Der Effekt eines Leberschadens auf die Aktivierung von Antigen-präsentierenden Zellen und deren Interaktion mit T-Helferzellen:
Saved in:
| Main Author: | |
|---|---|
| Format: | Thesis Book |
| Language: | German |
| Published: |
Aachen
[2020]
|
| Subjects: | |
| Online Access: | Inhaltsverzeichnis Inhaltsverzeichnis |
| Physical Description: | 156 Seiten Illustrationen, Diagramme 21 cm |
Staff View
MARC
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|---|---|
| adam_text | INHALT
1
EINLEITUNG
...........................................................................................................................................
1
1.1
D
IE
E
NTWICKLUNG
DES
MONONUKLEAEREN
P
HAGOZYTEN
-S
YSTEMS
AUS
DEM
K
NOCHENMARK
............................
2
1.1.1
REIFUNGSPROZESSE
VON
MONOZYTEN,
MAKROPHAGEN,
DENDRITISCHEN
ZELLEN
...............................
2
1.1.2
MONOZYTEN
..............................................................................................................................
4
1.1.3
MAKROPHAGEN
UND
DENDRITISCHE
ZELLEN
...................................................................................
6
1.2
M
ECHANISMEN
DER
A
NTIGENPRAESENTATION
.............................................................................................
8
1.2.1
PHAGOZYTOSE
DER
ANTIGEN
-PRAESEN
TIEREND
EN
ZELLEN
................................................................
8
1.2.2
ANTIGENPRAESENTATION
UND
INTERAKTION
VON
ANTIGEN-PRAESENTIERENDEN
ZELLEN
MIT
T-ZELLEN
9
1.3
A
NATOMIE
UND
P
HYSIOLOGIE
DER
L
EBER
.................................................................................................
11
1.4
D
IE
L
EBER
ALS
I
MMUNORGAN
IN
H
OMOEOSTASE
UND
E
NTZUENDUNG
............................................................
12
1.4.1
IMMUNOLOGIE
IN
HOMOEOSTASE
................................................................................................
12
1.4.2
IMMUNOLOGIE
BEI
LEBERSCHADEN
...........................................................................................
14
1.4.3
DIE
ROLLE
DER
MAKROPHAGEN
UND
T-ZELLEN
IN
DER
LEBER
.........................................................
16
1.4.3.1
MAKROPHAGEN
...........................................................................................................................
16
1.4.3.2
T-ZELLEN
.....................................................................................................................................
16
1.5
A
KUTE
L
EBERSCHAEDIGUNG
DURCH
EINE
A
CETAMINOPHEN
UE
BERDOSIS
..........................................................
18
2
ZIELSETZUNG
......................................................................................................................................
20
3
MATERIALIEN
.....................................................................................................................................
22
4
METHODEN
..........................................................................................................................................
29
4.1
T
IERE
.................................................................................................................................................
29
4.2
G
ENERIERUNG
VON
GM-CSF
{
GRANULOCYTE
MACROPHAGE
COLONY
-
STIMULATING
FACTOR
)
UND
M-CSF
(M
ACROPHAGE
COLONY
-
STIMULATING
FACTOR
)
.........................................................................................................
29
4.3
K
ULTIVIERUNG
UND
A
USREIFUNG
VON
K
NOCHENMARKZELLEN
ZU
K
NOCHENMARKMAKROPHAGEN
(BMDM,
BONE
-
MARROW
DERIVED
MACROPHAGES)
.........................................................................................................................................
31
4.4
K
ULTIVIERUNG
UND
A
USREIFUNG
VON
K
NOCHENMARKZELLEN
ZU
K
NOCHENMARK
-D
ENDRITISCHEN
Z
ELLEN
(
BM
DC,
BONE-MARROW
DERIVED
DC)
....................................................................................................................................
31
4.5
D
URCHFLUSSZYTOMETRISCHE
A
NALYSEN
.................................................................................................
32
4.5.
1
DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE
ANALYSE
DER
ZELLKULTUR-KINETIK
UND
DER
ZEITABHAENGIGEN
EXPRESSION
VON
OBERFLAECHENMARKERN
.....................................................................................................................
32
4.5.2
DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE
ANALYSE
DER
ANTIGEN-AUFNAHME
..................................................
33
4.5.3
DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE
ANALYSE
DER
OTII
ZELLEN................................................................
33
4.5.4
DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE
ANALYSE
DER
AKTIVITAETSMARKER
VON
ANTIGEN-PRAESENTIERENDEN
ZELLEN:
KOMBINIERTE
OBERFLAECHEN-
UND
INTRAZELLULAERE
FAERBUNG
..........................................................
34
4.6
Z
ELLKINETIK
UND
ZEITABHAENGIGE
E
XPRESSION
DER
O
BERFLAECHENMARKER
AUF
A
NTIGEN
-
PRAESENTIERENDEN
Z
ELLEN
.......................................................................................................................................................
35
4.7
V
ALIDIERUNG
DER
A
NTIGEN
-A
UFNAHME
DURCH
BMDM
UND
BMDC
........................................................
36
4.8
I
SOLATION
,
CFSE-F
AERBUNG
UND
K
ULTIVIERUNG
VON
OTII
T-H
ELFERZELLEN
...............................................
37
4.9
K
OKULTUR
VON
A
NTIGEN
-
PRAESENTIERENDEN
Z
ELLEN
MIT
O
VALBUMIN
UND
OT
II
T-H
ELFERZELLEN
................
39
4.10
Z
ELLISOLATION
PRIMAERER
H
EPATOZYTEN
AUS
DER
M
AUS
......................................................................
40
4.11
B
EHANDLUNG
MIT
A
CETAMINOPHEN
(APAP)....................................................................................
41
4.12
K
OKULTUR
MIT
HEPATISCHEN
F
RAKTIONEN
.........................................................................................
41
4.
12.1
KOKULTUR
VON
BMDM
UND
BMDC
MIT
HEPATISCHEN
FRAKTIONEN
ZUR
ANALYSE
DER
AKTIVIERUNGS-MARKER
VON
ANTIGEN-PRAESENTIERENDEN
ZELLEN
...............................................................42
4.12.2
KOKULTUR
VON
BMDM
MIT
HEPATISCHEN
FRAKTIONEN
UND
OT
II
ZELLEN
UND
DEREN
AKTIVIERUNG
UND
PROLIFERATION
.................................................................................................................................43
4.13
S
TATISTISCHE
A
NALYSE
....................................................................................................................
45
5
ERGEBNISSE
........................................................................................................................................46
5.1
K
ULTIVIERUNG
UND
A
USREIFUNG
VON
A
NTIGEN
-
PRAESENTIERENDEN
Z
ELL
-P
OPULATIONEN
AUS
K
NOCHENMARKZELLEN
...................................................................................................................................
46
5.1.1
TITRATION
DER
WACHSTUMSFAKTOREN
........................................................................................
47
5.1.2
MORPHOLOGIE
DER
ZELLKULTUR
..................................................................................................
50
5.1.3
REIFUNG
DER
APC-POPULATIONEN
-
BESCHREIBUNG
DER
WICHTIGSTEN
FUNKTIONSMARKER
IN
DER
ZEITABHAENGIGEN
KINETIK
.......................................................................................................................
52
5.2
D
IE
A
UFNAHME
VON
A
NTIGENEN
DURCH
BMDM
UND
BMDC
..................................................................
56
5.2.1
MIKROSKOPISCHE
TIME
LAPSE-AUFNAHMEN
DER
ANTIGEN-AUFNAHME
VON
ANTIGEN-
PRAESENTIERENDEN
ZELLEN
.......................................................................................................................56
5.2.2
ANALYSE
DER
ANTIGEN-AUFNAHME
MITTELS
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
............................................58
5.2.2.1
ANALYSE
DER
AUFNAHME
VON
PARTIKELN
DURCH
BMDM
UND
BMDC
MITTELS
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
59
5.2.2.2
ANALYSE
DER
AUFNAHME
VON
LOESLICHEM
ANTIGEN
DURCH
BMDM
UND
BMDC
MITTELS
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
.....................................................................................................................................
62
5.3
P
RIMING
VON
T-Z
ELLEN
IN
G
EGENWART
VON
O
VALBUMIN
IN
K
OKULTUR
VON
A
NTIGEN
-
PRAESENTIERENDE
Z
ELLEN
66
5.4
K
OKULTUR
VON
A
NTIGEN
-
PRAESENTIERENDEN
Z
ELLEN
MIT
HEPATISCHEN
F
RAKTIONEN
....................................
72
5.4.1
OBERFLAECHENMARKER
AUF
ANTIGEN-PRAESENTIERENDEN
ZELLEN
VERAENDERN
SICH
IN
KOKULTUR
MIT
HEPATISCHEN
FRAKTIONEN
......................................................................................................................
77
5.4.2
INTRAZELLULAERE
TNF-A
EXPRESSION
VON
APC
IN
KOKULTUR
MIT
HEPATISCHEN
FRAKTIONEN
.............
84
5.4.3
DIFFERENZIELLE
AKTIVIERUNG
DER
T-ZELLEN
NACH
KOKULTIVIERUNG
MIT
ANTIGEN-PRAESENTIERENDEN
ZELLEN
UND
GESUNDEN
VERSUS
GESCHAEDIGTEN
HEPATISCHEN
FRAKTIONEN
..................................................88
6
DISKUSSION
........................................................................................................................................
94
6.1
E
TABLIERUNG
EINES
NEUEN
IN
VITRO
Z
ELLKULTURMODELLS
.......................................................................
95
6.2
D
IE
Z
ELLKULTIVIERUNG
VON
BMDM
UND
BMDC.................................................................................
100
6.3
V
ERAENDERUNG
DER
O
BERFLAECHENMARKER
DER
BMDM
UND
BMDC
WAEHREND
DER
A
USREIFUNG
...............
105
6.4
U
NTERSCHIEDE
IN
DER
A
NTIGEN
-A
UFNAHME
ZWISCHEN
BMDM
UND
BMDC...........................................
106
6.5
P
RIMING
DER
T-Z
ELLEN
DURCH
A
NTIGEN
-
PRAESENTIERENDE
Z
ELLEN
NACH
P
ROZESSIERUNG
UND
P
RAESENTATION
VON
LOESLICHEN
ANTIGENEN
..........................................................................................................................
108
6.6
A
USWIRKUNGEN
DER
K
OKULTUR
AUF
M
AKROPHAGEN
UND
DENDRITISCHE
Z
ELLEN
BEZOGEN
AUF
DEREN
O
BERFLAECHENMARKER
UND
ENDOGENER
Z
YTOKIN
-P
RODUKTION
.........................................................................
110
6.7
A
KTIVIERUNG
UND
P
ROLIFERATION
VON
T-Z
ELLEN
DURCH
K
OKULTUR
MIT
A
NTIGEN
-
PRAESENTIERENDEN
Z
ELLEN
UND
L
EBERFRAKTIONEN
...............................................................................................................................
114
6.8
F
AZITUND
A
USBLICK
..........................................................................................................................
117
7
ZUSAMMENFASSUNG
.......................................................................................................................
121
8
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
...............................................................................................................
123
9
VIDEOVERZEICHNIS
..........................................................................................................................
131
10
LITERATURVERZEICHNIS
...................................................................................................................
132
11
ANHANG
............................................................................................................................................
151
12
DANKSAGUNG
...................................................................................................................................
152
13
ERKLAERUNG
ZUR
DATENAUFBEWAHRUNG
....................................................................................
153
14
ERKLAERUNG
UEBER
DEN
EIGENANTEIL
..............................................................................................
154
15
LEBENSLAUF
......................................................................................................................................
155
|
| adam_txt |
INHALT
1
EINLEITUNG
.
1
1.1
D
IE
E
NTWICKLUNG
DES
MONONUKLEAEREN
P
HAGOZYTEN
-S
YSTEMS
AUS
DEM
K
NOCHENMARK
.
2
1.1.1
REIFUNGSPROZESSE
VON
MONOZYTEN,
MAKROPHAGEN,
DENDRITISCHEN
ZELLEN
.
2
1.1.2
MONOZYTEN
.
4
1.1.3
MAKROPHAGEN
UND
DENDRITISCHE
ZELLEN
.
6
1.2
M
ECHANISMEN
DER
A
NTIGENPRAESENTATION
.
8
1.2.1
PHAGOZYTOSE
DER
ANTIGEN
-PRAESEN
TIEREND
EN
ZELLEN
.
8
1.2.2
ANTIGENPRAESENTATION
UND
INTERAKTION
VON
ANTIGEN-PRAESENTIERENDEN
ZELLEN
MIT
T-ZELLEN
9
1.3
A
NATOMIE
UND
P
HYSIOLOGIE
DER
L
EBER
.
11
1.4
D
IE
L
EBER
ALS
I
MMUNORGAN
IN
H
OMOEOSTASE
UND
E
NTZUENDUNG
.
12
1.4.1
IMMUNOLOGIE
IN
HOMOEOSTASE
.
12
1.4.2
IMMUNOLOGIE
BEI
LEBERSCHADEN
.
14
1.4.3
DIE
ROLLE
DER
MAKROPHAGEN
UND
T-ZELLEN
IN
DER
LEBER
.
16
1.4.3.1
MAKROPHAGEN
.
16
1.4.3.2
T-ZELLEN
.
16
1.5
A
KUTE
L
EBERSCHAEDIGUNG
DURCH
EINE
A
CETAMINOPHEN
UE
BERDOSIS
.
18
2
ZIELSETZUNG
.
20
3
MATERIALIEN
.
22
4
METHODEN
.
29
4.1
T
IERE
.
29
4.2
G
ENERIERUNG
VON
GM-CSF
{
GRANULOCYTE
MACROPHAGE
COLONY
-
STIMULATING
FACTOR
)
UND
M-CSF
(M
ACROPHAGE
COLONY
-
STIMULATING
FACTOR
)
.
29
4.3
K
ULTIVIERUNG
UND
A
USREIFUNG
VON
K
NOCHENMARKZELLEN
ZU
K
NOCHENMARKMAKROPHAGEN
(BMDM,
BONE
-
MARROW
DERIVED
MACROPHAGES)
.
31
4.4
K
ULTIVIERUNG
UND
A
USREIFUNG
VON
K
NOCHENMARKZELLEN
ZU
K
NOCHENMARK
-D
ENDRITISCHEN
Z
ELLEN
(
BM
DC,
BONE-MARROW
DERIVED
DC)
.
31
4.5
D
URCHFLUSSZYTOMETRISCHE
A
NALYSEN
.
32
4.5.
1
DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE
ANALYSE
DER
ZELLKULTUR-KINETIK
UND
DER
ZEITABHAENGIGEN
EXPRESSION
VON
OBERFLAECHENMARKERN
.
32
4.5.2
DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE
ANALYSE
DER
ANTIGEN-AUFNAHME
.
33
4.5.3
DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE
ANALYSE
DER
OTII
ZELLEN.
33
4.5.4
DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE
ANALYSE
DER
AKTIVITAETSMARKER
VON
ANTIGEN-PRAESENTIERENDEN
ZELLEN:
KOMBINIERTE
OBERFLAECHEN-
UND
INTRAZELLULAERE
FAERBUNG
.
34
4.6
Z
ELLKINETIK
UND
ZEITABHAENGIGE
E
XPRESSION
DER
O
BERFLAECHENMARKER
AUF
A
NTIGEN
-
PRAESENTIERENDEN
Z
ELLEN
.
35
4.7
V
ALIDIERUNG
DER
A
NTIGEN
-A
UFNAHME
DURCH
BMDM
UND
BMDC
.
36
4.8
I
SOLATION
,
CFSE-F
AERBUNG
UND
K
ULTIVIERUNG
VON
OTII
T-H
ELFERZELLEN
.
37
4.9
K
OKULTUR
VON
A
NTIGEN
-
PRAESENTIERENDEN
Z
ELLEN
MIT
O
VALBUMIN
UND
OT
II
T-H
ELFERZELLEN
.
39
4.10
Z
ELLISOLATION
PRIMAERER
H
EPATOZYTEN
AUS
DER
M
AUS
.
40
4.11
B
EHANDLUNG
MIT
A
CETAMINOPHEN
(APAP).
41
4.12
K
OKULTUR
MIT
HEPATISCHEN
F
RAKTIONEN
.
41
4.
12.1
KOKULTUR
VON
BMDM
UND
BMDC
MIT
HEPATISCHEN
FRAKTIONEN
ZUR
ANALYSE
DER
AKTIVIERUNGS-MARKER
VON
ANTIGEN-PRAESENTIERENDEN
ZELLEN
.42
4.12.2
KOKULTUR
VON
BMDM
MIT
HEPATISCHEN
FRAKTIONEN
UND
OT
II
ZELLEN
UND
DEREN
AKTIVIERUNG
UND
PROLIFERATION
.43
4.13
S
TATISTISCHE
A
NALYSE
.
45
5
ERGEBNISSE
.46
5.1
K
ULTIVIERUNG
UND
A
USREIFUNG
VON
A
NTIGEN
-
PRAESENTIERENDEN
Z
ELL
-P
OPULATIONEN
AUS
K
NOCHENMARKZELLEN
.
46
5.1.1
TITRATION
DER
WACHSTUMSFAKTOREN
.
47
5.1.2
MORPHOLOGIE
DER
ZELLKULTUR
.
50
5.1.3
REIFUNG
DER
APC-POPULATIONEN
-
BESCHREIBUNG
DER
WICHTIGSTEN
FUNKTIONSMARKER
IN
DER
ZEITABHAENGIGEN
KINETIK
.
52
5.2
D
IE
A
UFNAHME
VON
A
NTIGENEN
DURCH
BMDM
UND
BMDC
.
56
5.2.1
MIKROSKOPISCHE
TIME
LAPSE-AUFNAHMEN
DER
ANTIGEN-AUFNAHME
VON
ANTIGEN-
PRAESENTIERENDEN
ZELLEN
.56
5.2.2
ANALYSE
DER
ANTIGEN-AUFNAHME
MITTELS
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
.58
5.2.2.1
ANALYSE
DER
AUFNAHME
VON
PARTIKELN
DURCH
BMDM
UND
BMDC
MITTELS
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
59
5.2.2.2
ANALYSE
DER
AUFNAHME
VON
LOESLICHEM
ANTIGEN
DURCH
BMDM
UND
BMDC
MITTELS
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
.
62
5.3
P
RIMING
VON
T-Z
ELLEN
IN
G
EGENWART
VON
O
VALBUMIN
IN
K
OKULTUR
VON
A
NTIGEN
-
PRAESENTIERENDE
Z
ELLEN
66
5.4
K
OKULTUR
VON
A
NTIGEN
-
PRAESENTIERENDEN
Z
ELLEN
MIT
HEPATISCHEN
F
RAKTIONEN
.
72
5.4.1
OBERFLAECHENMARKER
AUF
ANTIGEN-PRAESENTIERENDEN
ZELLEN
VERAENDERN
SICH
IN
KOKULTUR
MIT
HEPATISCHEN
FRAKTIONEN
.
77
5.4.2
INTRAZELLULAERE
TNF-A
EXPRESSION
VON
APC
IN
KOKULTUR
MIT
HEPATISCHEN
FRAKTIONEN
.
84
5.4.3
DIFFERENZIELLE
AKTIVIERUNG
DER
T-ZELLEN
NACH
KOKULTIVIERUNG
MIT
ANTIGEN-PRAESENTIERENDEN
ZELLEN
UND
GESUNDEN
VERSUS
GESCHAEDIGTEN
HEPATISCHEN
FRAKTIONEN
.88
6
DISKUSSION
.
94
6.1
E
TABLIERUNG
EINES
NEUEN
IN
VITRO
Z
ELLKULTURMODELLS
.
95
6.2
D
IE
Z
ELLKULTIVIERUNG
VON
BMDM
UND
BMDC.
100
6.3
V
ERAENDERUNG
DER
O
BERFLAECHENMARKER
DER
BMDM
UND
BMDC
WAEHREND
DER
A
USREIFUNG
.
105
6.4
U
NTERSCHIEDE
IN
DER
A
NTIGEN
-A
UFNAHME
ZWISCHEN
BMDM
UND
BMDC.
106
6.5
P
RIMING
DER
T-Z
ELLEN
DURCH
A
NTIGEN
-
PRAESENTIERENDE
Z
ELLEN
NACH
P
ROZESSIERUNG
UND
P
RAESENTATION
VON
LOESLICHEN
ANTIGENEN
.
108
6.6
A
USWIRKUNGEN
DER
K
OKULTUR
AUF
M
AKROPHAGEN
UND
DENDRITISCHE
Z
ELLEN
BEZOGEN
AUF
DEREN
O
BERFLAECHENMARKER
UND
ENDOGENER
Z
YTOKIN
-P
RODUKTION
.
110
6.7
A
KTIVIERUNG
UND
P
ROLIFERATION
VON
T-Z
ELLEN
DURCH
K
OKULTUR
MIT
A
NTIGEN
-
PRAESENTIERENDEN
Z
ELLEN
UND
L
EBERFRAKTIONEN
.
114
6.8
F
AZITUND
A
USBLICK
.
117
7
ZUSAMMENFASSUNG
.
121
8
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
.
123
9
VIDEOVERZEICHNIS
.
131
10
LITERATURVERZEICHNIS
.
132
11
ANHANG
.
151
12
DANKSAGUNG
.
152
13
ERKLAERUNG
ZUR
DATENAUFBEWAHRUNG
.
153
14
ERKLAERUNG
UEBER
DEN
EIGENANTEIL
.
154
15
LEBENSLAUF
.
155 |
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