Humane Papillomviren-assoziierte Genmethylierung bei Oropharynxkarzinomen:
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| Main Author: | |
|---|---|
| Format: | Thesis Book |
| Language: | German |
| Published: |
Münster
2020
|
| Subjects: | |
| Online Access: | Inhaltsverzeichnis Inhaltsverzeichnis |
| Physical Description: | iii, 125 Blätter Illustrationen 31 cm |
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MARC
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|---|---|
| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGEN
..............................................................................................................................
I
1
EINLEITUNG.
.................................................................................................................
1
1.1
DER
PHARYNX
............................................................................................................
1
1.1.1
ANATOMIE
..............................................................................................................
1
1.1.2
PHYSIOLOGIE
...........................................................................................................
2
1.1.3
HISTOLOGIE
.............................................................................................................
3
1.2
DAS
OROPHARYNXKARZINOM
...................................................................................
4
1.2.1
EPIDEMIOLOGIE
......................................................................................................
4
1.2.2
AETIOLOGIE
..............................................................................................................
5
1.2.3
KLINIK
UND
SYMPTOMATIK
....................................................................................
7
1.2.4
TNM-KLASSIFIKATION
UND
TUMORSTADIEN
...........................................................
7
1.2.5
DIAGNOSTIK
...........................................................................................................
10
1.2.6
THERAPIE
..............................................................................................................
11
1.2.6.1
THERAPIEVERFAHREN
.......................................................................................
11
1.2.7
PROGNOSE
.............................................................................................................
12
1.2.7.1
TUMOR-STADIUM
...........................................................................................
13
1.2.7.2
HPV-STATUS
..................................................................................................
13
1.2.7.3
RESEKTIONSRAENDER
........................................................................................
14
1.3
HUMANE
PAPILLOMVIREN
(HPV)
..........................................................................
14
1.3.1
MIKROBIOLOGISCHE
GRUNDLAGEN
..........................................................................
14
1.3.2
EINTEILUNG
...........................................................................................................
14
1.3.3
UEBERTRAGUNG
........................................................................................................
15
1.3.4
EPIDEMIOLOGIE
.....................................................................................................
15
1.3.5
PATHOGENESE
........................................................................................................
17
1.3.5.1
METHYLIERUNG
DURCH
DNA-METHYLTRANSFERASEN
....................................
18
1.3.5.2
DIE
EPITHELIAL-MESENCHYMALE
TRANSITION
..............................................
19
1.3.6
HPV-NACHWEISMETHODEN
................................................................................
19
1.3.7
PRAEVENTION
...........................................................................................................
20
1.4
ZIELSETZUNG
DER
ARBEIT
........................................................................................
21
2
MATERIALIEN
UND
METHODEN
...................................................................................
23
2.1
MATERIALIEN
............................................................................................................
23
2.1.1
VERWENDETE
GERAETE
............................................................................................
23
2.1.2
GEBRAUCHSMATERIALIEN
.......................................................................................
24
2.1.3
ZELLKULTURMATERIALIEN
........................................................................................
25
2.1.4
CHEMIKALIEN
.......................................................................................................
25
2.1.5
V
ERWENDETE
KITS
................................................................................................
26
2.1.6
PRIMER,
OLIGONUKLEOTIDE
UND
SONDEN
..............................................................
26
2.1.7
SOFTWARE
..............................................................................................................28
2.1.8
VERWENDETE
ZELLEN
UND
BAKTERIEN
...................................................................28
2.1.9
TUMORPROBEN
.....................................................................................................
28
2.2
METHODEN
...............................................................................................................
29
2.2.1
ZELLEN
UND
ZELLKULTUR
........................................................................................
29
2.2.1.1
KULTIVIERUNG
VON
ZELLEN
UND
ZELLZAEHLUNG
...............................................30
2.2.1.2
PASSAGIEREN
DER
ZELLEN
...............................................................................
31
2.2.1.3
KRYOKONSERVIERUNG
UND
AUFTAUEN
DER
ZELLEN
.........................................32
2.2.2
DIE
POLYMERASE
KETTENREAKTION
(PCR)
............................................................
33
2.2.2.1
DNA-ISOLATION
............................................................................................
33
2.2.2.2
PCR
...............................................................................................................34
2.2.2.3
REVERSE
TRANSKRIPTASE-PCR
(RT-PCR)
...................................................
35
2.2.2.3.1
RNA-ISOLATION
......................................................................................
36
2.2.2.3.2
HERSTELLUNG
DER
CDNA
..........................................................................37
2.2.2.4
THERMOCYCLING
DER
RT-PCR
FUER
DIE
VERSCHIEDENEN
GENE
....................39
2.2.2.5
DIE
QUANTITATIVE
PCR
................................................................................
41
2.2.2.6
PHOTOMETRISCHE
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
.........................................
42
2.3
HERSTELLUNG
UND
VERWENDUNG
DER
MIRNA
.....................................................42
2.3.1
HERSTELLUNG
DER
PLASMID-DNA
FUER
DIE
TRANSFEKTION
......................................
44
2.3.2
TRANSFEKTION
MIT
LIPOFEKTAMINE2000
..............................................................
45
2.3.2.1
KONTROLLE
DER
TRANSFEKTIONSEFFIZIENZ
MITTELS
SS-GALACTOSIDASE-
FAERBE
TEST
..................................................................................................
46
2.3.2.2
KONTROLLE
DER
TRANSFEKTIONSEFFIZIENZ
UNTER
DEM
FLUORESZENZMIKROSKOP
..............................................................................
47
2.3.3
STABILE
EXPRESSION
MIT
BLASTICIDIN
...................................................................48
2.4
APOPTOSE-
UND
PROLIFERATIONSUNTERSUCHUNGEN
...............................................
49
2.4.1
STIMULATION
DURCH
NIKOTIN
................................................................................
49
2.4.2
ROTITEST
................................................................................................................
49
2.4.3
FACS-ANALYSE
...................................................................................................
50
2.5
BERECHNUNGEN
........................................................................................................
51
2.5.1
BERECHNUNG
DER
RELATIVEN
GENEXPRESSION
.......................................................
51
2.5.2
BERECHNUNG
DER
BEZIEHUNG
ZWISCHEN
DER
KOPIENZAHL
VON
E6
UND
E7
UND
DER
GENEXPRESSION
.....................................................................................52
3
ERGEBNISSE
................................................................................................................
54
3.1
ERGEBNISSE
DER
UNTERSUCHUNGEN
AN
DEN
TUMORPROBEN
................................
54
3.1.1
HPV-STATUS
.........................................................................................................54
3.1.2
PCR-ERGEBNISSE
DER
EXPRESSION
DER
METHYLTRANSFERASEN
(DNMT)
UND
VON
E-CADHERIN
..................................................................................................
54
3.1.3
RELATIVE
EXPRESSION
DER
METHYLTRANSFERASEN
UND
VON
E-CADHERIN
BEI
HPV
1
6-POSITIVEN
UND
HPVLOE-NEGATIVEN
OROPHARYNXKARZINOMEN
............
58
3.1.4
KOPIENZAHL
VON
E6
UND
E7
PRO
ZELLE
BEI
HPV
1
6-POSITIVEN
TUMORPROBEN
.....................................................................................................
60
3.1.5
KORRELATION
DER
EXPRESSION
DER
HPV
1
6-ONKOGENE
E6/E7
MIT
DER
EXPRESSION
DER
METHYLTRANSFERASEN
UND
E-CADHERIN
.....................................62
3.2
ERGEBNISSE
DER
UNTERSUCHUNGEN
AN
HOK
UND
CASKI
..................................62
3.2.1
WACHSTUM
DER
HUMANEN
ORALEN
KERATINOZYTEN
............................................62
3.2.2
ERGEBNISSE
DER
VERSCHIEDENEN
UNTERSUCHUNGEN
NACH
DER
TRANSFEKTION
....64
3.2.2.1
ERGEBNISSE
DES
SS-GALACTOSIDASE-FAERBE-TESTS
.........................................
64
3.2.2.2
AUSWERTUNG
DER
TRANSFEKTIONSEFFIZIENZ
DURCH
BEURTEILUNG
DER
FLUORESZENZ
................................................................................................
65
3.2.2.3
WACHSTUM
DER
ZELLEN
NACH
VERWENDUNG
VON BLASTICIDIN
ZUR
ETABLIERUNG
EINER
STABILEN
ZELLLINIE
.........................................................66
3.2.3
AENDERUNGEN
DER
EXPRESSION
DER
E6-
UND
E7-RNA
NACH
TRANSFEKTION
.....67
3.2.4
EXPRESSION
DER
METHYLTRANSFERASEN
UND
VON
E-CADHERIN
BEI
HOK-
UND
CASKI
VOR
UND
NACH
TRANSFEKTION
....................................................................70
3.2.5
VERAENDERUNGEN
DER
GENEXPRESSION
DER
METHYLTRANSFERASEN
UND
VON
E-
CADHERIN
NACH INFEKTION
UND
TRANSFEKTION
.....................................................
71
3.3
STIMULATION
DER
ZELLEN
MIT
NIKOTIN
..................................................................76
3.3.1
ERGEBNISSE
DES
ROTI-TESTS
NACH
DER
NIKOTINSTIMULATION
DER
HOK
.............76
3.3.2
ERGEBNISSE
DER
FACS-ANALYSE
........................................................................
78
4
DISKUSSION
................................................................................................................
84
4.1
UNTERSCHIEDE
IN
DER
GENEXPRESSION
DER
METHYLTRANSFERASEN
(DNMT)
UND
VON
E-CADHERIN
BEI
HPV-POSITIVEN
UND
HPV-NEGATIVEN
TUMORPROBEN
...........................................................................................
84
4.1.1
UNTERSCHIEDE
IN
DER
GENEXPRESSION
DER
METHYLTRANSFERASEN
BEI
DEN
HPV-POSITIVEN
UND
-NEGATIVEN
TUMORPROBEN
................................................84
4.1.2
UNTERSCHIEDE
IN
DER
E-CADHERIN-EXPRESSION
BEI
HPV-POSITIVEN
UND
-
NEGATIVEN TUMORPROBEN
...................................................................................87
4.1.3
KORRELATION
DER
EXPRESSION
DER
HPV
1
6-ONKOGENE
E6
BZW.
E7
MIT
DER
EXPRESSION
DER
METHYLTRANSFERASEN
BZW.
MIT
E-CADHERIN
BEI
DEN
OROPHARYNXKARZINOMPROBEN
.............................................................................89
4.2
ZELLKULTUR
UND
TRANSFEKTION
MITTELS
MIRNA
.................................................
91
4.3
AENDERUNGEN
DER
GENEXPRESSION
IM
ZELLMODELL
............................................
92
4.3.1
KNOCKDOWN
VON
E6
UND
E7
DURCH
DIE
MIRNA
..............................................
93
4.3.2
AENDERUNGEN
DER
GENEXPRESSION
DER
METHYLTRANSFERASEN
BEI
HOK
UND
CASKI
..................................................................................................................94
4.3.3
AENDERUNGEN
DER
E-CADHERIN
EXPRESSION
BEI
HOK
UND
CASKI
.....................97
4.4
EFFEKTE
VON
NIKOTIN
AUF
BENIGNE
MUNDSCHLEIMHAUT-ZELLEN
.........................
99
5
ZUSAMMENFASSUNG
..............................................................................................
101
6
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
........................................................................................
105
7
TABELLENVERZEICHNIS
............................................................................................
107
8
LITERATURVERZEICHNIS
............................................................................................
111
9
DANKSAGUNG
.........................................................................................................
124
10
LEBENSLAUF.
...........................................................................................................
125
|
| adam_txt |
INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGEN
.
I
1
EINLEITUNG.
.
1
1.1
DER
PHARYNX
.
1
1.1.1
ANATOMIE
.
1
1.1.2
PHYSIOLOGIE
.
2
1.1.3
HISTOLOGIE
.
3
1.2
DAS
OROPHARYNXKARZINOM
.
4
1.2.1
EPIDEMIOLOGIE
.
4
1.2.2
AETIOLOGIE
.
5
1.2.3
KLINIK
UND
SYMPTOMATIK
.
7
1.2.4
TNM-KLASSIFIKATION
UND
TUMORSTADIEN
.
7
1.2.5
DIAGNOSTIK
.
10
1.2.6
THERAPIE
.
11
1.2.6.1
THERAPIEVERFAHREN
.
11
1.2.7
PROGNOSE
.
12
1.2.7.1
TUMOR-STADIUM
.
13
1.2.7.2
HPV-STATUS
.
13
1.2.7.3
RESEKTIONSRAENDER
.
14
1.3
HUMANE
PAPILLOMVIREN
(HPV)
.
14
1.3.1
MIKROBIOLOGISCHE
GRUNDLAGEN
.
14
1.3.2
EINTEILUNG
.
14
1.3.3
UEBERTRAGUNG
.
15
1.3.4
EPIDEMIOLOGIE
.
15
1.3.5
PATHOGENESE
.
17
1.3.5.1
METHYLIERUNG
DURCH
DNA-METHYLTRANSFERASEN
.
18
1.3.5.2
DIE
EPITHELIAL-MESENCHYMALE
TRANSITION
.
19
1.3.6
HPV-NACHWEISMETHODEN
.
19
1.3.7
PRAEVENTION
.
20
1.4
ZIELSETZUNG
DER
ARBEIT
.
21
2
MATERIALIEN
UND
METHODEN
.
23
2.1
MATERIALIEN
.
23
2.1.1
VERWENDETE
GERAETE
.
23
2.1.2
GEBRAUCHSMATERIALIEN
.
24
2.1.3
ZELLKULTURMATERIALIEN
.
25
2.1.4
CHEMIKALIEN
.
25
2.1.5
V
ERWENDETE
KITS
.
26
2.1.6
PRIMER,
OLIGONUKLEOTIDE
UND
SONDEN
.
26
2.1.7
SOFTWARE
.28
2.1.8
VERWENDETE
ZELLEN
UND
BAKTERIEN
.28
2.1.9
TUMORPROBEN
.
28
2.2
METHODEN
.
29
2.2.1
ZELLEN
UND
ZELLKULTUR
.
29
2.2.1.1
KULTIVIERUNG
VON
ZELLEN
UND
ZELLZAEHLUNG
.30
2.2.1.2
PASSAGIEREN
DER
ZELLEN
.
31
2.2.1.3
KRYOKONSERVIERUNG
UND
AUFTAUEN
DER
ZELLEN
.32
2.2.2
DIE
POLYMERASE
KETTENREAKTION
(PCR)
.
33
2.2.2.1
DNA-ISOLATION
.
33
2.2.2.2
PCR
.34
2.2.2.3
REVERSE
TRANSKRIPTASE-PCR
(RT-PCR)
.
35
2.2.2.3.1
RNA-ISOLATION
.
36
2.2.2.3.2
HERSTELLUNG
DER
CDNA
.37
2.2.2.4
THERMOCYCLING
DER
RT-PCR
FUER
DIE
VERSCHIEDENEN
GENE
.39
2.2.2.5
DIE
QUANTITATIVE
PCR
.
41
2.2.2.6
PHOTOMETRISCHE
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
.
42
2.3
HERSTELLUNG
UND
VERWENDUNG
DER
MIRNA
.42
2.3.1
HERSTELLUNG
DER
PLASMID-DNA
FUER
DIE
TRANSFEKTION
.
44
2.3.2
TRANSFEKTION
MIT
LIPOFEKTAMINE2000
.
45
2.3.2.1
KONTROLLE
DER
TRANSFEKTIONSEFFIZIENZ
MITTELS
SS-GALACTOSIDASE-
FAERBE
TEST
.
46
2.3.2.2
KONTROLLE
DER
TRANSFEKTIONSEFFIZIENZ
UNTER
DEM
FLUORESZENZMIKROSKOP
.
47
2.3.3
STABILE
EXPRESSION
MIT
BLASTICIDIN
.48
2.4
APOPTOSE-
UND
PROLIFERATIONSUNTERSUCHUNGEN
.
49
2.4.1
STIMULATION
DURCH
NIKOTIN
.
49
2.4.2
ROTITEST
.
49
2.4.3
FACS-ANALYSE
.
50
2.5
BERECHNUNGEN
.
51
2.5.1
BERECHNUNG
DER
RELATIVEN
GENEXPRESSION
.
51
2.5.2
BERECHNUNG
DER
BEZIEHUNG
ZWISCHEN
DER
KOPIENZAHL
VON
E6
UND
E7
UND
DER
GENEXPRESSION
.52
3
ERGEBNISSE
.
54
3.1
ERGEBNISSE
DER
UNTERSUCHUNGEN
AN
DEN
TUMORPROBEN
.
54
3.1.1
HPV-STATUS
.54
3.1.2
PCR-ERGEBNISSE
DER
EXPRESSION
DER
METHYLTRANSFERASEN
(DNMT)
UND
VON
E-CADHERIN
.
54
3.1.3
RELATIVE
EXPRESSION
DER
METHYLTRANSFERASEN
UND
VON
E-CADHERIN
BEI
HPV
1
6-POSITIVEN
UND
HPVLOE-NEGATIVEN
OROPHARYNXKARZINOMEN
.
58
3.1.4
KOPIENZAHL
VON
E6
UND
E7
PRO
ZELLE
BEI
HPV
1
6-POSITIVEN
TUMORPROBEN
.
60
3.1.5
KORRELATION
DER
EXPRESSION
DER
HPV
1
6-ONKOGENE
E6/E7
MIT
DER
EXPRESSION
DER
METHYLTRANSFERASEN
UND
E-CADHERIN
.62
3.2
ERGEBNISSE
DER
UNTERSUCHUNGEN
AN
HOK
UND
CASKI
.62
3.2.1
WACHSTUM
DER
HUMANEN
ORALEN
KERATINOZYTEN
.62
3.2.2
ERGEBNISSE
DER
VERSCHIEDENEN
UNTERSUCHUNGEN
NACH
DER
TRANSFEKTION
.64
3.2.2.1
ERGEBNISSE
DES
SS-GALACTOSIDASE-FAERBE-TESTS
.
64
3.2.2.2
AUSWERTUNG
DER
TRANSFEKTIONSEFFIZIENZ
DURCH
BEURTEILUNG
DER
FLUORESZENZ
.
65
3.2.2.3
WACHSTUM
DER
ZELLEN
NACH
VERWENDUNG
VON BLASTICIDIN
ZUR
ETABLIERUNG
EINER
STABILEN
ZELLLINIE
.66
3.2.3
AENDERUNGEN
DER
EXPRESSION
DER
E6-
UND
E7-RNA
NACH
TRANSFEKTION
.67
3.2.4
EXPRESSION
DER
METHYLTRANSFERASEN
UND
VON
E-CADHERIN
BEI
HOK-
UND
CASKI
VOR
UND
NACH
TRANSFEKTION
.70
3.2.5
VERAENDERUNGEN
DER
GENEXPRESSION
DER
METHYLTRANSFERASEN
UND
VON
E-
CADHERIN
NACH INFEKTION
UND
TRANSFEKTION
.
71
3.3
STIMULATION
DER
ZELLEN
MIT
NIKOTIN
.76
3.3.1
ERGEBNISSE
DES
ROTI-TESTS
NACH
DER
NIKOTINSTIMULATION
DER
HOK
.76
3.3.2
ERGEBNISSE
DER
FACS-ANALYSE
.
78
4
DISKUSSION
.
84
4.1
UNTERSCHIEDE
IN
DER
GENEXPRESSION
DER
METHYLTRANSFERASEN
(DNMT)
UND
VON
E-CADHERIN
BEI
HPV-POSITIVEN
UND
HPV-NEGATIVEN
TUMORPROBEN
.
84
4.1.1
UNTERSCHIEDE
IN
DER
GENEXPRESSION
DER
METHYLTRANSFERASEN
BEI
DEN
HPV-POSITIVEN
UND
-NEGATIVEN
TUMORPROBEN
.84
4.1.2
UNTERSCHIEDE
IN
DER
E-CADHERIN-EXPRESSION
BEI
HPV-POSITIVEN
UND
-
NEGATIVEN TUMORPROBEN
.87
4.1.3
KORRELATION
DER
EXPRESSION
DER
HPV
1
6-ONKOGENE
E6
BZW.
E7
MIT
DER
EXPRESSION
DER
METHYLTRANSFERASEN
BZW.
MIT
E-CADHERIN
BEI
DEN
OROPHARYNXKARZINOMPROBEN
.89
4.2
ZELLKULTUR
UND
TRANSFEKTION
MITTELS
MIRNA
.
91
4.3
AENDERUNGEN
DER
GENEXPRESSION
IM
ZELLMODELL
.
92
4.3.1
KNOCKDOWN
VON
E6
UND
E7
DURCH
DIE
MIRNA
.
93
4.3.2
AENDERUNGEN
DER
GENEXPRESSION
DER
METHYLTRANSFERASEN
BEI
HOK
UND
CASKI
.94
4.3.3
AENDERUNGEN
DER
E-CADHERIN
EXPRESSION
BEI
HOK
UND
CASKI
.97
4.4
EFFEKTE
VON
NIKOTIN
AUF
BENIGNE
MUNDSCHLEIMHAUT-ZELLEN
.
99
5
ZUSAMMENFASSUNG
.
101
6
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
.
105
7
TABELLENVERZEICHNIS
.
107
8
LITERATURVERZEICHNIS
.
111
9
DANKSAGUNG
.
124
10
LEBENSLAUF.
.
125 |
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