Systematische Charakterisierung des transkriptionellen Profils von humanen CD56-bright NK-Zellen der Leber:
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|---|---|
| Format: | Thesis Book |
| Language: | German |
| Published: |
Hamburg
2022
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|---|---|
| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
...........................................................................................................................
1
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
....................................................................................................
3
1.
ARBEITSHYPOTHESE
UND
FRAGESTELLUNG
............................................................................
4
2.
EINLEITUNG
..........................................................................................................................................
5
2.1
EINFUEHRUNG
IN
DAS
MENSCHLICHE
IMMUNSYSTEM
.............................................................................
5
2.2
NATUERLICHE
KILLERZELLEN
.....................................................................................................................
8
2.3
NK-ZELLEN
IN
DER
LEBER
.................................................................................................................
10
2.4
NK-ZELL-REZEPTOREN
.......................................................................................................................
12
2.5
TIGIT
.......................................................................................................................................
13
2.6
DNAM-1
(CD226)
..........................................................................................................................
16
2.7
CD96
.......................................................................................................................................
17
2.8
POLIOVIRUSREZEPTOR
(CD155)
..........................................................................................................
18
3.
MATERIAL
UND
METHODEN
...........................................................................................................
21
3.1
MATERIAL
..........................................................................................................................................
21
3.1.1
CHEMIKALIEN
...........................................................................................................................
21
3.1.2
KOMMERZIELLE
ASSAYS
UND
KITS
.............................................................................................
21
3.1.3
SOFTWARE
.................................................................................................................................
22
3.1.4
VERBRAUCHSMATERIAL
...............................................................................................................
22
3.1.5
GERAETE
UND
AUSRUESTUNG
........................................................................................................23
3.1.6
SONSTIGES
MATERIAL
................................................................................................................24
3.1.7
ANTIKOERPER
...............................................................................................................................24
3.1.8
OLIGONUKLEOTIDE
.....................................................................................................................25
3.1.9
ZELLLINIEN
.................................................................................................................................27
3.2
METHODEN
.......................................................................................................................................28
3.2.1
PATIENTINNENKOLLEKTIV
UND
PROBAND.INNEN
...............................................................................28
3.2.2
VERARBEITUNG
DER
BLUTPROBEN
ZUR
PLASMATRENNUNG
UND
AUFREINIGUNG
MONONUKLEAERER
ZELLEN
DES
PERIPHEREN
BLUTES
........................................................................................................................29
3.2.3
VERARBEITUNG
DER
LEBERPROBEN
ZUR
AUFREINIGUNG
INTRAHEPATISCHER
LYMPHOZYTEN
...............
31
3.2.4
ZELLZAEHLUNG
MIT
DEM
AUTOMATISCHEN
ZELLZAEHLER
.......................................................................
32
3.2.5
AUFTAUEN
VON
PBMCS
UND
IHLS
...............................................................................................
32
3.2.6
NK-ZELL-ISOLATION
........................................................................................................................
32
3.2.7
ANTIKOERPERFAERBUNG
FUER
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
............................................................................
33
3.2.8
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
.................................................................................................................
34
3.2.9
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
GATING-STRATEGIE
...................................................................................
34
3.2.10
EINZELZELL-MRNA-EXPRESSION
.................................................................................................
37
3.2.11
AUSWERTUNG
DER
EINZELZELL-MRNA-EXPRESSIONSDATEN
..........................................................40
3.2.12
DEGRANULATIONSASSAY
...............................................................................................................40
3.2.13
CO-KULTUR
ISOLIERTER
NK-ZELLEN
AUS
DEM
PERIPHEREN
BLUT
UND
DER
ZELLLINIE
HUH7
...............
41
3.2.14
CMV-LGG-ELISA
ZUM
CMV-ANTIKOERPERNACHWEIS
.................................................................42
3.2.15
VISUALISIERUNG
VON
T-DISTRIBUTED
STOCHASTIC
NEIGHBOR
EMBEDDING
(VISNE)
..........................42
3.2.16
STATISTISCHE
AUSWERTUNG
.........................................................................................................42
4.
ERGEBNISSE
.....................................................................................................................................
44
4.1
EINZELZELL-MRNA
EXPRESSIONSANALYSE
VON
HUMANEN
CD56BRIGHT
NK-ZELLEN
AUS
DEM
BLUT
UND
AUS
DER
LEBER
MITTELS
FLUIDIGM
SYSTEM
............................................................................................44
4.1.1
UNABHAENGIGE
GRUPPENBILDUNG
VON
INTRAHEPATISCHEN
UND
PERIPHEREN
BLUT
CD56BRIGHT
NK
ZELLEN
..............................................................................................................................................44
4.1.2
CD56BRIGHT
NK-ZELLEN
AUS
DEM
BLUT
UND
AUS
DER
LEBER
ZEIGTEN
UNTERSCHIEDLICHE
GENEXPRESSION
DER
LEBERRESIDENZMARKER
CD69,
CXCR6,
CCR5,
EOMES
UND
T-BET
.............
46
4.1.3
EINZELZELL-MRNA
ANALYSE
IDENTIFIZIERTE
MEHRERE
GENE
MIT
HOCHSIGNIFIKANT
UNTERSCHIEDLICHER
MRNA-EXPRESSION
ZWISCHEN
NK-ZELLEN
AUS
DER
LEBER
UND
AUS
DEM
BLUT..
47
4.2
PHAENOTYPISCHE
CHARAKTERISIERUNG
VON
TIGIT,
DNAM-1
UND
CD96
AUF
INTRAHEPATISCHEN
UND
PERPHEREN
BLUT
CD56BRIGHT
NK-ZELLEN
MITTELS
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
................................................
50
4.2.1
CD56BRIGHT
NK-ZELLEN
AUS
DER
LEBER
UND
AUS
DEM
BLUT
ZEIGEN
EINE
UNTERSCHIEDLICHE
EXPRESSION
VON
TIGIT,
DNAM-1
UND
CD96
IN
DER
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
..................................
50
4.3
FUNKTIONELLE
UNTERSUCHUNG
DER
CD56BRLGHT
NK-ZELLEN
................................................................
54
4.3.1
INTRAHEPATISCHE
TIGIT+
CD56
BR
9HT
NK-ZELLEN
ZEIGTEN
FUNKTIONELL
EINGESCHRAENKTE
CD107A-DEGRANULATION
UND
TNF-A-ANTWORT
................................................................................54
4.3.2
CD56
BR
9HT
NK-ZELLEN
AUS
DEM
BLUT
NAEHERN
SICH
NACH
CO-KULTUR
MIT
EINER
HUMANEN
HEPATOMAZELLLINIE
PHAENOTYPISCH
INTRAHEPATISCHEN
CD56
BRI9HT
NK-ZELLEN
AN
.............................
56
5.
DISKUSSION
.......................................................................................................................................
59
6.
ZUSAMMENFASSUNG
.....................................................................................................................
67
6.
SUMMARY
...........................................................................................................................................
68
7.
LITERATURVERZEICHNIS
...............................................................................................................69
8.
LEBENSLAUF
.....................................................................................................................................79
9.
DANKSAGUNG
...................................................................................................................................80
10.
EIDESSTATTLICHE
ERKLAERUNG
...............................................................................................
80
|
| adam_txt |
INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
.
1
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
.
3
1.
ARBEITSHYPOTHESE
UND
FRAGESTELLUNG
.
4
2.
EINLEITUNG
.
5
2.1
EINFUEHRUNG
IN
DAS
MENSCHLICHE
IMMUNSYSTEM
.
5
2.2
NATUERLICHE
KILLERZELLEN
.
8
2.3
NK-ZELLEN
IN
DER
LEBER
.
10
2.4
NK-ZELL-REZEPTOREN
.
12
2.5
TIGIT
.
13
2.6
DNAM-1
(CD226)
.
16
2.7
CD96
.
17
2.8
POLIOVIRUSREZEPTOR
(CD155)
.
18
3.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
21
3.1
MATERIAL
.
21
3.1.1
CHEMIKALIEN
.
21
3.1.2
KOMMERZIELLE
ASSAYS
UND
KITS
.
21
3.1.3
SOFTWARE
.
22
3.1.4
VERBRAUCHSMATERIAL
.
22
3.1.5
GERAETE
UND
AUSRUESTUNG
.23
3.1.6
SONSTIGES
MATERIAL
.24
3.1.7
ANTIKOERPER
.24
3.1.8
OLIGONUKLEOTIDE
.25
3.1.9
ZELLLINIEN
.27
3.2
METHODEN
.28
3.2.1
PATIENTINNENKOLLEKTIV
UND
PROBAND.INNEN
.28
3.2.2
VERARBEITUNG
DER
BLUTPROBEN
ZUR
PLASMATRENNUNG
UND
AUFREINIGUNG
MONONUKLEAERER
ZELLEN
DES
PERIPHEREN
BLUTES
.29
3.2.3
VERARBEITUNG
DER
LEBERPROBEN
ZUR
AUFREINIGUNG
INTRAHEPATISCHER
LYMPHOZYTEN
.
31
3.2.4
ZELLZAEHLUNG
MIT
DEM
AUTOMATISCHEN
ZELLZAEHLER
.
32
3.2.5
AUFTAUEN
VON
PBMCS
UND
IHLS
.
32
3.2.6
NK-ZELL-ISOLATION
.
32
3.2.7
ANTIKOERPERFAERBUNG
FUER
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
.
33
3.2.8
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
.
34
3.2.9
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
GATING-STRATEGIE
.
34
3.2.10
EINZELZELL-MRNA-EXPRESSION
.
37
3.2.11
AUSWERTUNG
DER
EINZELZELL-MRNA-EXPRESSIONSDATEN
.40
3.2.12
DEGRANULATIONSASSAY
.40
3.2.13
CO-KULTUR
ISOLIERTER
NK-ZELLEN
AUS
DEM
PERIPHEREN
BLUT
UND
DER
ZELLLINIE
HUH7
.
41
3.2.14
CMV-LGG-ELISA
ZUM
CMV-ANTIKOERPERNACHWEIS
.42
3.2.15
VISUALISIERUNG
VON
T-DISTRIBUTED
STOCHASTIC
NEIGHBOR
EMBEDDING
(VISNE)
.42
3.2.16
STATISTISCHE
AUSWERTUNG
.42
4.
ERGEBNISSE
.
44
4.1
EINZELZELL-MRNA
EXPRESSIONSANALYSE
VON
HUMANEN
CD56BRIGHT
NK-ZELLEN
AUS
DEM
BLUT
UND
AUS
DER
LEBER
MITTELS
FLUIDIGM
SYSTEM
.44
4.1.1
UNABHAENGIGE
GRUPPENBILDUNG
VON
INTRAHEPATISCHEN
UND
PERIPHEREN
BLUT
CD56BRIGHT
NK
ZELLEN
.44
4.1.2
CD56BRIGHT
NK-ZELLEN
AUS
DEM
BLUT
UND
AUS
DER
LEBER
ZEIGTEN
UNTERSCHIEDLICHE
GENEXPRESSION
DER
LEBERRESIDENZMARKER
CD69,
CXCR6,
CCR5,
EOMES
UND
T-BET
.
46
4.1.3
EINZELZELL-MRNA
ANALYSE
IDENTIFIZIERTE
MEHRERE
GENE
MIT
HOCHSIGNIFIKANT
UNTERSCHIEDLICHER
MRNA-EXPRESSION
ZWISCHEN
NK-ZELLEN
AUS
DER
LEBER
UND
AUS
DEM
BLUT.
47
4.2
PHAENOTYPISCHE
CHARAKTERISIERUNG
VON
TIGIT,
DNAM-1
UND
CD96
AUF
INTRAHEPATISCHEN
UND
PERPHEREN
BLUT
CD56BRIGHT
NK-ZELLEN
MITTELS
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
.
50
4.2.1
CD56BRIGHT
NK-ZELLEN
AUS
DER
LEBER
UND
AUS
DEM
BLUT
ZEIGEN
EINE
UNTERSCHIEDLICHE
EXPRESSION
VON
TIGIT,
DNAM-1
UND
CD96
IN
DER
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
.
50
4.3
FUNKTIONELLE
UNTERSUCHUNG
DER
CD56BRLGHT
NK-ZELLEN
.
54
4.3.1
INTRAHEPATISCHE
TIGIT+
CD56
BR
'
9HT
NK-ZELLEN
ZEIGTEN
FUNKTIONELL
EINGESCHRAENKTE
CD107A-DEGRANULATION
UND
TNF-A-ANTWORT
.54
4.3.2
CD56
BR
'
9HT
NK-ZELLEN
AUS
DEM
BLUT
NAEHERN
SICH
NACH
CO-KULTUR
MIT
EINER
HUMANEN
HEPATOMAZELLLINIE
PHAENOTYPISCH
INTRAHEPATISCHEN
CD56
BRI9HT
NK-ZELLEN
AN
.
56
5.
DISKUSSION
.
59
6.
ZUSAMMENFASSUNG
.
67
6.
SUMMARY
.
68
7.
LITERATURVERZEICHNIS
.69
8.
LEBENSLAUF
.79
9.
DANKSAGUNG
.80
10.
EIDESSTATTLICHE
ERKLAERUNG
.
80 |
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