Über die ZNS-Effekte von Interleukin-17 im Cuprizone-Modell der Multiplen Sklerose:
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| Published: |
Bonn
[2021]
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|---|---|
| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
................................................................................................
8
1.
EINLEITUNG
...............................................................................................................
10
1.1
EPIDEMIOLOGIE,
KLINIK
UND
PATHOMECHANISMEN
DER
MULTIPLEN
SKLEROSE
...............
10
1.2
CUPRIZONE-INDUZIERTE
DEMYELINISIERUNG
ALS
MODELL
DER
MULTIPLEN
SKLEROSE
........
12
1.3
LNTERLEUKIN-17
........................................................................................................
15
1.4
DIE
ROLLE
VON
IL-17
BEI
AUTOIMMUNEN
PROZESSEN
IM
ZNS
...................................
17
1.5
DIE
TRANSGENE
GFAP/IL-17-MAUS
ALS
TIERMODELL
.................................................
18
1.6
DIE
FRAGESTELLUNG
DER
ARBEIT
................................................................................
20
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
........................................................................................
21
2.1
MATERIAL
.................................................................................................................
21
2.1.1
GERAETE
...................................................................................................................
21
2.1.2
SOFTWARE
................................................................................................................
22
2.1.3
INSTRUMENTE,
KULTURGEFAESSE,
PIPETTEN
UND
ANDERE
MATERIALIEN
..............................
23
2.1.4
CHEMIKALIEN,
REAGENZIEN
UND
PUFFER
..................................................................
24
2.1.5
REAGENZIEN
FUER
CDNA-SYNTHESE
UND
QRT-PCR
..................................................
26
2.1.6
ANTIKOERPER
UND
FLUORESZENZFARBSTOFFE
..................................................................
26
2.2
METHODEN
.............................................................................................................
28
2.2.1
TIERMODELL
.............................................................................................................
28
2.2.2APPLIKATION
VON
CUPRIZONE
UND
GEWEBEENTNAHME
..............................................
28
2.2.3
GEWEBEVORBEREITUNG
FUER
DIE
HISTOLOGISCHEN
FAERBUNGEN
......................................
30
2.2.4
IMMUNHISTOCHEMIE
................................................................................................
32
2.2.5
ANALYSE
DER
DEMYELINISIERUNG
MIT
HILFE
DES
MYELIN-SCORES
.................................
34
2.2.6 QUANTIFIZIERUNG
VON
DEMYELINISIERUNG
UND
ASTROZYTOSE
ANHAND
RELATIVER
MITTLERER
FLUORESZENZINTENSITAET
............................................................................
36
2.2.7
ANALYSE
DER
MIKROGLIA
HINSICHTLICH
ZELLDICHTE,
PROLIFERATION
UND
AKTIVIERUNG
UND
BESTIMMUNG
DER
ZELLDICHTE
DER
OLIGODENDROZYTEN
.......................................
36
2.2.8
ANALYSE
DER
STRUKTURPROTEIN
UND
ZYTOKIN-MRNA
MITTELS
QRT-PCR
.....................
37
2.2.9
ISOLIERUNG
VON
IMMUNZELLEN
AUS
DEM
ZNS
UND
ANSCHLIESSENDE
VORBEREITUNG
UND
DURCHFUEHRUNG
FLUORESZENZBASIERTER
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
............................
42
6
2.2.10
VERHALTENSANALYSE
DER
VERSUCHSTIERE
IM
ELEVATED
PLUS
MAZE
.......................
47
2.2.11
GEWICHTSBESTIMMUNG
.......................................................................................
48
2.2.12 STATISTISCHE
ANALYSE
..........................................................................................
48
3.
ERGEBNISSE
..............................................................................................................
50
3.1
GEWICHTSENTWICKLUNG
DER
VERSUCHSTIERE
UNTER
CUPRIZONE-EXPOSITION
..................
50
3.2
AKTIVITAETS
UND
AENGSTLICHKEITSVERHALTEN
DER
MAEUSE
IM
ELEVATED
PLUS
MAZE
........
51
3.3
QUANTIFIZIERUNG
DER
DEMYELINISIERUNG
MIT
HILFE
DES
MYELIN-SCORES
VON
FLUOROMYELIN
UND
PLP
...........................................................................................
54
3.4
QUANTIFIZIERUNG
DER
DEMYELINISIERUNG
DURCH
ANALYSE
DER
RELATIVEN
MITTLEREN
FLUORESZENZINTENSITAET
VON
FLUOROMYELIN,
PLP
UND
MBP
.......................
57
3.5
ANALYSE
DER
EXPRESSION
DER
MYELIN-PROTEINE
MBP
UND
PLP
MITTELS
QRT-PCR
..............................................................................................................
60
3.6
ANALYSE
VON
NOGOA-FAERBUNGEN
ZUR
BESTIMMUNG
DER
ZELLDICHTE
VON
OLIGODENDROZYTEN
.................................................................................................
62
3.7
QUANTIFIZIERUNG
DER
ASTROZYTOSE
DURCH
ANALYSE
DER
RELATIVEN
MITTLEREN
FLUORESZENZINTENSITAET
VON
GFAP
.........................................................................
65
3.8
BESTIMMUNG
DER
ZELLDICHTE
ALLER
(IBA1
),
BZW.
DER
AKTIVIERTEN
(CD68)
MIKROGLIA
IN
HISTOLOGISCHEN
FAERBUNGEN
.................................................................
68
3.9
DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE
ANALYSE
DER
MIKROGLIA-AKTIVIERUNG
MIT
HILFE
DER
OBERFLAECHENMARKER
CD45
UND
CD11B
...........................................................
71
3.10
DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE
UND
HISTOLOGISCHE
ANALYSEN
DER
PROLIFERATION
VON
MIKROGLIA
MIT
HILFE
DER
PROLIFERATIONSMARKER
EDU
UND
KI67
...........................
72
3.11
UNTERSUCHUNG
DER
LOKALEN
ENTZUENDUNGSREAKTION
MITTELS
ANALYSE
DER
EXPRESSION
VON
TNF-A
..........................................................................................
75
3.12 UNTERSUCHUNG
DER
GRANULOZYTAEREN
ZNS-INFILTRATION
MITTELS
FACS-ANALYSE
DER
OBERFLAECHENMARKER
CD45
UND
LY6G
.............................................................
75
4.
DISKUSSION
.............................................................................................................
78
5.
ZUSAMMENFASSUNG
...............................................................................................
89
6.
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
.........................................................................................
90
7.
TABELLENVERZEICHNIS
..............................................................................................
92
7
8.
LITERATURVERZEICHNIS
...........................................................................................
93
9.
DANKSAGUNG
.......................................................................................................
107
|
| adam_txt |
INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
.
8
1.
EINLEITUNG
.
10
1.1
EPIDEMIOLOGIE,
KLINIK
UND
PATHOMECHANISMEN
DER
MULTIPLEN
SKLEROSE
.
10
1.2
CUPRIZONE-INDUZIERTE
DEMYELINISIERUNG
ALS
MODELL
DER
MULTIPLEN
SKLEROSE
.
12
1.3
LNTERLEUKIN-17
.
15
1.4
DIE
ROLLE
VON
IL-17
BEI
AUTOIMMUNEN
PROZESSEN
IM
ZNS
.
17
1.5
DIE
TRANSGENE
GFAP/IL-17-MAUS
ALS
TIERMODELL
.
18
1.6
DIE
FRAGESTELLUNG
DER
ARBEIT
.
20
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
21
2.1
MATERIAL
.
21
2.1.1
GERAETE
.
21
2.1.2
SOFTWARE
.
22
2.1.3
INSTRUMENTE,
KULTURGEFAESSE,
PIPETTEN
UND
ANDERE
MATERIALIEN
.
23
2.1.4
CHEMIKALIEN,
REAGENZIEN
UND
PUFFER
.
24
2.1.5
REAGENZIEN
FUER
CDNA-SYNTHESE
UND
QRT-PCR
.
26
2.1.6
ANTIKOERPER
UND
FLUORESZENZFARBSTOFFE
.
26
2.2
METHODEN
.
28
2.2.1
TIERMODELL
.
28
2.2.2APPLIKATION
VON
CUPRIZONE
UND
GEWEBEENTNAHME
.
28
2.2.3
GEWEBEVORBEREITUNG
FUER
DIE
HISTOLOGISCHEN
FAERBUNGEN
.
30
2.2.4
IMMUNHISTOCHEMIE
.
32
2.2.5
ANALYSE
DER
DEMYELINISIERUNG
MIT
HILFE
DES
MYELIN-SCORES
.
34
2.2.6 QUANTIFIZIERUNG
VON
DEMYELINISIERUNG
UND
ASTROZYTOSE
ANHAND
RELATIVER
MITTLERER
FLUORESZENZINTENSITAET
.
36
2.2.7
ANALYSE
DER
MIKROGLIA
HINSICHTLICH
ZELLDICHTE,
PROLIFERATION
UND
AKTIVIERUNG
UND
BESTIMMUNG
DER
ZELLDICHTE
DER
OLIGODENDROZYTEN
.
36
2.2.8
ANALYSE
DER
STRUKTURPROTEIN
UND
ZYTOKIN-MRNA
MITTELS
QRT-PCR
.
37
2.2.9
ISOLIERUNG
VON
IMMUNZELLEN
AUS
DEM
ZNS
UND
ANSCHLIESSENDE
VORBEREITUNG
UND
DURCHFUEHRUNG
FLUORESZENZBASIERTER
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
.
42
6
2.2.10
VERHALTENSANALYSE
DER
VERSUCHSTIERE
IM
ELEVATED
PLUS
MAZE
.
47
2.2.11
GEWICHTSBESTIMMUNG
.
48
2.2.12 STATISTISCHE
ANALYSE
.
48
3.
ERGEBNISSE
.
50
3.1
GEWICHTSENTWICKLUNG
DER
VERSUCHSTIERE
UNTER
CUPRIZONE-EXPOSITION
.
50
3.2
AKTIVITAETS
UND
AENGSTLICHKEITSVERHALTEN
DER
MAEUSE
IM
ELEVATED
PLUS
MAZE
.
51
3.3
QUANTIFIZIERUNG
DER
DEMYELINISIERUNG
MIT
HILFE
DES
MYELIN-SCORES
VON
FLUOROMYELIN
UND
PLP
.
54
3.4
QUANTIFIZIERUNG
DER
DEMYELINISIERUNG
DURCH
ANALYSE
DER
RELATIVEN
MITTLEREN
FLUORESZENZINTENSITAET
VON
FLUOROMYELIN,
PLP
UND
MBP
.
57
3.5
ANALYSE
DER
EXPRESSION
DER
MYELIN-PROTEINE
MBP
UND
PLP
MITTELS
QRT-PCR
.
60
3.6
ANALYSE
VON
NOGOA-FAERBUNGEN
ZUR
BESTIMMUNG
DER
ZELLDICHTE
VON
OLIGODENDROZYTEN
.
62
3.7
QUANTIFIZIERUNG
DER
ASTROZYTOSE
DURCH
ANALYSE
DER
RELATIVEN
MITTLEREN
FLUORESZENZINTENSITAET
VON
GFAP
.
65
3.8
BESTIMMUNG
DER
ZELLDICHTE
ALLER
(IBA1
),
BZW.
DER
AKTIVIERTEN
(CD68)
MIKROGLIA
IN
HISTOLOGISCHEN
FAERBUNGEN
.
68
3.9
DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE
ANALYSE
DER
MIKROGLIA-AKTIVIERUNG
MIT
HILFE
DER
OBERFLAECHENMARKER
CD45
UND
CD11B
.
71
3.10
DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE
UND
HISTOLOGISCHE
ANALYSEN
DER
PROLIFERATION
VON
MIKROGLIA
MIT
HILFE
DER
PROLIFERATIONSMARKER
EDU
UND
KI67
.
72
3.11
UNTERSUCHUNG
DER
LOKALEN
ENTZUENDUNGSREAKTION
MITTELS
ANALYSE
DER
EXPRESSION
VON
TNF-A
.
75
3.12 UNTERSUCHUNG
DER
GRANULOZYTAEREN
ZNS-INFILTRATION
MITTELS
FACS-ANALYSE
DER
OBERFLAECHENMARKER
CD45
UND
LY6G
.
75
4.
DISKUSSION
.
78
5.
ZUSAMMENFASSUNG
.
89
6.
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
.
90
7.
TABELLENVERZEICHNIS
.
92
7
8.
LITERATURVERZEICHNIS
.
93
9.
DANKSAGUNG
.
107 |
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