
13
2.3.1
IMMUNGLOBULINE.............................................................................................
13
2.3.2
ANTI-INTEGRIN-ANTIKOERPER
...............................................................................
14
2.3.3
NACHTEILE
DER
MONOKLONALEN
ANTIKOERPER
.......................................................
15
2.4
KLEINE
BINDUNGSPROTEINE
.........................................................................................
16
2.4.1
DESIGNED
ANKYRIN
REPEAT
PROTEINS
(DARPINS)
.............................................
16
2.4.2
SINGLE
CHAIN
VARIABLE
FRAGMENT
(SCFV)-FRAGMENTE
......................................
19
2.5
ZIELSETZUNG
...............................................................................................................
20
3
MATERIALIEN
UND
METHODEN
.................................................................................................
21
3.1
MATERIALIEN
..............................................................................................................
21
3.1.1
E.COLI
............................................................................................................
21
3.1.2
ANTIKOERPER
UND
PROTEINE
.........................................................
21
3.1.3
KITS
................................................................................................................
21
3.1.4
CHEMIKALIEN
..................................................................................................
21
3.1.5
VERBRAUCHSMATERIALIEN
..................................................................................
22
3.1.6
MEDIEN
UND
PUFFERLOESUNGEN
..........................................................................
23
3.1.7
GERAETEN
..........................................................................................................
25
3.1.8
SOFTWARES
......................................................................................................
25
3.2
METHODEN
................................................................................................................
26
3.2.1
DARPIN-PRODUKTION
IN
BAKTERIENKULTUREN
...................................................
26
3.2.2
PROTEIN-AUFREINIGUNG
...................................................................................
27
3.2.3
SDS-PAGE:
BESTAETIGUNG
DER
DARPIN-EXPRIMIERUNG
................................
30
3.2.4
ENDOTOXIN-ENTFERNUNG
.................................................................................
31
3.2.5
KONZENTRATIONSMESSUNG
...............................................................................
32
3.2.6
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
...................................................................................
33
3.2.7
BLUTENTNAHME
...............................................................................................
36
3.2.8
ETHIKVOTUM
..................................................................................................
36
3.2.9
STATISTIK
........................................................................................................
36
4
ERGEBNISSE
..........................................................................................................................
38
4.1
KLINISCHE
CHARAKTERISTIKA
........................................................................................
38
4.1.1
KLINISCHE
DATEN
VON
STEMI-PATIENTEN
........................................................
38
4.1.2
LABOR
UND
DIAGNOSTISCHE DATEN
VON
STEMI-PATIENTEN
..............................
39
4.2
DARPIN-PRODUKTION
UND
-AUFREINIGUNG
.................................................................
40
4.2.1
SDS-GELE
.....................................................................................................40
4.2.2
DARPIN-KONZENTRATIONEN
...........................................................................
42
4.3
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
..............................................................................................
42
4.3.1
GATING-STRATEGIE
...........................................................................................
42
4.3.2
BINDUNGSAKTIVITAET
VON DARPINS
UND
MAN
1,
VOR
UND
NACH
DER
STIMULATION45
4.3.3
DARPIN
F7:
AKTIVIERUNGSSPEZIFISCHE
BINDUNG
AN
MAC-1?
.........................
46
4.3.4
MAN
1:
AKTIVIERUNGSSPEZIFISCHE BINDUNG
AN
MAC
1
?
................................
48
4.3.5
MONOZYTENAKTIVIERUNG NACH
MYOKARDINFARKTEN?
........................................
49
5
DISKUSSION
.........................................................................................................................
54
5.1
DARPIN-PRODUKTION
................................................................................................
54
5.2
BINDUNGSAKTIVITAET DER
DARPINS
..............................................................................
54
5.2.1
AKTIVIERUNGSSPEZIFISCHE BINDUNG VON
DARPIN
F7
....................................
54
5.2.2
DARPIN
MF7
ALS
NEGATIVKONTROLLE
...............................................................
55
5.3
AKTIVIERUNG
DER
MAC-1
DURCH
MYOKARDINFARKTE?
....................................................
56
5.3.1
DIAGNOSTIK
DER
INFLAMMATION NACH
MYOKARDINFARKTEN
................................
56
5.3.2
ERKENNUNG VON
AKTIVIERTEM
MAC-1
DURCH
MAN-1
......................................
57
5.3.3
DARPIN
F7
ZUR
DETEKTIERUNG
DER
MAC-1-AKTIVIERUNG
.................................
58
5.4
MONOCYTE-PLATELET-AGGREGATES
(MPAS)
..................................................................
59
5.5
METHODISCHE
EINSCHRAENKUNGEN
...............................................................................
61
5.6
AUSBLICK
..................................................................................................................
62
6
ZUSAMMENFASSUNG
............................................................................................................
63
7
LITERATURVERZEICHNIS
..........................................................................................................
64
8
PUBLIKATION
........................................................................................................................
74
9
LEBENSLAUF
........................................................................................................................
75
10
EIDESSTATTLICHE
VERSICHERUNG
............................................................................................
77
11
ERKLAERUNG ZUM
EIGENANTEIL
...............................................................................................
79
12
DANKSAGUNG
......................................................................................................................
80
|
| adam_txt |
INHALTSVERZEICHNIS
1
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
.
1
2
EINLEITUNG
.
4
2.1
ATHEROSKLEROSE,
KHK
UND
MYOKARDINFARKT
.
4
2.1.1
EPIDEMIOLOGIE
.
4
2.1.2
PATHOPHYSIOLOGIE
DER
ATHEROSKLEROSE
.
4
2.1.3
KHK
UND
MYOKARDINFARKT:
DEFINITION UND
DIFFERENZIERUNG
.
6
2.1.4 IMMUNREAKTION
NACH
MYOKARDINFARKTEN
.
7
2.2
MONOZYTEN
UND
INTEGRINE
.
8
2.2.1
MONOZYTEN
.
8
2.2.2
INTEGRINE
.
8
2.2.3
SS2-INTEGRINE
UND
MAC
1
.
10
2.2.4 INTEGRINE BEI
DER
LEUKOZYTENADHAESION
UND
-MIGRATION
.
12
2.3
ANTIKOERPER
IN
DER
DIAGNOSTIK
UND
THERAPIE
.
13
2.3.1
IMMUNGLOBULINE.
13
2.3.2
ANTI-INTEGRIN-ANTIKOERPER
.
14
2.3.3
NACHTEILE
DER
MONOKLONALEN
ANTIKOERPER
.
15
2.4
KLEINE
BINDUNGSPROTEINE
.
16
2.4.1
DESIGNED
ANKYRIN
REPEAT
PROTEINS
(DARPINS)
.
16
2.4.2
SINGLE
CHAIN
VARIABLE
FRAGMENT
(SCFV)-FRAGMENTE
.
19
2.5
ZIELSETZUNG
.
20
3
MATERIALIEN
UND
METHODEN
.
21
3.1
MATERIALIEN
.
21
3.1.1
E.COLI
.
21
3.1.2
ANTIKOERPER
UND
PROTEINE
.
21
3.1.3
KITS
.
21
3.1.4
CHEMIKALIEN
.
21
3.1.5
VERBRAUCHSMATERIALIEN
.
22
3.1.6
MEDIEN
UND
PUFFERLOESUNGEN
.
23
3.1.7
GERAETEN
.
25
3.1.8
SOFTWARES
.
25
3.2
METHODEN
.
26
3.2.1
DARPIN-PRODUKTION
IN
BAKTERIENKULTUREN
.
26
3.2.2
PROTEIN-AUFREINIGUNG
.
27
3.2.3
SDS-PAGE:
BESTAETIGUNG
DER
DARPIN-EXPRIMIERUNG
.
30
3.2.4
ENDOTOXIN-ENTFERNUNG
.
31
3.2.5
KONZENTRATIONSMESSUNG
.
32
3.2.6
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
.
33
3.2.7
BLUTENTNAHME
.
36
3.2.8
ETHIKVOTUM
.
36
3.2.9
STATISTIK
.
36
4
ERGEBNISSE
.
38
4.1
KLINISCHE
CHARAKTERISTIKA
.
38
4.1.1
KLINISCHE
DATEN
VON
STEMI-PATIENTEN
.
38
4.1.2
LABOR
UND
DIAGNOSTISCHE DATEN
VON
STEMI-PATIENTEN
.
39
4.2
DARPIN-PRODUKTION
UND
-AUFREINIGUNG
.
40
4.2.1
SDS-GELE
.40
4.2.2
DARPIN-KONZENTRATIONEN
.
42
4.3
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
.
42
4.3.1
GATING-STRATEGIE
.
42
4.3.2
BINDUNGSAKTIVITAET
VON DARPINS
UND
MAN
1,
VOR
UND
NACH
DER
STIMULATION45
4.3.3
DARPIN
F7:
AKTIVIERUNGSSPEZIFISCHE
BINDUNG
AN
MAC-1?
.
46
4.3.4
MAN
1:
AKTIVIERUNGSSPEZIFISCHE BINDUNG
AN
MAC
1
?
.
48
4.3.5
MONOZYTENAKTIVIERUNG NACH
MYOKARDINFARKTEN?
.
49
5
DISKUSSION
.
54
5.1
DARPIN-PRODUKTION
.
54
5.2
BINDUNGSAKTIVITAET DER
DARPINS
.
54
5.2.1
AKTIVIERUNGSSPEZIFISCHE BINDUNG VON
DARPIN
F7
.
54
5.2.2
DARPIN
MF7
ALS
NEGATIVKONTROLLE
.
55
5.3
AKTIVIERUNG
DER
MAC-1
DURCH
MYOKARDINFARKTE?
.
56
5.3.1
DIAGNOSTIK
DER
INFLAMMATION NACH
MYOKARDINFARKTEN
.
56
5.3.2
ERKENNUNG VON
AKTIVIERTEM
MAC-1
DURCH
MAN-1
.
57
5.3.3
DARPIN
F7
ZUR
DETEKTIERUNG
DER
MAC-1-AKTIVIERUNG
.
58
5.4
MONOCYTE-PLATELET-AGGREGATES
(MPAS)
.
59
5.5
METHODISCHE
EINSCHRAENKUNGEN
.
61
5.6
AUSBLICK
.
62
6
ZUSAMMENFASSUNG
.
63
7
LITERATURVERZEICHNIS
.
64
8
PUBLIKATION
.
74
9
LEBENSLAUF
.
75
10
EIDESSTATTLICHE
VERSICHERUNG
.
77
11
ERKLAERUNG ZUM
EIGENANTEIL
.
79
12
DANKSAGUNG
.
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