Holdings: Die funktionelle Rolle von mechanosensitiven Ionenkanälen bei der Durotaxis von pankreatischen Sternzellen

Die funktionelle Rolle von mechanosensitiven Ionenkanälen bei der Durotaxis von pankreatischen Sternzellen:

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Bibliographic Details
Main Author:	Budde, Ilka 1998- (Author)
Format:	Thesis Book
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adam_text	INHALTSVERZEICHNIS 1. EINLEITUNG .............................................................................................................................. 1 1.1 DAS PANKREATISCHE DUKTALE ADENOKARZINOM .................................................................... 1 1.2 TUMORMIKROMILIEU ........................................................................................................... 1 1.3 PANKREATISCHE STERNZELLEN IM PDAC .............................................................................. 3 1.4 DIE BEDEUTUNG VON CA 2+ FUER DIE ZELLMIGRATION ................................................................ 4 1.5 DUROTAXIS ......................................................................................................................... 6 1.6 MECHANOTRANSDUKTION DURCH LONENKANAELE ....................................................................... 7 1.6.1 PIEZOL ...................................................................................................................... 9 1.6.2 TRP-KANAELE ............................................................................................................ 11 1.6.2.1 TRPC1 ............................................................................................................. 12 1.6.2.2 TRPV4 ............................................................................................................. 13 1.7 MECHANOSENSITIVE LONENKANAELE IN PSCS ...................................................................... 15 2. ZIELSETZUNG .......................................................................................................................... 17 3. MATERIALIEN UND METHODEN .................................................................................................. 18 3.1 MATERIALIEN .................................................................................................................... 18 3.1.1 MEDIEN .................................................................................................................... 18 3.1.2 CHEMIKALIEN ............................................................................................................ 18 3.1.3 ANTIKOERPER ............................................................................................................... 19 3.1.4 GERAETSCHAFTEN ......................................................................................................... 20 3.1.5 VERSUCHSTIERE ......................................................................................................... 20 3.2 METHODEN ...................................................................................................................... 20 3.2.1 UV-POLYMERISIERTE POLYACRYLAMIDGELE MIT STEIFIGKEITSGRADIENTEN ........................... 20 3.2.2 CHEMISCH-POLYMERISIERTER POLYACRYLAMIDGELE MIT HOMOGENER STEIFIGKEIT ................ 23 3.2.3 KOLLAGENBESCHICHTUNG DER POLYACRYLAMIDGELE ........................................................ 24 3.2.4 STEIFIGKEITSMESSUNGEN DER POLYACRYLAMIDGELE MITTELS AFM ................................... 26 3.2.5 ISOLATION MURINER PANKREATISCHER STERNZELLEN ......................................................... 28 3.2.6 ZELLKULTUR UND MEDIEN ............................................................................................. 29 3.2.7 VORBEREITUNG DER MIGRATION UND AUSSAEEN VON PSCS AUF POLYACRYLAMIDGELEN ........ 30 3.2.8 DUROTAXISEXPERIMENTE MIT PANKREATISCHEN STERNZELLEN ......................................... 30 3.2.9 IMMUNFLUORESZENZFAERBUNGEN ................................................................................. 32 3.2.9.1 A-SMA UND VIMENTIN-IMMUNFAERBUNG PANKREATISCHER STERNZELLEN .................. 32 3.2.9.2 PIEZOL-KANALFAERBUNG ........................................................................................ 34 3.2.9.2.1 AUSWERTUNG DER PIEZOL-KANALFAERBUNG MITTELS IMAGEJ .............................. 35 3.2.10 CA 2+ -MESSUNGEN MITTELS FURA-2 ........................................................................... 36 3.2.11 STATISTISCHE ANALYSEN ........................................................................................... 38 4. ERGEBNISSE ......................................................................................................................... 39 4.1 STEIFIGKEITSMESSUNGEN DER POLYACRYLAMIDGELE ............................................................. 39 4.2 MIGRATIONS UND AKTIVIERUNGSPARAMETER DER PSCS HAENGEN VON DER GELSTEIFIGKEIT AB ...41 4.3 MIGRATION VON PSCS AUF GRADIENTENGELEN .................................................................... 42 4.3.1 VERSTAERKTE STERNZELLAKTIVIERUNG IM STEIFEN GRADIENTENBEREICH ............................... 42 4.3.2 DUROTAXIS VON PSCS ............................................................................................... 44 4.4 PSCS ZEIGEN IN STEIFERER UMGEBUNG HOEHERE INTRAZELLULAERE CA 2+ -KONZENTRATIONEN ....... 46 4.5 MECHANOSENSITIVE LONENKANAELE SIND DUROTAKTISCHE SENSOREN VON PSCS ..................... 47 4.6 HOEHERE PIEZOL-DICHTE IN DER ZELLPERIPHERIE .................................................................. 51 4.7 CA 2+ -MESSUNGEN UNTER YODAL-INDUZIERTER PIEZOL-AKTIVIERUNG IN ABHAENGIGKEIT DER MATRIXSTEIFIGKEIT ............................................................................................................. 52 5. DISKUSSION .......................................................................................................................... 54 5.1 GRADIENTENGEL ALS MODELLSYSTEM DER STEIFIGKEITSVERHAELTNISSE IM PDAC ....................... 55 5.2 PSCS ZEIGEN EINE POSITIVE DUROTAXIS UND WERDEN DURCH HOEHERE ECM-STEIFIGKEITEN AKTIVIERT .......................................................................................................................... 56 5.3 BETEILIGUNG MECHANOSENSITIVER LONENKANAELE AN DER DUROTAXIS PSCS ........................... 58 5.4 MOEGLICHER MOLEKULARER MECHANISMUS DER MECHANOTRANSDUKTION MITTELS LONENKANAELE. .61 5.5 PIEZO-1-EXPRESSION IM BEREICH VON ZELL-MATRIX-KONTAKTZONEN .................................... 64 5.6 EINFLUSS DER MATRIX-STEIFIGKEIT AUF DIE INTRAZELLULAERE CA 2+ -KONZENTRATION VON PSCS ..... 65 5.7 DIE BEDEUTUNG DER DUROTAXIS IM KONTEXT DER PATHOPHYSIOLOGIE DES PDACS ............... 68 6. AUSBLICK .............................................................................................................................. 69 7. LITERATURVERZEICHNIS ............................................................................................................ 71 8. DANKSAGUNG ....................................................................................................................... 81 9. LEBENSLAUF .......................................................................................................................... 82 10. ANHANG ............................................................................................................................. I
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