Einfluss der Position 196 und der C-terminalen Elongation des NS1-Proteins auf die Pathogenität des Influenza-A-Virus:
Gespeichert in:
1. Verfasser: | |
---|---|
Format: | Abschlussarbeit Buch |
Sprache: | German |
Veröffentlicht: |
Freiburg im Breisgau
[2020]
|
Schlagworte: | |
Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis Inhaltsverzeichnis |
Beschreibung: | 136 Seiten Illustrationen, Diagramme 30 cm |
Internformat
MARC
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Datensatz im Suchindex
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---|---|
adam_text | INHALT
1.
EINLEITUNG
............................................................................................................
11
1.1
DAS
INFLUENZA-A-VIRUS
......................................................................................................
11
1.1.1
AUFBAU
......................................................................................................................................
12
1.1.2
REPLIKATIONSZYKLUS
..................................................................................................................
15
1.1.3
EVOLUTION
.................................................................................................................................
18
1.1.4
EPIDEMIOLOGIE
.........................................................................................................................
20
1.1.5
KLINIK
......................................................................................................................................
21
1.2
REVERSE
GENETIK
BEI
INFLUENZA-A-VIREN
..........................................................................
22
1.3
DAS
ANGEBORENE
IMMUNSYSTEM
.........................................................................................
23
1.3.1
DAS
TYP-I-INTERFERONSYSTEM
..................................................................................................
24
1.3.2
DIE
MX-PROTEINE
....................................................................................................................
25
1.4
DAS
NS
1
-PROTEIN
................................................................................................................26
1.4.1
SYNTHESE
DES
NS
1
-PROTEINS
...................................................................................................
26
1.4.2
STRUKTUR
DES
NSL-PROTEINS
....................................................................................................
27
1.4.3
INTERAKTION
VON
NS1
MIT
DEM
IMMUNSYSTEM
......................................................................
30
1.4.3.1
SUPPRESSION
DER
PRIMAEREN
IFN-INDUKTION
.............................................................................
31
1.4.3.2
WIRKUNGEN
AUF
DIE
MRNA-PROZESSIERUNG
............................................................................
32
1.4.3.3
INTERFERENZ
MIT
ISG-PROTEINEN
................................................................................................
33
1.4.3.4
WIRKUNGEN
AUF
DIE
APOPTOSE
..................................................................................................
34
1.4.4
EVOLUTION
DES
NS1
BEZUEGLICH
LAENGE
UND
POSITION
196
......................................................
34
1.4.5
ELONGATION
UND
POSITION
196
IN
DER
LITERATUR
......................................................................
40
2.
FRAGESTELLUNG
......................................................................................................
41
3.
MATERIAL
UND
METHODEN
.....................................................................................43
3.1
MATERIAL
...........................................................................................................................
43
3.1.1
REAGENZIEN
.............................................................................................................................
43
3.1.2
ZELLEN
......................................................................................................................................
45
2.1.3
KIT-SYSTEME
............................................................................................................................
45
2.1.4
ENZYME
UND
PUFFER
................................................................................................................
46
2.1.5
GERAETE
UND
MATERIALIEN
.........................................................................................................
47
2.1.6
OLIGONUKLEOTIDE
.....................................................................................................................
47
2.1.7
PLASMIDE
..................................................................................................................................
48
2.1.8
VIREN
.......................................................................................................................................
49
2.1.9
ANITKOERPER
...............................................................................................................................
50
2.1.10
EIER
........................................................................................................................................
51
2.1.11
MAEUSE
....................................................................................................................................
51
3.2
METHODEN
.........................................................................................................................
52
3.2.1
ZELLKULTUR
.................................................................................................................................
52
3.2.1.1
KULTIVIERUNG
DER
ZELLEN
...........................................................................................................
52
3.2.1.2
HERSTELLUNG
REKOMBINANTER
INFLUENZAVIREN
............................................................................
52
3.2.1.3
PLAQUE-REINIGUNG
....................................................................................................................
53
3.2.1.4
HERSTELLUNG
DER
VIRUSSTOCKS
...................................................................................................
54
3.2.1.5
PLAQUE-ASSAY
...........................................................................................................................
55
3.2.1.6
WACHSTUMSKURVEN
...................................................................................................................
55
3.2.1.7
INTERFERON-SS-PROMOTOR-AKTIVIERUNG
........................................................................................
56
3.2.1.8
QUANTIFIZIERUNG
VON
TYP-I-INTERFERON
IM
UEBERSTAND
VON
A549-ZELLEN
...............................
56
3.2.2
FLUORESZENZFAERBUNG
ZUR
DETEKTION
VON
VIRALEM
NS1
UND
NP
..........................................
57
3.2.3
PROTEINBIOCHEMISCHE
METHODEN
............................................................................................59
3.2.3.1
ANFERTIGUNG
VON
ZELLLYSATEN
FUER
WESTERN
PLOTS
....................................................................
59
3.2.3.2
PROTEINELEKTROPHORESE
MITTELS
SDS-POLYACRYLAMID-GEL
........................................................
59
3.2.3.3
WESTERN
BLOT
............................................................................................................................60
3.2.4
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
...........................................................................................
61
3.2.4.1
ISOLATION
VON
VIRALER
RNA
........................................................................................................
61
3.2.4.2
REVERSE
TRANSKRIPTION
.............................................................................................................
62
3.2.4.3
POLYMERASEKETTENREAKTION
(PCR)
...........................................................................................
63
3.2.4.4
DNA-GELELEKTROPHORESE
.........................................................................................................64
3.2.4.5
QPCR
AUF
INTERFERON-SS
IN
INFIZIERTEN
A549-ZELLEN
................................................................
64
3.2.4.6
TRANSFORMATION
KOMPETENTER
BAKTERIENZELLEN
.......................................................................
65
3.2.4.7
PRAEPARATION
VON
PLASMID-DNA
...............................................................................................
66
3.2.4.8
ORTSSPEZIFISCHE
MUTAGENESE
...................................................................................................
66
3.2.4.9
KLONIERUNG
...............................................................................................................................
69
3.2.5
TIEREXPERIMENTELLE
METHODEN
...............................................................................................
70
3.2.5.1
1NFEKTION
...................................................................................................................................
70
3.2.5.2
GEWINNUNG
UND
PROZESSIERUNG
VON
PROBEN
...........................................................................
70
3.2.5.3
BESTIMMUNG
DER
LD
50
..............................................................................................................
71
3.2.5.4
BESTIMMUNG
DER
INTERFERON-SS-PROMOTORAKTIVIERUNG
IN
DER
LUNGE
INFIZIERTER
TIERE
............
71
3.2.5.5
TRANSMISSIONSEXPERIMENTE
..........................................................................................
72
3.2.6
BIOINFORMATISCHE
METHODEN
..................................................................................................
72
3.2.6.1
DATENBANKRECHERCHE
DER
NS
1
-SEQUENZEN
..............................................................
72
3.2.7
STATISTIK
....................................................................................................................................
72
4.
ERGEBNISSE
.........................................................................................................
73
4.1
DAS
MAUSADAPTIERTE
HK68-VIRUS
UND
DIE
VERWENDETEN
NS
1
-VARIANTEN
......................73
4.2
WACHSTUMSKURVEN
DER
NS1(38R)-VIREN
.........................................................................
74
4.3
AKTIVIERUNG
DES
IFN-SS-PROMOTORS
IN
MEFS
..................................................................75
4.4
DIE
R38A-MUTANTEN
..........................................................................................................77
4.5
WACHSTUMSKURVEN
DER
NS
1
(R38A)-VIREN
......................................................................
77
4.6
AKTIVIERUNG
DES
IFN-SS-PROMOTORS
DURCH
NS
1
(R38A)-VIREN
.......................................78
4.7
IFN-MRNA-LEVEL
IN
A549-ZELLEN
.................................................................................
79
4.8
BESTIMMUNG
VON
TYP-I-INTERFERON
IM
UEBERSTAND
VON
A549-ZELLEN
............................
81
4.9
LOKALISATION
DES
NS1
IN
DER
INFIZIERTEN
ZELLE
................................................................
83
4.10
WACHSTUM
DER
VIREN
IN
LUNGEN
VON
MXL-POSITIVEN
UND
-NEGATIVEN
MAEUSEN
........86
4.11
IFN-INDUKTION
NACH
IN
VIVO-INFEKTION
...........................................................................
88
4.12
BESTIMMUNG
DER
LD
50
IN
MXL-POSITIVEN
MAEUSEN
........................................................
90
4.13
WACHSTUM
DER
VIREN
IN
MXL-POSITIVEN
MAEUSEN
NACH
INFEKTION
DES
OBEREN
RESPIRATIONSTRAKTES
.........................................................................................................
92
4.14
WACHSTUMSKINETIK
BEI
33C
...........................................................................................
93
4.15
UEBERTRAGUNGSVERSUCHE
IN
MAEUSEN
...................................................................................94
5.
DISKUSSION
.........................................................................................................
101
5.1
UNTERSUCHTE
POLYMORPHISMEN
IN
NS
1
...........................................................................
101
5.2
VERHALTEN
IN
VITRO
............................................................................................................
104
5.3
VERHALTEN
IN
VIVO
.............................................................................................................
107
5.4
FAZIT
...................................................................................................................................
112
6.
ZUSAMMENFASSUNG
...........................................................................................
117
7.
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
...................................................................................
119
8.
LITERATURVERZEICHNIS
.........................................................................................
123
9.
PUBLIKATIONEN
...................................................................................................
136
ANHANG:
EIDESSTATTLICHE
VERSICHERUNG
..........................................................
137
|
adam_txt |
INHALT
1.
EINLEITUNG
.
11
1.1
DAS
INFLUENZA-A-VIRUS
.
11
1.1.1
AUFBAU
.
12
1.1.2
REPLIKATIONSZYKLUS
.
15
1.1.3
EVOLUTION
.
18
1.1.4
EPIDEMIOLOGIE
.
20
1.1.5
KLINIK
.
21
1.2
REVERSE
GENETIK
BEI
INFLUENZA-A-VIREN
.
22
1.3
DAS
ANGEBORENE
IMMUNSYSTEM
.
23
1.3.1
DAS
TYP-I-INTERFERONSYSTEM
.
24
1.3.2
DIE
MX-PROTEINE
.
25
1.4
DAS
NS
1
-PROTEIN
.26
1.4.1
SYNTHESE
DES
NS
1
-PROTEINS
.
26
1.4.2
STRUKTUR
DES
NSL-PROTEINS
.
27
1.4.3
INTERAKTION
VON
NS1
MIT
DEM
IMMUNSYSTEM
.
30
1.4.3.1
SUPPRESSION
DER
PRIMAEREN
IFN-INDUKTION
.
31
1.4.3.2
WIRKUNGEN
AUF
DIE
MRNA-PROZESSIERUNG
.
32
1.4.3.3
INTERFERENZ
MIT
ISG-PROTEINEN
.
33
1.4.3.4
WIRKUNGEN
AUF
DIE
APOPTOSE
.
34
1.4.4
EVOLUTION
DES
NS1
BEZUEGLICH
LAENGE
UND
POSITION
196
.
34
1.4.5
ELONGATION
UND
POSITION
196
IN
DER
LITERATUR
.
40
2.
FRAGESTELLUNG
.
41
3.
MATERIAL
UND
METHODEN
.43
3.1
MATERIAL
.
43
3.1.1
REAGENZIEN
.
43
3.1.2
ZELLEN
.
45
2.1.3
KIT-SYSTEME
.
45
2.1.4
ENZYME
UND
PUFFER
.
46
2.1.5
GERAETE
UND
MATERIALIEN
.
47
2.1.6
OLIGONUKLEOTIDE
.
47
2.1.7
PLASMIDE
.
48
2.1.8
VIREN
.
49
2.1.9
ANITKOERPER
.
50
2.1.10
EIER
.
51
2.1.11
MAEUSE
.
51
3.2
METHODEN
.
52
3.2.1
ZELLKULTUR
.
52
3.2.1.1
KULTIVIERUNG
DER
ZELLEN
.
52
3.2.1.2
HERSTELLUNG
REKOMBINANTER
INFLUENZAVIREN
.
52
3.2.1.3
PLAQUE-REINIGUNG
.
53
3.2.1.4
HERSTELLUNG
DER
VIRUSSTOCKS
.
54
3.2.1.5
PLAQUE-ASSAY
.
55
3.2.1.6
WACHSTUMSKURVEN
.
55
3.2.1.7
INTERFERON-SS-PROMOTOR-AKTIVIERUNG
.
56
3.2.1.8
QUANTIFIZIERUNG
VON
TYP-I-INTERFERON
IM
UEBERSTAND
VON
A549-ZELLEN
.
56
3.2.2
FLUORESZENZFAERBUNG
ZUR
DETEKTION
VON
VIRALEM
NS1
UND
NP
.
57
3.2.3
PROTEINBIOCHEMISCHE
METHODEN
.59
3.2.3.1
ANFERTIGUNG
VON
ZELLLYSATEN
FUER
WESTERN
PLOTS
.
59
3.2.3.2
PROTEINELEKTROPHORESE
MITTELS
SDS-POLYACRYLAMID-GEL
.
59
3.2.3.3
WESTERN
BLOT
.60
3.2.4
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
.
61
3.2.4.1
ISOLATION
VON
VIRALER
RNA
.
61
3.2.4.2
REVERSE
TRANSKRIPTION
.
62
3.2.4.3
POLYMERASEKETTENREAKTION
(PCR)
.
63
3.2.4.4
DNA-GELELEKTROPHORESE
.64
3.2.4.5
QPCR
AUF
INTERFERON-SS
IN
INFIZIERTEN
A549-ZELLEN
.
64
3.2.4.6
TRANSFORMATION
KOMPETENTER
BAKTERIENZELLEN
.
65
3.2.4.7
PRAEPARATION
VON
PLASMID-DNA
.
66
3.2.4.8
ORTSSPEZIFISCHE
MUTAGENESE
.
66
3.2.4.9
KLONIERUNG
.
69
3.2.5
TIEREXPERIMENTELLE
METHODEN
.
70
3.2.5.1
1NFEKTION
.
70
3.2.5.2
GEWINNUNG
UND
PROZESSIERUNG
VON
PROBEN
.
70
3.2.5.3
BESTIMMUNG
DER
LD
50
.
71
3.2.5.4
BESTIMMUNG
DER
INTERFERON-SS-PROMOTORAKTIVIERUNG
IN
DER
LUNGE
INFIZIERTER
TIERE
.
71
3.2.5.5
TRANSMISSIONSEXPERIMENTE
.
72
3.2.6
BIOINFORMATISCHE
METHODEN
.
72
3.2.6.1
DATENBANKRECHERCHE
DER
NS
1
-SEQUENZEN
.
72
3.2.7
STATISTIK
.
72
4.
ERGEBNISSE
.
73
4.1
DAS
MAUSADAPTIERTE
HK68-VIRUS
UND
DIE
VERWENDETEN
NS
1
-VARIANTEN
.73
4.2
WACHSTUMSKURVEN
DER
NS1(38R)-VIREN
.
74
4.3
AKTIVIERUNG
DES
IFN-SS-PROMOTORS
IN
MEFS
.75
4.4
DIE
R38A-MUTANTEN
.77
4.5
WACHSTUMSKURVEN
DER
NS
1
(R38A)-VIREN
.
77
4.6
AKTIVIERUNG
DES
IFN-SS-PROMOTORS
DURCH
NS
1
(R38A)-VIREN
.78
4.7
IFN-MRNA-LEVEL
IN
A549-ZELLEN
.
79
4.8
BESTIMMUNG
VON
TYP-I-INTERFERON
IM
UEBERSTAND
VON
A549-ZELLEN
.
81
4.9
LOKALISATION
DES
NS1
IN
DER
INFIZIERTEN
ZELLE
.
83
4.10
WACHSTUM
DER
VIREN
IN
LUNGEN
VON
MXL-POSITIVEN
UND
-NEGATIVEN
MAEUSEN
.86
4.11
IFN-INDUKTION
NACH
IN
VIVO-INFEKTION
.
88
4.12
BESTIMMUNG
DER
LD
50
IN
MXL-POSITIVEN
MAEUSEN
.
90
4.13
WACHSTUM
DER
VIREN
IN
MXL-POSITIVEN
MAEUSEN
NACH
INFEKTION
DES
OBEREN
RESPIRATIONSTRAKTES
.
92
4.14
WACHSTUMSKINETIK
BEI
33C
.
93
4.15
UEBERTRAGUNGSVERSUCHE
IN
MAEUSEN
.94
5.
DISKUSSION
.
101
5.1
UNTERSUCHTE
POLYMORPHISMEN
IN
NS
1
.
101
5.2
VERHALTEN
IN
VITRO
.
104
5.3
VERHALTEN
IN
VIVO
.
107
5.4
FAZIT
.
112
6.
ZUSAMMENFASSUNG
.
117
7.
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
.
119
8.
LITERATURVERZEICHNIS
.
123
9.
PUBLIKATIONEN
.
136
ANHANG:
EIDESSTATTLICHE
VERSICHERUNG
.
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Inhaltsverzeichnis