Die Histondeacetylasen 1 und 2 und das Mikrobiom beeinflussen die Epigenetik der Mikroglia im Verlauf ihrer Entwicklung und der Neurodegeneration:
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| Published: |
Freiburg im Breisgau
[2020]
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|---|---|
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INHALTSVERZEICHNIS
I
INHALTSVERZEICHNIS
III
II
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS VI
1
EINLEITUNG
1
1.1
GLIAZELLEN
.........................................................................................................
1
1.1.1
OLIGODENDROZYTEN
.................................................................................
2
1.1.2
ASTROZYTEN
.............................................................................................
3
1.1.3
MIKROGLIA
.............................................................................................
4
1.2
MORBUS
ALZHEIMER
..........................................................................................
7
1.2.1
MORBUS
ALZHEIMER
IM
MENSCHEN
.........................................................
8
1.2.2
DIE
ROLLE
DER
MIKROGLIA
UND
PERIPHEREN
MONOZYTEN
IN
DER
ALZHEIMER
ERKRANKUNG
..........................................................................................
13
1.2.3
ALZHEIMER
ERKRANKUNG
IM
MAUSMODELL
.............................................
17
1.3
EPIGENETIK
.........................................................................................................
18
1.3.1
GLIALE
EPIGENETIK
DER
NEURODEGENERATION
..........................................
22
1.3.2
REGULATION
DER
MIKROGLIA
DURCH
HISTONDEACETYLASEN
1
UND
2
..............
24
1.4
ZIELSETZUNG
......................................................................................................
25
2
MATERIED
UND
METHODEN
27
2.1
MATERIAL
............................................................................................................
27
2.1.1
CHEMIKALIEN
&
REAGENZIEN
..................................................................
27
2.1.2
ANTIKOERPER
.............................................................................................
29
2.1.3
VERBRAUCHSMATERIALIEN
........................................................................
29
2.1.4
GERAETE
...................................................................................................
30
2.1.5
SOFTWARE,
TOOLS
UND
ALGORITHMEN
......................................................
30
2.2
ZELLKULTUR
.........................................................................................................
31
2.3
TIEREXPERIMENTELLE
METHODEN
........................................................................
31
2.3.1
TIERMODELLE
..........................................................................................
31
2.3.2
TOETUNG
UND
DISSEKTION
........................................................................
32
2.3.3
DURCHFLUSSZYTOMETRIEBASIERTE
ZELLSORTIERUNG
........................................
32
2.3.4
GENOTYPISIERUNG
....................................................................................
33
2.4
CHROMATIN-IMMUNPRAEZIPITATION
.....................................................................
35
2.4.1
ZELLLYSE
UND
CHROMATIN-FRAGMENTIERUNG
..........................................
35
2.4.2
IMMUNPRAEZIPITATION
..............................................................................
36
2.4.3
MAGNETBEAD-SELEKTION
........................................................................
36
2.4.4
DNA-AUFREINIGUNG
..............................................................................
36
2.4.5
QPCR
VALIDIERUNG
..............................................................................
38
III
2.4.6
AUSWERTUNG
...........................................................................................
39
2.5
DNA
LIBRARY
PREPARATION
.................................................................................
39
2.5.1
END-PRAEPARATION
.................................................................................
39
2.5.2
ADAPTER
LIGATION
....................................................................................
40
2.5.3
CLEANUP
DER
ADAPTER-LIGIERTEN
DNA
...................................................
40
2.5.4
QPCR
AMPLIFIKATION
...........................................................................
40
2.5.5
CLEANUP
NACH
DER
AMPLIFIKATION
.........................................................
40
2.5.6
BESTIMMUNG
DER
FRAGMENT
GROSSE
.........................................................
42
2.6
SEQUENZIERUNG
...................................................................................................
42
2.7
ANALYSE
DER
SEQUENZIERUNGSDATEN
..................................................................
42
3
ERGEBNISSE
44
3.1
METHODEN-OPTIMIERUNG
FUER
DIE
MIKROGLIA-ADAPTIERTE
CHROMATIN-IMMUNPRAEZIPITATION
.....................................................................
44
3.1.1
ZELLFIXIERUNG,
LYSE
UND
FRAGMENTIERUNG
.............................................
44
3.1.2
ZELLZAHL
................................................................................................
48
3.2
EPIGENETISCHE
MODELLIERUNG
DER
MIKROGLIA
DURCH
HISTONDEACETYLASEN
....
49
3.2.1
EPIGENETISCHE
MODELLIERUNG
IM
VERLAUF
DER
ENTWICKLUNG
..................
49
3.2.2
EPIGENETISCHE
MODELLIERUNG
IM
VERLAUF
DER
NEURODEGENERATION
...
56
3.3
EINFLUSS
DES
MIKROBIOMS
AUF
DIE
EPIGENETIK
DER
MIKROGLIA
...........................
63
4
DISKUSSION
67
4.1
DISKUSSION
DER
METHODEN
.................................................................................
67
4.2
DISKUSSION
DER
ERGEBNISSE
..............................................................................
68
4.2.1
EPIGENETISCHE
EINFLUSSFAKTOREN
DER
ENTWICKLUNG
DER
MIKROGLIA
...
68
4.2.2
EINFLUSS
DER
HDAC
1
UND
2
AUF
DIE
EPIGENETIK
DER
MIKROGLIA
IM
VERLAUF
DER
NEURODEGENERATION
............................................................
76
5
ZUSAMMENFASSUNG
79
6
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
80
7
LITERATURVERZEICHNIS
82
8
ANHANG
108
9
PUBLIKATIONEN
116
10
LEBENSLAUF
117
11
EIDESSTATTLICHE
VERSICHERUNG
120
IV
12
ERKLAERUNG
ZUM
EIGENANTEIL
121
13
DANKSAGUNG
123
V
|
| adam_txt |
I
INHALTSVERZEICHNIS
I
INHALTSVERZEICHNIS
III
II
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS VI
1
EINLEITUNG
1
1.1
GLIAZELLEN
.
1
1.1.1
OLIGODENDROZYTEN
.
2
1.1.2
ASTROZYTEN
.
3
1.1.3
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.
4
1.2
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ALZHEIMER
.
7
1.2.1
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ALZHEIMER
IM
MENSCHEN
.
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1.2.2
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ROLLE
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MIKROGLIA
UND
PERIPHEREN
MONOZYTEN
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DER
ALZHEIMER
ERKRANKUNG
.
13
1.2.3
ALZHEIMER
ERKRANKUNG
IM
MAUSMODELL
.
17
1.3
EPIGENETIK
.
18
1.3.1
GLIALE
EPIGENETIK
DER
NEURODEGENERATION
.
22
1.3.2
REGULATION
DER
MIKROGLIA
DURCH
HISTONDEACETYLASEN
1
UND
2
.
24
1.4
ZIELSETZUNG
.
25
2
MATERIED
UND
METHODEN
27
2.1
MATERIAL
.
27
2.1.1
CHEMIKALIEN
&
REAGENZIEN
.
27
2.1.2
ANTIKOERPER
.
29
2.1.3
VERBRAUCHSMATERIALIEN
.
29
2.1.4
GERAETE
.
30
2.1.5
SOFTWARE,
TOOLS
UND
ALGORITHMEN
.
30
2.2
ZELLKULTUR
.
31
2.3
TIEREXPERIMENTELLE
METHODEN
.
31
2.3.1
TIERMODELLE
.
31
2.3.2
TOETUNG
UND
DISSEKTION
.
32
2.3.3
DURCHFLUSSZYTOMETRIEBASIERTE
ZELLSORTIERUNG
.
32
2.3.4
GENOTYPISIERUNG
.
33
2.4
CHROMATIN-IMMUNPRAEZIPITATION
.
35
2.4.1
ZELLLYSE
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CHROMATIN-FRAGMENTIERUNG
.
35
2.4.2
IMMUNPRAEZIPITATION
.
36
2.4.3
MAGNETBEAD-SELEKTION
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36
2.4.4
DNA-AUFREINIGUNG
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36
2.4.5
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VALIDIERUNG
.
38
III
2.4.6
AUSWERTUNG
.
39
2.5
DNA
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.
39
2.5.1
END-PRAEPARATION
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39
2.5.2
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40
2.5.3
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ADAPTER-LIGIERTEN
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.
40
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AMPLIFIKATION
.
40
2.5.5
CLEANUP
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DER
AMPLIFIKATION
.
40
2.5.6
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FRAGMENT
GROSSE
.
42
2.6
SEQUENZIERUNG
.
42
2.7
ANALYSE
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SEQUENZIERUNGSDATEN
.
42
3
ERGEBNISSE
44
3.1
METHODEN-OPTIMIERUNG
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DIE
MIKROGLIA-ADAPTIERTE
CHROMATIN-IMMUNPRAEZIPITATION
.
44
3.1.1
ZELLFIXIERUNG,
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UND
FRAGMENTIERUNG
.
44
3.1.2
ZELLZAHL
.
48
3.2
EPIGENETISCHE
MODELLIERUNG
DER
MIKROGLIA
DURCH
HISTONDEACETYLASEN
.
49
3.2.1
EPIGENETISCHE
MODELLIERUNG
IM
VERLAUF
DER
ENTWICKLUNG
.
49
3.2.2
EPIGENETISCHE
MODELLIERUNG
IM
VERLAUF
DER
NEURODEGENERATION
.
56
3.3
EINFLUSS
DES
MIKROBIOMS
AUF
DIE
EPIGENETIK
DER
MIKROGLIA
.
63
4
DISKUSSION
67
4.1
DISKUSSION
DER
METHODEN
.
67
4.2
DISKUSSION
DER
ERGEBNISSE
.
68
4.2.1
EPIGENETISCHE
EINFLUSSFAKTOREN
DER
ENTWICKLUNG
DER
MIKROGLIA
.
68
4.2.2
EINFLUSS
DER
HDAC
1
UND
2
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DIE
EPIGENETIK
DER
MIKROGLIA
IM
VERLAUF
DER
NEURODEGENERATION
.
76
5
ZUSAMMENFASSUNG
79
6
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
80
7
LITERATURVERZEICHNIS
82
8
ANHANG
108
9
PUBLIKATIONEN
116
10
LEBENSLAUF
117
11
EIDESSTATTLICHE
VERSICHERUNG
120
IV
12
ERKLAERUNG
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EIGENANTEIL
121
13
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