Die Bedeutung von TRPC1, 3 und 6 für die Pathogenese der durch chronische Hypoxie induzierten pulmonalen Hypertonie: Inaugural-Dissertation zur Erlangung des Grades eines Dr. med. vet. beim Fachbereich Veterinärmedizin der Justus-Liebig-Universität Gießen
Saved in:
| Main Author: | |
|---|---|
| Format: | Thesis Book |
| Language: | German |
| Published: |
Gießen
VVB Laufersweiler Verlag
2022
|
| Edition: | 1. Auflage |
| Series: | Edition scientifique
|
| Subjects: | |
| Online Access: | Inhaltsverzeichnis |
| Physical Description: | VI, 161 Seiten 21 cm x 14.8 cm, 190 g |
| ISBN: | 9783835970571 3835970577 |
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MARC
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|---|---|
| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
1
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
...............................................................................................................
1
2
EINLEITUNG.................................................................................................................
7
2.1
PULMONALE
HYPERTONIE
DES
MENSCHEN
.......................................................................
7
2.1.1
DEFINITION
UND
KLASSIFIKATION
DER
PULMONALEN
HYPERTONIE
....................................................................
7
2.1.2
EPIDEMIOLOGIE
UND
PROGNOSE
...................................................................................................................
10
2.1.3
PATHOGENESE
..............................................................................................................................................
11
2.1.4
PULMONALE
HYPERTONIE
UND
LINKSVENTRIKULAERE
HYPERTROPHIE
...............................................................
13
2.1.5
PULMONALE
HYPERTONIE
UND
RECHTSVENTRIKULAERE
HYPERTROPHIE
............................................................
14
2.1.6
KLINIK
UND
GRUPPENEINTEILUNG
..................................................................................................................
15
2.1.7
THERAPIE
....................................................................................................................................................
16
2.2
MAUSMODELLE
DER
PULMONALEN
HYPERTONIE
.................................................................
17
2.2.1
CHRONISCHE
HYPOXIEEXPOSITION
...............................................................................................................
17
2.2.2
SUGEN5416
UND
CHRONISCHE
HYPOXIE
......................................................................................................
18
2.2.3
MONOCROTALIN
...........................................................................................................................................
19
2.2.4
WAHL
DES
MODELLS
DER
CHRONISCHEN
HYPOXIEEXPOSITION
IN
DER
MAUS
.................................................20
2.3
TRANSIENTE
REZEPTOR
POTENTIAL
PROTEINE
......................................................................
20
2.3.1
DIE
TRP
SUPERFAMILIE
..............................................................................................................................
20
2.3.2
DIE
KLASSISCHE
TRP
SUBFAMILIE
................................................................................................................
22
2.3.3
ROLLE
VON
TRPC
KANAELEN
BEI
PH
..............................................................................................................
24
2.4
ZIEL
DER
VORLIEGENDEN
ARBEIT
.......................................................................................
24
3
MATERIAL
UND
METHODEN
.....................................................................................................26
3.1
MATERIAL
.........................................................................................................................
26
3.1.1
GERAETE
UND
SOFTWARE
...............................................................................................................................
26
3.1.2
VEBRAUCHSMATERIALIEN
.............................................................................................................................29
3.1.3
CHEMIKALIEN
..............................................................................................................................................
30
3.1.4
KITS
UND
ASSAYS
.........................................................................................................................................
33
3.1.5
ANTIKOERPER
FUER
WESTERN
BLOT
...................................................................................................................
34
3.1.6
ANTIKOERPER
FUER
IMMUNHISTOCHEMIE
.........................................................................................................
34
3.1.7
ENZYME
UND
STANDARDS
............................................................................................................................
35
3.1.8
PRIMER
........................................................................................................................................................
35
3.1.9
PUFFER
UND
LOESUNGEN
...............................................................................................................................37
3.1.10
MEDIEN
......................................................................................................................................................39
3.1.11
MEDIENZUSAMMENSETZUNG
......................................................................................................................
40
3.1.12
MAUSLINIEN
................................................................................................................................................
40
3.1.13
VERSUCHSTIERE
...........................................................................................................................................
41
3.1.14
TIERVERSUCHSGENEHMIGUNGEN
.................................................................................................................
41
3.2
METHODEN
.....................................................................................................................
42
3.2.1
MAUSMODELL:
CHRONISCHE
HYPOXIEEXPOSITION
........................................................................................
42
3.2.2
ECHOKARDIOGRAPHIE
..................................................................................................................................
43
3.2.3
HAEMODYNAMISCHE
MESSUNG
...................................................................................................................
44
3.2.4
MESSUNG
DES
HAEMATOKRITEN
...................................................................................................................
45
3.2.5
PRAEPARATION
DER
LUNGE
.............................................................................................................................
45
3.2.6
ERMITTLUNG
DER
HERZGEWICHTE
.................................................................................................................
46
3.2.7
IMMUNHISTOCHEMISCHE
FAERBUNG
.............................................................................................................
46
IV
3.2.8
PICRO-SIRIUS
RED
FAERBUNG
.........................................................................................................................
49
3.2.9
ISOLIERTE,
VENTILIERTE
UND
BLUTFREI
PERFUNDIERTE
LUNGE
..........................................................................
50
3.2.10
MYOGRAPHIE
VON
ISOLIERTEN
BLUTGEFAESSEN
................................................................................................
51
3.2.11
ISOLIERUNG
UND
KULTIVIERUNG
MURINER
PULMONALARTERIELLER
GLATTER
MUSKELZELLEN
................................
52
3.2.12
PROLIFERATIONSASSAY
..................................................................................................................................
53
3.2.13
MIGRATIONSASSAY
.......................................................................................................................................54
3.2.14
APOPTOSEASSAY
........................................................................................................................................
55
3.2.15
CALCIUMMESSUNGEN
..................................................................................................................................
56
3.2.16
RNA
ISOLATION
............................................................................................................................................
60
3.2.17
REVERSE
TRANSKRIPTIONS-POLYMERASE
KETTENREAKTION
............................................................................
61
3.2.18
RELATIVE
QUANTIFIZIERUNG
MITTELS
ECHTZEIT
PCR
......................................................................................
61
3.2.19
PROTEINEXTRAKTION
....................................................................................................................................
62
3.2.20
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
..................................................................................................
63
3.2.21
TRIZIN-SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
......................................................................................
63
3.2.22
WESTERN
BLOT
............................................................................................................................................64
3.2.23
ENZYME-LINKED
IMMUNOSORBENT
ASSAY
...................................................................................................
65
3.2.24
STATISTIK
.....................................................................................................................................................67
4
ERGEBNISSE
............................................................................................................................
68
4.1
BESCHREIBUNG
DER
LINIEN
TRPC
WT
UND
TRPC1/3/6
................................................
68
4.2
EINFLUSS
VON
TRPC1,
3
UND
6
AUF
DIE
ENTSTEHUNG
EINER
CHRONISCHEN
HYPOXIE
INDUZIERTEN
PULMONALEN
HYPERTONIE
.........................................................................
69
4.2.1
HAEMODYNAMISCHE
MESSUNGEN
...............................................................................................................69
4.2.2
ECHOKARDIOGRAFISCHE
MESSUNGEN
............................................................................................................
71
4.2.3
HISTOLOGISCHE
BESTIMMUNG
DES
MUSKULARISIERUNGSGRADES
DER
LUNGENGEFAESSE
...................................
75
4.3
EINFLUSS
VON
TRPC1,
3
UND
6
AUF
PASMC
NACH
CHRONISCHER
HYPOXIEEXPOSITION
......
76
4.3.1
PROLIFERATION
.............................................................................................................................................76
4.3.2
MIGRATION
..................................................................................................................................................
77
4.3.3
APOPTOSE
..................................................................................................................................................
78
4.3.4
GENEXPRESSION
.........................................................................................................................................
79
4.3.5
PROTEINEXPRESSION
...................................................................................................................................81
4.4
EINFLUSS
VON
TRPC1,
3
UND
6
AUF
DEN
CA
2+
-HAUSHALT
VON
PASMC
NACH
CHRONISCHER
HYPOXIEEXPOSITION
......................................................................................................
85
4.4.1
UNTERSUCHUNG
DES
REZEPTOR-VERMITTELTEN
CA
2+
-EINSTROMS
..................................................................
86
4.4.2
UNTERSUCHUNG
DES
SPEICHER-VERMITTELTEN
CA
2+
-EINSTROMS
.................................................................
88
4.4.3
UNTERSUCHUNG
REGULATORISCHER
KOMPENSATIONEN
DES
REZEPTOR
UND
SPEICHER-VERMITTELTEN
CA
2+
-
EINSTROMS
.................................................................................................................................................
90
4.5
EINFLUSS
VON
TRPC1,
3
UND
6
AUF
PHYSIOLOGISCHE
EIGENSCHAFTEN
(PHAENOTYP)
...........
94
4.5.1
HAEMODYNAMISCHE
MESSUNGEN
...............................................................................................................
94
4.5.2
ECHOKARDIOGRAFISCHE
MESSUNGEN
...........................................................................................................
96
4.5.3
HISTOLOGISCHE
BESTIMMUNG
DES
KOLLAGENGEHALTS
DES
RECHTEN
UND
LINKEN
VENTRIKELS
SOWIE
DER
LUNGE
.......................................................................................................................................................
98
4.5.4
UNTERSUCHUNGEN
DER
KONTRAKTILITAET
VON
PULMONALARTERIE
UND
AORTA
...............................................
100
4.5.5
GENEXPRESSION
.......................................................................................................................................
101
4.5.6
ENZYME-LINKED
IMMUNOSORBENT
ASSAY
.................................................................................................
105
5
DISKUSSION
..........................................................................................................................
107
5.1
WAHL
VON
TRPC1,
3
UND
6
ALS
KANDIDAT
FUER
DIE
ENTSTEHUNG
VON
CHPH
.....................
107
5.2
VERWENDETE
MODELLE
.................................................................................................
109
V
5.2.1
WAHL
DES
TIERMODELLS
............................................................................................................................
109
5.2.2
WAHL
DES
ZELLKULTURMODELLS
..................................................................................................................
111
5.3
BEDEUTUNG
VON
TRPC1,
3
UND
6
FUER
DIE
ENTSTEHUNG
EINER
CHPH
.............................
112
5.3.1
TRPC1,
3
UND
6
IN
VIVO
...........................................................................................................................
112
5.3.2
TRPC1,
3
UND
6
IN
VITRO
..........................................................................................................................
114
5.4
EINFLUSS
DES
GLOBALEN
KNOCKOUTS
VON
TRPC1,
3
UND
6
AUF
DIE
PHYSIOLOGIE
DER
MAUS
..........................................................................................................................
123
5.4.1
ENTSTEHUNG
VON
RECHTS
UND
LINKSVENTRIKULAERER
HYPERTROPHIE
..........................................................123
5.4.2
EINFLUSS
AUF
DEN
KOLLAGENHAUSHALT
.......................................................................................................
127
5.5
RESUEMEE
UND
AUSBLICK
...............................................................................................
129
6
ZUSAMMENFASSUNG
..............................................................................................................
131
7
SUMMARY.............................................................................................................................
133
8
LITERATURVERZEICHNIS
............................................................................................................
135
9
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
.......................................................................................................
153
10
TABELLENVERZEICHNIS............................................................................................................
155
11
EIDESSTATTLICHE
ERKLAERUNG
...................................................................................................
156
12
ANHANG
................................................................................................................................
157
12.1
ISOLIERTE,
VENTILIERTE
UND
BLUTFREI
PERFUNDIERTE
LUNGE...............................................
157
12.2
VEROEFFENTLICHUNGEN
....................................................................................................
158
12.3
KONGRESSBEITRAEGE
.........................................................................................................
158
12.4
FOERDERUNG
....................................................................................................................
159
13
DANKSAGUNG
.........................................................................................................................
160
VI
|
| adam_txt |
INHALTSVERZEICHNIS
1
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
.
1
2
EINLEITUNG.
7
2.1
PULMONALE
HYPERTONIE
DES
MENSCHEN
.
7
2.1.1
DEFINITION
UND
KLASSIFIKATION
DER
PULMONALEN
HYPERTONIE
.
7
2.1.2
EPIDEMIOLOGIE
UND
PROGNOSE
.
10
2.1.3
PATHOGENESE
.
11
2.1.4
PULMONALE
HYPERTONIE
UND
LINKSVENTRIKULAERE
HYPERTROPHIE
.
13
2.1.5
PULMONALE
HYPERTONIE
UND
RECHTSVENTRIKULAERE
HYPERTROPHIE
.
14
2.1.6
KLINIK
UND
GRUPPENEINTEILUNG
.
15
2.1.7
THERAPIE
.
16
2.2
MAUSMODELLE
DER
PULMONALEN
HYPERTONIE
.
17
2.2.1
CHRONISCHE
HYPOXIEEXPOSITION
.
17
2.2.2
SUGEN5416
UND
CHRONISCHE
HYPOXIE
.
18
2.2.3
MONOCROTALIN
.
19
2.2.4
WAHL
DES
MODELLS
DER
CHRONISCHEN
HYPOXIEEXPOSITION
IN
DER
MAUS
.20
2.3
TRANSIENTE
REZEPTOR
POTENTIAL
PROTEINE
.
20
2.3.1
DIE
TRP
SUPERFAMILIE
.
20
2.3.2
DIE
KLASSISCHE
TRP
SUBFAMILIE
.
22
2.3.3
ROLLE
VON
TRPC
KANAELEN
BEI
PH
.
24
2.4
ZIEL
DER
VORLIEGENDEN
ARBEIT
.
24
3
MATERIAL
UND
METHODEN
.26
3.1
MATERIAL
.
26
3.1.1
GERAETE
UND
SOFTWARE
.
26
3.1.2
VEBRAUCHSMATERIALIEN
.29
3.1.3
CHEMIKALIEN
.
30
3.1.4
KITS
UND
ASSAYS
.
33
3.1.5
ANTIKOERPER
FUER
WESTERN
BLOT
.
34
3.1.6
ANTIKOERPER
FUER
IMMUNHISTOCHEMIE
.
34
3.1.7
ENZYME
UND
STANDARDS
.
35
3.1.8
PRIMER
.
35
3.1.9
PUFFER
UND
LOESUNGEN
.37
3.1.10
MEDIEN
.39
3.1.11
MEDIENZUSAMMENSETZUNG
.
40
3.1.12
MAUSLINIEN
.
40
3.1.13
VERSUCHSTIERE
.
41
3.1.14
TIERVERSUCHSGENEHMIGUNGEN
.
41
3.2
METHODEN
.
42
3.2.1
MAUSMODELL:
CHRONISCHE
HYPOXIEEXPOSITION
.
42
3.2.2
ECHOKARDIOGRAPHIE
.
43
3.2.3
HAEMODYNAMISCHE
MESSUNG
.
44
3.2.4
MESSUNG
DES
HAEMATOKRITEN
.
45
3.2.5
PRAEPARATION
DER
LUNGE
.
45
3.2.6
ERMITTLUNG
DER
HERZGEWICHTE
.
46
3.2.7
IMMUNHISTOCHEMISCHE
FAERBUNG
.
46
IV
3.2.8
PICRO-SIRIUS
RED
FAERBUNG
.
49
3.2.9
ISOLIERTE,
VENTILIERTE
UND
BLUTFREI
PERFUNDIERTE
LUNGE
.
50
3.2.10
MYOGRAPHIE
VON
ISOLIERTEN
BLUTGEFAESSEN
.
51
3.2.11
ISOLIERUNG
UND
KULTIVIERUNG
MURINER
PULMONALARTERIELLER
GLATTER
MUSKELZELLEN
.
52
3.2.12
PROLIFERATIONSASSAY
.
53
3.2.13
MIGRATIONSASSAY
.54
3.2.14
APOPTOSEASSAY
.
55
3.2.15
CALCIUMMESSUNGEN
.
56
3.2.16
RNA
ISOLATION
.
60
3.2.17
REVERSE
TRANSKRIPTIONS-POLYMERASE
KETTENREAKTION
.
61
3.2.18
RELATIVE
QUANTIFIZIERUNG
MITTELS
ECHTZEIT
PCR
.
61
3.2.19
PROTEINEXTRAKTION
.
62
3.2.20
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
.
63
3.2.21
TRIZIN-SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
.
63
3.2.22
WESTERN
BLOT
.64
3.2.23
ENZYME-LINKED
IMMUNOSORBENT
ASSAY
.
65
3.2.24
STATISTIK
.67
4
ERGEBNISSE
.
68
4.1
BESCHREIBUNG
DER
LINIEN
TRPC
WT
UND
TRPC1/3/6
.
68
4.2
EINFLUSS
VON
TRPC1,
3
UND
6
AUF
DIE
ENTSTEHUNG
EINER
CHRONISCHEN
HYPOXIE
INDUZIERTEN
PULMONALEN
HYPERTONIE
.
69
4.2.1
HAEMODYNAMISCHE
MESSUNGEN
.69
4.2.2
ECHOKARDIOGRAFISCHE
MESSUNGEN
.
71
4.2.3
HISTOLOGISCHE
BESTIMMUNG
DES
MUSKULARISIERUNGSGRADES
DER
LUNGENGEFAESSE
.
75
4.3
EINFLUSS
VON
TRPC1,
3
UND
6
AUF
PASMC
NACH
CHRONISCHER
HYPOXIEEXPOSITION
.
76
4.3.1
PROLIFERATION
.76
4.3.2
MIGRATION
.
77
4.3.3
APOPTOSE
.
78
4.3.4
GENEXPRESSION
.
79
4.3.5
PROTEINEXPRESSION
.81
4.4
EINFLUSS
VON
TRPC1,
3
UND
6
AUF
DEN
CA
2+
-HAUSHALT
VON
PASMC
NACH
CHRONISCHER
HYPOXIEEXPOSITION
.
85
4.4.1
UNTERSUCHUNG
DES
REZEPTOR-VERMITTELTEN
CA
2+
-EINSTROMS
.
86
4.4.2
UNTERSUCHUNG
DES
SPEICHER-VERMITTELTEN
CA
2+
-EINSTROMS
.
88
4.4.3
UNTERSUCHUNG
REGULATORISCHER
KOMPENSATIONEN
DES
REZEPTOR
UND
SPEICHER-VERMITTELTEN
CA
2+
-
EINSTROMS
.
90
4.5
EINFLUSS
VON
TRPC1,
3
UND
6
AUF
PHYSIOLOGISCHE
EIGENSCHAFTEN
(PHAENOTYP)
.
94
4.5.1
HAEMODYNAMISCHE
MESSUNGEN
.
94
4.5.2
ECHOKARDIOGRAFISCHE
MESSUNGEN
.
96
4.5.3
HISTOLOGISCHE
BESTIMMUNG
DES
KOLLAGENGEHALTS
DES
RECHTEN
UND
LINKEN
VENTRIKELS
SOWIE
DER
LUNGE
.
98
4.5.4
UNTERSUCHUNGEN
DER
KONTRAKTILITAET
VON
PULMONALARTERIE
UND
AORTA
.
100
4.5.5
GENEXPRESSION
.
101
4.5.6
ENZYME-LINKED
IMMUNOSORBENT
ASSAY
.
105
5
DISKUSSION
.
107
5.1
WAHL
VON
TRPC1,
3
UND
6
ALS
KANDIDAT
FUER
DIE
ENTSTEHUNG
VON
CHPH
.
107
5.2
VERWENDETE
MODELLE
.
109
V
5.2.1
WAHL
DES
TIERMODELLS
.
109
5.2.2
WAHL
DES
ZELLKULTURMODELLS
.
111
5.3
BEDEUTUNG
VON
TRPC1,
3
UND
6
FUER
DIE
ENTSTEHUNG
EINER
CHPH
.
112
5.3.1
TRPC1,
3
UND
6
IN
VIVO
.
112
5.3.2
TRPC1,
3
UND
6
IN
VITRO
.
114
5.4
EINFLUSS
DES
GLOBALEN
KNOCKOUTS
VON
TRPC1,
3
UND
6
AUF
DIE
PHYSIOLOGIE
DER
MAUS
.
123
5.4.1
ENTSTEHUNG
VON
RECHTS
UND
LINKSVENTRIKULAERER
HYPERTROPHIE
.123
5.4.2
EINFLUSS
AUF
DEN
KOLLAGENHAUSHALT
.
127
5.5
RESUEMEE
UND
AUSBLICK
.
129
6
ZUSAMMENFASSUNG
.
131
7
SUMMARY.
133
8
LITERATURVERZEICHNIS
.
135
9
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
.
153
10
TABELLENVERZEICHNIS.
155
11
EIDESSTATTLICHE
ERKLAERUNG
.
156
12
ANHANG
.
157
12.1
ISOLIERTE,
VENTILIERTE
UND
BLUTFREI
PERFUNDIERTE
LUNGE.
157
12.2
VEROEFFENTLICHUNGEN
.
158
12.3
KONGRESSBEITRAEGE
.
158
12.4
FOERDERUNG
.
159
13
DANKSAGUNG
.
160
VI |
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| spelling | Malkmus, Kathrin Verfasser (DE-588)1268680745 aut Die Bedeutung von TRPC1, 3 und 6 für die Pathogenese der durch chronische Hypoxie induzierten pulmonalen Hypertonie Inaugural-Dissertation zur Erlangung des Grades eines Dr. med. vet. beim Fachbereich Veterinärmedizin der Justus-Liebig-Universität Gießen eingereicht von Kathrin Malkmus 1. Auflage Gießen VVB Laufersweiler Verlag 2022 VI, 161 Seiten 21 cm x 14.8 cm, 190 g txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Edition scientifique Dissertation Justus-Liebig-Universität Gießen 2022 hypoxia cabt muscular hypertrophy cabt mice cabt apoptosis cabt vascular diseases cabt PAGE cabt Lunge Pulmonal Hypoxie (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content VVB LAUFERSWEILER Verlag (DE-588)1065553803 pbl DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=033907970&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis 1\p vlb 20220914 DE-101 https://d-nb.info/provenance/plan#vlb |
| spellingShingle | Malkmus, Kathrin Die Bedeutung von TRPC1, 3 und 6 für die Pathogenese der durch chronische Hypoxie induzierten pulmonalen Hypertonie Inaugural-Dissertation zur Erlangung des Grades eines Dr. med. vet. beim Fachbereich Veterinärmedizin der Justus-Liebig-Universität Gießen hypoxia cabt muscular hypertrophy cabt mice cabt apoptosis cabt vascular diseases cabt PAGE cabt |
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