Holdings: Der Effekt der Blockade des aktivierten Leukozytenintegrins Mac-1 auf Atherosklerose und Sepsis im Tiermodell

Der Effekt der Blockade des aktivierten Leukozytenintegrins Mac-1 auf Atherosklerose und Sepsis im Tiermodell:

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Bibliographic Details
Main Author:	Waggershauser, Philipp 1992- (Author)
Format:	Thesis Book
Language:	German
Published:	Freiburg im Breisgau 2022
Subjects:	Tiermodell Hochschulschrift
Online Access:	Inhaltsverzeichnis Inhaltsverzeichnis
Physical Description:	163 Seiten Illustrationen 30 cm

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adam_text	I INHALTSVERZEICHNIS II ABKUERZUNGSVERZEICHNIS III ABBILDUNGSQUELLENVERZEICHNIS IV TABELLENVERZEICHNIS 1 EINLEITUNG ............................................................................................................ 14 1.1 ATHEROSKLEROSE - EINE CHRONISCH INFLAMMATORISCHE ERKRANKUNG .................... 14 1.2 UEBERSICHT DER IMMUNANTWORT UND GRUNDLAGEN DER SEPSIS ............................... 25 1.3 IMMUNGLOBULINE - EIN KURZER UEBERBLICK .............................................................. 30 1.4 ANKYRIN REPEAT PROTEINE UND DAS DESIGNED ANKYRIN REPEAT PROTEIN F7 (DARPIN F7) ........................................................................................................... 32 1.5 ZELLADHAESIONSMOLEKUEL-KLASSEN ALS BASIS DER MAC-1 (AMSS2)/ICAM-1 -INTERAKTION ............................................................................................................................... 36 1.5.1 SELEKTINE ............................................................................................................ 37 1.5.2 CADHERINE .......................................................................................................... 37 1.5.3 INTEGRINE ............................................................................................................. 37 1.5.4 MAC-1 (CD1 1 B/CD1 8, A M SS 2) CR3) ..................................................................... 39 1.5.5 ICAM-1 - EIN MITGLIED DER IMMUNGLOBULIN-SUPERFAMILIE ..................................... 42 1.6 DARSTELLUNG DER MIGRATION MAC-1* LEUKOZYTEN .................................................. 44 1.7 ERGEBNISSE DER VORVERSUCHE .............................................................................. 47 1.7.1 SELEKTION IM PHAGENDISPLAY ............................................................................... 47 1.7.2 BINDUNGSANALYSE UND DARPIN F7 TRIPLE-MUTANTE 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2.3.1 INDUKTION DER PROTEINEXPRESSION ........................................................................ 51 2.3.2 PROTEINISOLATION .................................................................................................. 51 2.3.3 PROTEINAUFREINIGUNG MIT NICKEL-AGAROSE-AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE .................. 52 2.3.4 DIALYSE ............................................................................................................... 52 2.3.5 SDS-ACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE (SDS-PAGE) .............................................. 52 2.3.6 COOMASSIE-FAERBUNG VON ACRYLAMID-GELEN ........................................................ 52 2.3.7 WESTERN-BLOT ...................................................................................................... 53 2.3.8 IMMUNFAERBUNG DER WESTERN BLOT MEMBRAN ........................................................ 53 2.3.9 ENDOTOXINENTFERNUNG .......................................................................................... 53 2.3.10 ENDOTOXINKONZENTRATIONSBESTIMMUNG ............................................................. 53 2.3.11 PROTEINKONZENTRATIONSBESTIMMUNG ................................................................. 53 INHALTSVERZEICHNIS 2.4 MATERIALIEN DER FUNKTIONELLEN TESTUNG ................................................................ 54 2.4.1 ENZYME LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY (ELISA) ............................................... 54 2.4.2 FACS-ANALYSE DER DARPIN BINDUNG AUF MURINEN LEUKOZYTEN .......................... 54 2.5 MATERIALIEN DES CECAL LIGATION ........................................................................... 54 2.5.1 VERSUCHSTIERE ..................................................................................................... 54 2.5.2 .... ............................................................................................................................ 55 2.5.3 GEWEBEGEWINNUNG ............................................................................................ 55 2.5.4 GEWEBEPROZESSIERUNG UND AK-FAERBUNG ........................................................... 56 2.5.5 DATENAUSWERTUNG UND STATISTIK ........................................................................... 56 2.5.6 ZYTOKIN CBA ....................................................................................................... 56 2.6 MATERIALIEN DES ATHEROSKLEROSE-MODELLS ............................................................ 57 2.6.1 VERSUCHSTIERE ..................................................................................................... 57 2.6.2 MATERIALIEN ZUR VERSUCHSDURCHFUEHRUNG ............................................................... 57 2.6.3 GEWEBEGEWINNUNG ............................................................................................ 57 2.6.4 GEWEBEPROZESSIERUNG UND AK-FAERBUNG ........................................................... 57 2.6.5 HISTOLOGIE ............................................................................................................ 58 2.6.6 DATENAUSWERTUNG UND STATISTIK ........................................................................... 59 3 METHODEN ............................................................................................................ 60 3.1 METHODEN GENTECHNISCHER EXPERIMENTE ............................................................ 60 3.1.1 KULTIVIERUNG VON E.COLI IN LURIA BROTH FLUESSIGNAEHRMEDIUM ................................. 60 3.1.2 HERSTELLUNG DES GLYCEROLSTOCKS .......................................................................... 61 3.2 METHODEN PROTEINBIOCHEMISCHER EXPERIMENTE ................................................. 62 3.2.1 INDUKTION DER PROTEINEXPRESSION ......................................................................... 62 3.2.2 PROTEINISOLATION .................................................................................................. 62 3.2.3 DARPIN-AUFREINIGUNG DURCH NI 2+ -AGAROSE-AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE ............... 63 3.2.4 DIALYSE ................................................................................................................ 64 3.2.5 SODIUM-DODECYL-SULFATE-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE (SDS-PAGE) ........ 64 3.2.6 COOMASSIE-FAERBUNG VON ACRYLAMID-GELS .......................................................... 65 3.2.7 WESTERN BLOT ....................................................................................................... 66 3.2.8 IMMUNFAERBUNG DER WESTERN BLOT MEMBRAN ........................................................ 67 3.2.9 ENDOTOXINENTFERNUNG .......................................................................................... 69 3.2.10 ENDOTOXINKONZENTRATIONSBESTIMMUNG ............................................................. 70 3.2.11 PROTEINKONZENTRATIONSBESTIMMUNG ................................................................. 71 3.3 METHODEN DER FUNKTIONELLEN TESTUNG .................................................................. 72 3.3.1 FACS-ANALYSE DER DARPIN-BINDUNG AUF MURINEN MONOZYTEN ........................... 72 3.3.2 SERUM AMYLOID A ENZYME-LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY (SAA ELISA) ............ 74 3.3.3 CYTOMETRIC BEADS ARRAY (CBA) ZUR BESTIMMUNG MURINER ZYTOKINE ..................... 75 3.4 VERSUCHSTIERE UND TIERHALTUNG ........................................................................... 77 3.4.1 TIERVERSUCHSANTRAEGE .......................................................................................... 77 3.4.2 TIERBESCHAFFUNG ................................................................................................. 77 3.4.3 TIERHALTUNG 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............................................................................................ 85 3.6.3 GEWEBEPROZESSIERUNG UND FACS-ANTIKOERPERFAERBUNG ......................................... 86 3.6.4 DATENAUSWERTUNG ............................................................................................... 88 4 ERGEBNISSE ....................... 93 4.1 PROTEINPRODUKTION ................................................................................................. 93 4.2 ENDOTOXINENTFERNUNG ............................................................................................ 93 4.3 PROTEINBINDUNGSANALYSE ...................................................................................... 95 4.4 ERGEBNISSE DES CECAL LIGATION AND PUNCTURE-MODELLS ..................................... 97 4.4.1 FACS-ANALYSE ................................................................................................... 99 4.4.2 ZYTOKINASSAY 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................................................................................. 128 5.1.3 MONOZYTEN UND MAKROPHAGEN .......................................................................... 132 5.1.4 ZELLEN DER SPEZIFISCHEN IMMUNANTWORT ............................................................. 133 5.1.5 KRITISCHE UEBERLEGUNGEN ZUM CLP-MODELL ......................................................... 134 5.2 ERLAEUTERUNG DER ERGEBNISSE DES ATHEROSKLEROSE-MODELLS ................................ 136 5.2.1 ERLAEUTERUNG DER HISTOLOGISCHEN RESULTATE ......................................................... 137 5.2.2 KRITISCHE UEBERLEGUNGEN ZUM ATHEROSKLEROSE-MODELL ........................................ 140 5.3 GESAMTSCHLUSSFOLGERUNG .................................................................................... 142 5.4 AUSBLICK ................................................................................................................ 143 6 ZUSAMMENFASSUNG ........................................................................................ 144 7 LITERATURVERZEICHNIS ........................................................................................ 145 8 CURRICULUM VITAE .............................................................................................. 157 9 EIDESSTATTLICHE VERSICHERUNG ......................................................................... 159 10 ERKLAERUNG ZUM EIGENANTEIL AN DER PUBLIKATION ............................................ 160 11 PUBLIKATION ....................................................................................................... 161 12 DANKSAGUNG .................................................................................................... 162 5
adam_txt	I INHALTSVERZEICHNIS II ABKUERZUNGSVERZEICHNIS III ABBILDUNGSQUELLENVERZEICHNIS IV TABELLENVERZEICHNIS 1 EINLEITUNG . 14 1.1 ATHEROSKLEROSE - EINE CHRONISCH INFLAMMATORISCHE ERKRANKUNG . 14 1.2 UEBERSICHT DER IMMUNANTWORT UND GRUNDLAGEN DER SEPSIS . 25 1.3 IMMUNGLOBULINE - EIN KURZER UEBERBLICK . 30 1.4 ANKYRIN REPEAT PROTEINE UND DAS DESIGNED ANKYRIN REPEAT PROTEIN F7 (DARPIN F7) . 32 1.5 ZELLADHAESIONSMOLEKUEL-KLASSEN ALS BASIS DER MAC-1 (AMSS2)/ICAM-1 -INTERAKTION . 36 1.5.1 SELEKTINE . 37 1.5.2 CADHERINE . 37 1.5.3 INTEGRINE . 37 1.5.4 MAC-1 (CD1 1 B/CD1 8, A M SS 2) CR3) . 39 1.5.5 ICAM-1 - EIN MITGLIED DER IMMUNGLOBULIN-SUPERFAMILIE . 42 1.6 DARSTELLUNG DER MIGRATION MAC-1* LEUKOZYTEN . 44 1.7 ERGEBNISSE DER VORVERSUCHE . 47 1.7.1 SELEKTION IM PHAGENDISPLAY . 47 1.7.2 BINDUNGSANALYSE UND DARPIN F7 TRIPLE-MUTANTE . 47 1.7.3 STATISCHER ADHAERENZVERSUCH UND INTRAVITALMIKROSKOPIE . 47 1.8 ARBEITSHYPOTHESE UND ZIELSETZUNG DER ARBEIT . .49 2 MATERIALIEN UND GERAETE . 50 2.1 PUFFER FUER SDS PAGE, WESTERN BLOT, PROTEINAUFREINIGUNG UND FACS-ANALYSEN . 50 2.2 MATERIALIEN GENTECHNISCHER EXPERIMENTE . 51 2.2.1 KULTIVIERUNG VON E.COLI IN LURIA BROTH FLUESSIGNAEHRMEDIUM . 51 2.2.2 HERSTELLUNG VON GLYCEROLSTOCKS . 51 2.3 MATERIALIEN PROTEINBIOCHEMISCHER EXPERIMENTE . 51 2.3.1 INDUKTION DER PROTEINEXPRESSION . 51 2.3.2 PROTEINISOLATION . 51 2.3.3 PROTEINAUFREINIGUNG MIT NICKEL-AGAROSE-AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE . 52 2.3.4 DIALYSE . 52 2.3.5 SDS-ACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE (SDS-PAGE) . 52 2.3.6 COOMASSIE-FAERBUNG VON ACRYLAMID-GELEN . 52 2.3.7 WESTERN-BLOT . 53 2.3.8 IMMUNFAERBUNG DER WESTERN BLOT MEMBRAN . 53 2.3.9 ENDOTOXINENTFERNUNG . 53 2.3.10 ENDOTOXINKONZENTRATIONSBESTIMMUNG . 53 2.3.11 PROTEINKONZENTRATIONSBESTIMMUNG . 53 INHALTSVERZEICHNIS 2.4 MATERIALIEN DER FUNKTIONELLEN TESTUNG . 54 2.4.1 ENZYME LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY (ELISA) . 54 2.4.2 FACS-ANALYSE DER DARPIN BINDUNG AUF MURINEN LEUKOZYTEN . 54 2.5 MATERIALIEN DES CECAL LIGATION . 54 2.5.1 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CURRICULUM VITAE . 157 9 EIDESSTATTLICHE VERSICHERUNG . 159 10 ERKLAERUNG ZUM EIGENANTEIL AN DER PUBLIKATION . 160 11 PUBLIKATION . 161 12 DANKSAGUNG . 162 5
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