Die Rolle von NEDD9 in der Pathogenese des klarzelligen Nierenzellkarzinoms:
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Köln
[2021]
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INHALTSVERZEICHNIS
............................................................................................................
6
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
....................................................................................................
9
TABELLENVERZEICHNIS
.......................................................................................................
10
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
.................................................................................................
11
1
EINLEITUNG
.............................................................................................................
14
1.1
DAS
NIERENZELLKARZINOM
........................................................................................
14
1.2
NEDD9
...................................................................................................................
16
1.3
DIE
ROLLE
VON
NEDD9
IN
DER
PATHOGENESE
DES
NZKS
.........................................
18
1.4
ZIELSETZUNG
............................................................................................................
19
2
MATERIAL
UND
METHODEN
......................................................................................
20
2.1
MATERIAL
.................................................................................................................
20
2.1.1
GERAETE
...................................................................................................................
20
2.1.2
VERBRAUCHSMATERIAL
..............................................................................................
21
2.1.3
VERWENDETE
CHEMIKALIEN,
SUBSTANZEN,
MEDIKAMENTE
.......................................
24
2.1.4
LOESUNGEN,
PUFFER
...................................................................................................
25
2.1.5
ZELLKUTUR
................................................................................................................
26
2.1.6
ZELLINIEN
.................................................................................................................
27
2.1.7
KITS
.........................................................................................................................
27
2.1.8
ANTIKOERPER
..............................................................................................................
28
2.1.9
PRIMER
...................................................................................................................
29
2.1.10
SOFTWARE
UND
ONLINE
DATENBANKEN
.......................................................................
30
2.2
METHODEN
..............................................................................................................
31
2.2.1
ZELLKULTUR
................................................................................................................
31
2.2.2
VORBEREITUNG
DER
ZELLEN
FUER
WESTERN
BLOT
UND
RNA-ISOLATION
.............................
32
2.2.3
VORBEREITUNG
DER
ZELLLYSATE
FUER
DIE
WESTERN
BLOT
ANALYSE
..................................
32
2.2.4
BCA-STANDARDKURVE,
BESTIMMUNG
DES
PROTEINGEHALTS
........................................
32
2.2.5
HERSTELLUNG
DER
PROBEN
FUER
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
..................
33
2.2.6
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
...............................................................
33
2.2.7
WESTERN
BLOT
..........................................................................................................
34
2.2.8
RNA
(RIBONUKLEINSAEURE)-ISOLATION
........................................................................
35
7
2.2.9
HERSTELLUNG
DER
KOMPLEMENTAEREN
DESOXYRIBONUKLEINSAEURE
(CDNA)
....................
36
2.2.10
QUANTITATIVE
ECHTZEIT
POLYMERASE-KETTENREAKTION
(QPCR)
................................
37
2.2.11
BOYDEN
CHAMBER
ASSAY
.........................................................................................
38
2.2.12
BROMDESOXYURIDIN(BRDU)-ASSAY
...........................................................................
39
2.2.13
SCRATCH
ASSAY
........................................................................................................
40
2.2.14
TIERHALTUNG
.............................................................................................................
40
2.2.15
VERSUCHSTIERE
.........................................................................................................
41
2.2.16
KULTIVIERUNG
DER
TUMORZELLLINIEN
VOR
IMPLANTATION
................................................
41
2.2.17
SUBKUTANES
XENOGRAFT
TUMORMODELL
...................................................................
42
2.2.18
ORTHOTOPES
XENOGRAFT
TUMORMODELL
......................................................................
43
2.2.19
SYNGENES
SUBKUTANES
TUMORMODELL
.....................................................................
44
2.2.20
SYNGENES
ORTHOTOPES
TUMORMODELL
......................................................................
44
2.2.21
INDUKTION
DER
METASTASEN
IM
SYNGENEN
TUMORMODELL
.........................................
45
2.2.22
DURCHFUEHRUNG
DER
ANAESTHESIE
UND
DER
OPERATIVEN
IMPLANTATION
DER
TUMORZELLEN
UNTER
DIE
KAPSEL
DER
LINKEN
NIERE
DER
NSG
UND
BALB/C
VERSUCHSMAEUSE
......................................................................................................
46
2.2.23
DURCHFUEHRUNG
DER
MRT-MESSUNGEN
.....................................................................
47
2.2.24
STATISTIK
..................................................................................................................
48
3
ERGEBNISSE
............................................................................................................
49
3.1
IN
VITRO
CHARAKTERISIERUNG
DER
786-0
ZELLEN
NACH
DER
NEDD9-DEPLETION
..........
49
3.2
NEDD9-ABHAENGIGE
SIGNALKASKADEN
IN
DER
HUMANEN
NIERENKARZINOMZELLLINIE
786-0
......................................................................................................................
52
3.3
DER
EINFLUSS
VON
NEDD9
AUF
DAS
TUMORWACHSTUM
IN
VIVO
..................................
54
3.3.1
DER
EINFLUSS
DER
NEDD9-DEPLETION
AUF
DAS
SUBKUTANE
TUMORWACHSTUM
IM
XENOGRAFT-MODEL
MIT
786-0
ZELLEN
........................................................................
54
3.3.2
DER
EINFLUSS
DER
NEDD9-DEPLETION
AUF
DAS
ORTHOTOPE
TUMORWACHSTUM
NACH
DER
INTRARENALEN
IMPLANTATION
VON
786-0
ZELLEN
IN
EINEM
XENOGRAFT-MODEL
......
56
3.4
IN
VITRO
CHARAKTERISIERUNG
VON
STABIL
TRANSFIZIERTEN
RENCA
ZELLEN
........................
59
3.5
DER
EINFLUSS
VON
NEDD9
AUF
DAS
TUMORWACHSTUM
UND
DIE
METASTASIERUNG
IM
SYNGENEN
MAUSMODEL
......................................................................................
61
3.5.1
DER
EINFLUSS
VON
NEDD9
EXPRESSION
AUF
DAS
TUMORWACHSTUM
IM
SUBKUTANEN
SYNGENEN
MAUSMODEL
......................................................................
61
3.5.2
DER
EINFLUSS
DER
NEDD9-DEPLETION
AUF
DAS
ORTHOTOPE
TUMORWACHSTUM
NACH
INTRARENALER
INJEKTION
DER
RENCA
ZELLEN
IN
BALB/C
MAEUSE
.....................................
64
8
3.5.3
DER
EINFLUSS
DER
NEDD9-DEPLETION
AUF
DIE
METASTASIERUNG
IM
SYNGENEN
TUMORMODELL
NACH
DER
INTRAVENOESEN
IMPLANTATION
DER
RENCA
ZELLEN
................
67
4
DISKUSSION
...........................................................................................................
70
5
ZUSAMMENFASSUNG
..............................................................................................
82
6
LITERATURVERZEICHNIS
............................................................................................
84
LEBENSLAUF
.......................................................................................................................
95
|
| adam_txt |
INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
.
6
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
.
9
TABELLENVERZEICHNIS
.
10
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
.
11
1
EINLEITUNG
.
14
1.1
DAS
NIERENZELLKARZINOM
.
14
1.2
NEDD9
.
16
1.3
DIE
ROLLE
VON
NEDD9
IN
DER
PATHOGENESE
DES
NZKS
.
18
1.4
ZIELSETZUNG
.
19
2
MATERIAL
UND
METHODEN
.
20
2.1
MATERIAL
.
20
2.1.1
GERAETE
.
20
2.1.2
VERBRAUCHSMATERIAL
.
21
2.1.3
VERWENDETE
CHEMIKALIEN,
SUBSTANZEN,
MEDIKAMENTE
.
24
2.1.4
LOESUNGEN,
PUFFER
.
25
2.1.5
ZELLKUTUR
.
26
2.1.6
ZELLINIEN
.
27
2.1.7
KITS
.
27
2.1.8
ANTIKOERPER
.
28
2.1.9
PRIMER
.
29
2.1.10
SOFTWARE
UND
ONLINE
DATENBANKEN
.
30
2.2
METHODEN
.
31
2.2.1
ZELLKULTUR
.
31
2.2.2
VORBEREITUNG
DER
ZELLEN
FUER
WESTERN
BLOT
UND
RNA-ISOLATION
.
32
2.2.3
VORBEREITUNG
DER
ZELLLYSATE
FUER
DIE
WESTERN
BLOT
ANALYSE
.
32
2.2.4
BCA-STANDARDKURVE,
BESTIMMUNG
DES
PROTEINGEHALTS
.
32
2.2.5
HERSTELLUNG
DER
PROBEN
FUER
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
.
33
2.2.6
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
.
33
2.2.7
WESTERN
BLOT
.
34
2.2.8
RNA
(RIBONUKLEINSAEURE)-ISOLATION
.
35
7
2.2.9
HERSTELLUNG
DER
KOMPLEMENTAEREN
DESOXYRIBONUKLEINSAEURE
(CDNA)
.
36
2.2.10
QUANTITATIVE
ECHTZEIT
POLYMERASE-KETTENREAKTION
(QPCR)
.
37
2.2.11
BOYDEN
CHAMBER
ASSAY
.
38
2.2.12
BROMDESOXYURIDIN(BRDU)-ASSAY
.
39
2.2.13
SCRATCH
ASSAY
.
40
2.2.14
TIERHALTUNG
.
40
2.2.15
VERSUCHSTIERE
.
41
2.2.16
KULTIVIERUNG
DER
TUMORZELLLINIEN
VOR
IMPLANTATION
.
41
2.2.17
SUBKUTANES
XENOGRAFT
TUMORMODELL
.
42
2.2.18
ORTHOTOPES
XENOGRAFT
TUMORMODELL
.
43
2.2.19
SYNGENES
SUBKUTANES
TUMORMODELL
.
44
2.2.20
SYNGENES
ORTHOTOPES
TUMORMODELL
.
44
2.2.21
INDUKTION
DER
METASTASEN
IM
SYNGENEN
TUMORMODELL
.
45
2.2.22
DURCHFUEHRUNG
DER
ANAESTHESIE
UND
DER
OPERATIVEN
IMPLANTATION
DER
TUMORZELLEN
UNTER
DIE
KAPSEL
DER
LINKEN
NIERE
DER
NSG
UND
BALB/C
VERSUCHSMAEUSE
.
46
2.2.23
DURCHFUEHRUNG
DER
MRT-MESSUNGEN
.
47
2.2.24
STATISTIK
.
48
3
ERGEBNISSE
.
49
3.1
IN
VITRO
CHARAKTERISIERUNG
DER
786-0
ZELLEN
NACH
DER
NEDD9-DEPLETION
.
49
3.2
NEDD9-ABHAENGIGE
SIGNALKASKADEN
IN
DER
HUMANEN
NIERENKARZINOMZELLLINIE
786-0
.
52
3.3
DER
EINFLUSS
VON
NEDD9
AUF
DAS
TUMORWACHSTUM
IN
VIVO
.
54
3.3.1
DER
EINFLUSS
DER
NEDD9-DEPLETION
AUF
DAS
SUBKUTANE
TUMORWACHSTUM
IM
XENOGRAFT-MODEL
MIT
786-0
ZELLEN
.
54
3.3.2
DER
EINFLUSS
DER
NEDD9-DEPLETION
AUF
DAS
ORTHOTOPE
TUMORWACHSTUM
NACH
DER
INTRARENALEN
IMPLANTATION
VON
786-0
ZELLEN
IN
EINEM
XENOGRAFT-MODEL
.
56
3.4
IN
VITRO
CHARAKTERISIERUNG
VON
STABIL
TRANSFIZIERTEN
RENCA
ZELLEN
.
59
3.5
DER
EINFLUSS
VON
NEDD9
AUF
DAS
TUMORWACHSTUM
UND
DIE
METASTASIERUNG
IM
SYNGENEN
MAUSMODEL
.
61
3.5.1
DER
EINFLUSS
VON
NEDD9
EXPRESSION
AUF
DAS
TUMORWACHSTUM
IM
SUBKUTANEN
SYNGENEN
MAUSMODEL
.
61
3.5.2
DER
EINFLUSS
DER
NEDD9-DEPLETION
AUF
DAS
ORTHOTOPE
TUMORWACHSTUM
NACH
INTRARENALER
INJEKTION
DER
RENCA
ZELLEN
IN
BALB/C
MAEUSE
.
64
8
3.5.3
DER
EINFLUSS
DER
NEDD9-DEPLETION
AUF
DIE
METASTASIERUNG
IM
SYNGENEN
TUMORMODELL
NACH
DER
INTRAVENOESEN
IMPLANTATION
DER
RENCA
ZELLEN
.
67
4
DISKUSSION
.
70
5
ZUSAMMENFASSUNG
.
82
6
LITERATURVERZEICHNIS
.
84
LEBENSLAUF
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