Identifizierung und pharmakologische Beeinflussung eines SNV(T-241C)-abhängigen Transkriptionsfaktors im cAMP-abhängigen Promotor I.3/II der Aromatase in Präadipozyten:
Gespeichert in:
| 1. Verfasser: | |
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Jena
[2020]
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| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis Inhaltsverzeichnis |
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Datensatz im Suchindex
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|---|---|
| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
....................................................................................................................
I
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
...........................................................................................................
VI
1.
ZUSAMMENFASSUNG
...........................................................................................................
1
2.
EINLEITUNG
.........................................................................................................................
3
2.1
DIE
AROMATASE
UND
DIE
FUNKTION
VON
OESTROGENEN
..........................................................
5
2.1.1
DIE
SYNTHESE VON
OESTROGENEN
..........................................................................................
5
2.1.2
FUNKTION
UND
WIRKUNG
VON
OESTROGENEN
...........................................................................
5
2.1.3
GEWEBSSPEZIFISCHE
AROMATASEEXPRESSION
UND
PROMOTOR-SYSTEM
...................................
6
2.1.4
DIE
BEDEUTUNG
DER
AROMATASE
IN
MAMMAKARZINOMEN
...................................................
7
2.2
DIE
POLY(ADP-RIBOSE)-POLYMERASE-
1
..............................................................................
9
2.2.1
DIE
POLY(ADP-RIBOSE)-POLYMERASE-FAMILIE
..................................................................
9
2.2.2
STRUKTUR
VON
PARP-1
......................................................................................................
11
2.2.3
FUNKTIONEN
VON
PARP-
1
.................................................................................................
12
2.2.3.1
CHROMATINMODULATION
.....................................................................................................
12
2.2.3.2
TRANSKRIPTIONS-KOREGULATION
..........................................................................................
13
2.2.3.3
MODULATION
DER
DNA-METHYLIERUNG
..............................................................................
13
2.2.3.4
SPLICING-REGULATION
........................................................................................................
14
2.2.4
FUNKTIONELLER
ANTAGONISMUS
ZWISCHEN
SIRT-1
UND
PARP-1
.......................................
14
2.2.5
PARP-1
IN
KARZINOMEN
..................................................................................................
14
3.
ZIEL
DER
ARBEIT.
16
INHALTSVERZEICHNIS
4.
METHODENTEIL
..................................................................................................................
18
4.1
ZELLKULTUR
..........................................................................................................................
18
4.1.1
AUFTAUEN
KRYOKONSERVIERTER
ZELLEN
.................................................................................
18
4.1.2
SUBKULTIVIERUNG
ZELLEN
...................................................................................................
18
4.1.3
ZELLLINIEN
UND
MEDIEN
....................................................................................................
18
4.1.4
HUMANE BAFS
(PRAEADIPOZYTEN)
......................................................................................
19
4.1.4.1
ISOLIERUNG
VON
BAFS
AUS
HUMANEM
FETTGEWEBE
............................................................
19
4.1.4.2
KULTIVIERUNG
VON
BAFS
AUS
HUMANEM
FETTGEWEBE
.......................................................20
4.1.5
ZELLSTIMULATIONEN
...........................................................................................................
21
4.2
FLUORESCEINDIACETAT
(FDA)-VIABILITAETSTEST
......................................................................22
4.3
AROMATASEAKTIVITAETSTEST
....................................................................................................
23
4.4
NAD
+
/NADH
QUANTIFIZIERUNG
.......................................................................................24
4.5
PRAEPARATION
LOESLICHER
KEMEXTRAKTE
.................................................................................
25
4.6
PROTEINQUANTIFIZIERUNG
NACH
BRADFORD
............................................................................26
4.7
ELECTROPHORETIC
MOBILITY
SHIFT
ASSAY
(EMSA)
.............................................................26
4.7.1
HERSTELLUNG
EINES
NATIVEN
POLYACRYLAMIGELS
..................................................................
26
4.7.2
HYBRIDISIERUNG
DER
DNA-OLIGONUKLEOTIDE
.....................................................................26
4.7.3
HERSTELLUNG
DER
GELPROBEN
.............................................................................................
27
4.7.4
ELEKTROPHORETISCHE
TRENNUNG
UND
AUSWERTUNG
..............................................................
28
4.8
ISOLATION
UND
IDENTIFIKATION
DER
PUTATIVEN
DNA-BINDENDEN
PROTEINE
...........................
28
4.8.1
PROTEINISOLATION
MIT
DYNABEADS
M-280
STREPTAVIDIN
..................................................
29
4.8.2
SDS-PAGE
......................................................................................................................
31
4.8.2.1
PROBENVORBEREITUNG
FUER
DIE
SDS-PAGE
........................................................................
31
4.8.2.2
GELHERSTELLUNG
UND
ELEKTROPHORETISCHE
TRENNUNG
.........................................................
32
4.8.3
COOMASSIE-
UND
RUTHENIUM-FAERBUNG
.............................................................................
33
4.8.4
MALDI-TOF
MS
UND
NANO-ESI-QUADRUPOL-TOF
MS
................................................34
4.8.4.1
ISOLATION
UND
AUFBEREITUNG
DER
GELSTUECKE
UND
EXTRAKTION
DER
PEPTIDE
AUS
DEN
GELSTUECKEN
.......................................................................................................................34
II
INHALTSVERZEICHNIS
4.8.4.2
MESSUNG
UND
AUSWERTUNG
..........................................................................................
34
4.8.5
WESTERN
BLOT
...................................................................................................................
36
4.9
IMMUNPRAEZIPITATIONS-BASIERTER
DNA-BINDE-ASSAY
.......................................................
37
4.9.1
IMMUNPRAEZIPITATION
........................................................................................................
37
4.9.2
BINDUNG
UND
MESSUNG
DER
FLUORESZENZMARKIERTEN
OLIGONUKLEOTIDE
.............................
38
4.10
BAKTERIENKULTUR
................................................................................................................
38
4.10.1
TRANSFORMATION
................................................................................................................
38
4.10.2
PLASMID-DNA-PRAEPARATIONEN
..........................................................................................
39
4.11
TRANSFEKTION
UND
LUCIFERASE-REPORTERGENASSAY
............................................................
39
4.11.1
TRANSFEKTION
.....................................................................................................................40
4.11.2
LUCIFERASE-REPORTERGENASSAY
.........................................................................................40
4.12
CHROMATIN-IMMUNPRAEZIPITATION
(CHIP)
..........................................................................
41
4.12.1
TAG
1
-PROTEIN
G
VORBEREITUNG
........................................................................................
41
4.12.2
TAG
1-ZELLLYSE
UND
DNA-FRAGMENTIERUNG
.....................................................................
42
4.12.3
TAG
2-BESTIMMUNG
VON
DNA-FRAGMENTGROESSE
UND
DNA-QUANTITAET
..............................
42
4.12.4
TAG
2-IMMUNPRAEZIPITATION
TEIL
1
...................................................................................
43
4.12.5
TAG
3-IMMUNPRAEZIPITATION
TEIL
2,
PROTEIN- UND RNA-VERDAU,
REVERSER
CROSSLINK
....
43
4.12.6
TAG
4-PHENOL/CHLOROFORM
DNA-EXTRAKTION
..................................................................
44
4.12.7
ANALYSE
DURCH
EINE
PAQ5000
DNA
POLYMERASE-PCR
...................................................
45
4.13
QUANTIFIZIERUNG
DER
NUTZUNG
DER
AROMATASE-PROMOTOREN
1.3,
II
UND
QUANTIFIZIERUNG
DER
EXPRESSION
DER
VOLLLAENGEN-AROMATASE
IN
HUMANEN
BAFS
......................................
45
4.14
QUANTIFIZIERUNG
DER EXPRESSION
VON
FUNKTIONELLEN
REGIONEN
DER
AROMATASE-
PROMOTOREN
I.3/II-REGION UND
FIREFLY-LUCIFERASE
IN
TRANSFIZIERTEN
MEFS
MIT
PARP-1
WILDTYP
UND
KNOCK-OUT
.................................................................................................
47
4.15
STATISTISCHE
AUSWERTUNG
..................................................................................................49
III
|
| adam_txt |
INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
.
I
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
.
VI
1.
ZUSAMMENFASSUNG
.
1
2.
EINLEITUNG
.
3
2.1
DIE
AROMATASE
UND
DIE
FUNKTION
VON
OESTROGENEN
.
5
2.1.1
DIE
SYNTHESE VON
OESTROGENEN
.
5
2.1.2
FUNKTION
UND
WIRKUNG
VON
OESTROGENEN
.
5
2.1.3
GEWEBSSPEZIFISCHE
AROMATASEEXPRESSION
UND
PROMOTOR-SYSTEM
.
6
2.1.4
DIE
BEDEUTUNG
DER
AROMATASE
IN
MAMMAKARZINOMEN
.
7
2.2
DIE
POLY(ADP-RIBOSE)-POLYMERASE-
1
.
9
2.2.1
DIE
POLY(ADP-RIBOSE)-POLYMERASE-FAMILIE
.
9
2.2.2
STRUKTUR
VON
PARP-1
.
11
2.2.3
FUNKTIONEN
VON
PARP-
1
.
12
2.2.3.1
CHROMATINMODULATION
.
12
2.2.3.2
TRANSKRIPTIONS-KOREGULATION
.
13
2.2.3.3
MODULATION
DER
DNA-METHYLIERUNG
.
13
2.2.3.4
SPLICING-REGULATION
.
14
2.2.4
FUNKTIONELLER
ANTAGONISMUS
ZWISCHEN
SIRT-1
UND
PARP-1
.
14
2.2.5
PARP-1
IN
KARZINOMEN
.
14
3.
ZIEL
DER
ARBEIT.
16
INHALTSVERZEICHNIS
4.
METHODENTEIL
.
18
4.1
ZELLKULTUR
.
18
4.1.1
AUFTAUEN
KRYOKONSERVIERTER
ZELLEN
.
18
4.1.2
SUBKULTIVIERUNG
ZELLEN
.
18
4.1.3
ZELLLINIEN
UND
MEDIEN
.
18
4.1.4
HUMANE BAFS
(PRAEADIPOZYTEN)
.
19
4.1.4.1
ISOLIERUNG
VON
BAFS
AUS
HUMANEM
FETTGEWEBE
.
19
4.1.4.2
KULTIVIERUNG
VON
BAFS
AUS
HUMANEM
FETTGEWEBE
.20
4.1.5
ZELLSTIMULATIONEN
.
21
4.2
FLUORESCEINDIACETAT
(FDA)-VIABILITAETSTEST
.22
4.3
AROMATASEAKTIVITAETSTEST
.
23
4.4
NAD
+
/NADH
QUANTIFIZIERUNG
.24
4.5
PRAEPARATION
LOESLICHER
KEMEXTRAKTE
.
25
4.6
PROTEINQUANTIFIZIERUNG
NACH
BRADFORD
.26
4.7
ELECTROPHORETIC
MOBILITY
SHIFT
ASSAY
(EMSA)
.26
4.7.1
HERSTELLUNG
EINES
NATIVEN
POLYACRYLAMIGELS
.
26
4.7.2
HYBRIDISIERUNG
DER
DNA-OLIGONUKLEOTIDE
.26
4.7.3
HERSTELLUNG
DER
GELPROBEN
.
27
4.7.4
ELEKTROPHORETISCHE
TRENNUNG
UND
AUSWERTUNG
.
28
4.8
ISOLATION
UND
IDENTIFIKATION
DER
PUTATIVEN
DNA-BINDENDEN
PROTEINE
.
28
4.8.1
PROTEINISOLATION
MIT
DYNABEADS
M-280
STREPTAVIDIN
.
29
4.8.2
SDS-PAGE
.
31
4.8.2.1
PROBENVORBEREITUNG
FUER
DIE
SDS-PAGE
.
31
4.8.2.2
GELHERSTELLUNG
UND
ELEKTROPHORETISCHE
TRENNUNG
.
32
4.8.3
COOMASSIE-
UND
RUTHENIUM-FAERBUNG
.
33
4.8.4
MALDI-TOF
MS
UND
NANO-ESI-QUADRUPOL-TOF
MS
.34
4.8.4.1
ISOLATION
UND
AUFBEREITUNG
DER
GELSTUECKE
UND
EXTRAKTION
DER
PEPTIDE
AUS
DEN
GELSTUECKEN
.34
II
INHALTSVERZEICHNIS
4.8.4.2
MESSUNG
UND
AUSWERTUNG
.
34
4.8.5
WESTERN
BLOT
.
36
4.9
IMMUNPRAEZIPITATIONS-BASIERTER
DNA-BINDE-ASSAY
.
37
4.9.1
IMMUNPRAEZIPITATION
.
37
4.9.2
BINDUNG
UND
MESSUNG
DER
FLUORESZENZMARKIERTEN
OLIGONUKLEOTIDE
.
38
4.10
BAKTERIENKULTUR
.
38
4.10.1
TRANSFORMATION
.
38
4.10.2
PLASMID-DNA-PRAEPARATIONEN
.
39
4.11
TRANSFEKTION
UND
LUCIFERASE-REPORTERGENASSAY
.
39
4.11.1
TRANSFEKTION
.40
4.11.2
LUCIFERASE-REPORTERGENASSAY
.40
4.12
CHROMATIN-IMMUNPRAEZIPITATION
(CHIP)
.
41
4.12.1
TAG
1
-PROTEIN
G
VORBEREITUNG
.
41
4.12.2
TAG
1-ZELLLYSE
UND
DNA-FRAGMENTIERUNG
.
42
4.12.3
TAG
2-BESTIMMUNG
VON
DNA-FRAGMENTGROESSE
UND
DNA-QUANTITAET
.
42
4.12.4
TAG
2-IMMUNPRAEZIPITATION
TEIL
1
.
43
4.12.5
TAG
3-IMMUNPRAEZIPITATION
TEIL
2,
PROTEIN- UND RNA-VERDAU,
REVERSER
CROSSLINK
.
43
4.12.6
TAG
4-PHENOL/CHLOROFORM
DNA-EXTRAKTION
.
44
4.12.7
ANALYSE
DURCH
EINE
PAQ5000
DNA
POLYMERASE-PCR
.
45
4.13
QUANTIFIZIERUNG
DER
NUTZUNG
DER
AROMATASE-PROMOTOREN
1.3,
II
UND
QUANTIFIZIERUNG
DER
EXPRESSION
DER
VOLLLAENGEN-AROMATASE
IN
HUMANEN
BAFS
.
45
4.14
QUANTIFIZIERUNG
DER EXPRESSION
VON
FUNKTIONELLEN
REGIONEN
DER
AROMATASE-
PROMOTOREN
I.3/II-REGION UND
FIREFLY-LUCIFERASE
IN
TRANSFIZIERTEN
MEFS
MIT
PARP-1
WILDTYP
UND
KNOCK-OUT
.
47
4.15
STATISTISCHE
AUSWERTUNG
.49
III |
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| spelling | Kaiser, Alexander 1989- Verfasser (DE-588)1070871699 aut Identifizierung und pharmakologische Beeinflussung eines SNV(T-241C)-abhängigen Transkriptionsfaktors im cAMP-abhängigen Promotor I.3/II der Aromatase in Präadipozyten von Dr. med. Alexander Kaiser Jena [2020] IX, 125 Seiten Illustrationen 21 cm txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Dissertation Friedrich-Schiller-Universität Jena 2020 (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content B:DE-101 application/pdf https://d-nb.info/1221985752/04 Inhaltsverzeichnis DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=032689154&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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