Verfügbarkeit: HPV-induzierte Deregulation ausgewählter microRNas im Zusammenhang mit Epithelialer-Mesenchymaler Transition und oxidativem Stress im oropharyngealen Plattenepithelkarzinom

HPV-induzierte Deregulation ausgewählter microRNas im Zusammenhang mit Epithelialer-Mesenchymaler Transition und oxidativem Stress im oropharyngealen Plattenepithelkarzinom:

Gespeichert in:

Bibliographische Detailangaben
1. Verfasser:	Siefer, Oliver Gerhard 1974- (VerfasserIn)
Format:	Abschlussarbeit Buch
Sprache:	German
Veröffentlicht:	Köln [2020]
Schlagworte:	Oxidativer Stress Epithel Transition > Medizin Mesenchym Plattenepithelcarcinom Hochschulschrift
Online-Zugang:	Inhaltsverzeichnis Inhaltsverzeichnis
Beschreibung:	133 Seiten Illustrationen 21 cm

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adam_text	INHALTSVERZEICHNIS 1 EINLEITUNG ............................................................................................................... 14 1.1 PLATTENEPITHELKARZINOME DER KOPF-HALS-REGION ........................................... 14 1.1.1 EPIDEMIOLOGIE UND AETIOLOGIE DER KOPF-HALS-KARZINOME ................................. 14 1.1.2 EPIDEMIOLOGISCHE TRENDS FUER ANATOMISCHE SUBLOKALISATIONEN ...................... 15 1.1.3 HPV-ASSOZIIERTE OROPHARYNXKARZINOME ............................................................ 16 1.1.4 DIAGNOSTIK, THERAPIE UND PROGNOSE DER HPV-ASSOZIIERTEN OPSCCS ............ 18 1.2 HUMANE PAPILLOMAVIREN ................................................................................... 20 1.2.1 TAXONOMIE DER PAPILLOMAVIREN .......................................................................... 20 1.2.2 MORPHOLOGIE UND GENOMORGANISATION .............................................................. 21 1.2.3 DER VIRALE INFEKTIONSZYKLUS IM OROPHARYNX ...................................................... 23 1.2.4 MOLEKULARE GRUNDLAGEN DER HPV-INDUZIERTEN KARZINOGENESE ....................... 24 1.3 MICRORNAS ........................................................................................................ 26 1.3.1 ENTDECKUNG UND BEDEUTUNG DER RNA-INTERFERENZ ........................................... 26 1.3.2 BIOGENESE DER MIRNAS UND MECHANISMEN DER GENREGULATION ...................... 28 1.3.3 MIRNAS BEI HPV-ASSOZIIERTEN OROPHARYNXKARZINOMEN ................................. 30 1.4 EPITHELIALE-MESENCHYMALE T RANSITION ........................................................... 31 1.4.1 EPITHELIALE-MESENCHYMALE TRANSITION BEI HPV-ASSOZIIERTEN OPSCCS .......... 31 1.4.2 CADHERIN-VERMITTELTE ZELL-ZELL-ADHAESIONEN UND DER WNT-SIGNALWEG ............. 32 1.4.3 DER EINFLUSS VON HPV-ASSOZIIERTEN MIRNAS AUF DIE EMT IM OPSCC ............ 34 1.5 ALDO-KETO-RED U KTASEN ..................................................................................... 37 1.5.1 OXIDATIVER STRESS UND DER KEAP1-NRF2-SIGNALWEG ........................................... 37 1.5.2 ALDO-KETO-REDUKTASEN UND HPV........................................................................ 38 2 ZIELSETZUNG DIESER DOKTORARBEIT ...................................................................... 40 3 MATERIAL ................................................................................................................... 41 3.1 UEBERSICHT UEBER DAS UNTERSUCHUNGSGUT ........................................................ 41 3.1.1 KRYOKONSERVIERTES FRISCHGEWEBE ...................................................................... 41 3.1.2 PARAFFINMATERIAL ................................................................................................... 41 3.1.3 ZELLLINIEN 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............................................................................................................. 44 3.6.1 ZELLLINIEN ................................................................................................................ 44 3.6.2 REAGENZIEN FUER DIE ZELLKULTUR ............................................................................. 44 3.7 SOFTWARE .............................................................................................................. 44 4 METHODEN .................................................................................................................. 45 4.1 BIOMATERIALIEN ....................................................................................................45 4.1.1 ASSERVIERUNG VON FRISCHGEWEBE AUS OPERATIONSMATERIAL .............................. 45 4.1.2 AUSWAHL DES PATIENTENKOLLEKTIVES UND KLINISCHE DATEN ................................. 45 4.1.3 FORMALIN-FIXIERTES UND PARAFFIN-EINGEBETTETES GEWEBE ................................... 46 4.2 KONVENTIONELLE UND IMMUNHISTOCHEMISCHE FAERBUNGEN ............................46 4.2.1 ANFERTIGUNG VON KRYOSTATSCHNITTEN UND HE-FAERBUNG ...................................... 46 4.2.2 HISTOLOGISCHE UND ZYTOLOGISCHE AUSWAHLKRITERIEN .......................................... 46 4.2.3 IMMUNHISTOCHEMISCHE FAERBUNG VON P16 AM FRISCHGEWEBE ......................... 47 4.2.4 IMMUNHISTOCHEMIE AN SCHNITTPRAEPARATEN AUS FFPE-GEWEBE ....................... 48 4.2.5 PRIMAERE UND SEKUNDAERE ANTIKOERPER FUER DIE IMMUNHISTOCHEMIE .................... 49 4.3 NUKLEINSAEUREEXTRAKTION AUS TUMORFRISCHGEWEBE ........................................49 4.3.1 FESTPHASENEXTRAKTION VON GENOMISCHER DNA ................................................. 49 4.3.2 EXTRAKTION VON TOTAL RNA ..................................................................................... 50 4.3.3 BESTIMMUNG DER INTEGRITAET UND KONZENTRATION VON TOTAL RNA ....................... 50 4.4 QUALITATIVE POLYMERASEKETTENREAKTION ........................................................... 51 4.4.1 HPV-SPEZIFISCHE PCRS UND TYPISIERUNG ........................................................... 51 4.5 MICROARRAYS ................................................................................................. 51 4.5.1 EXPRESSIONSANALYSEN MIT DEM ILLUMINA MIRNA BEADCHIP ARRAY ................. 51 4.5.2 MRNA-EXPRESSIONSANALYSEN .............................................................................. 53 4.6 QUANTITATIVE POLYMERASEKETTENREAKTION ........................................................ 53 4.6.1 MIRNA-SPEZIFISCHE QUANTITATIVE REAL-TIME-PCR ............................................. 53 4.7 PROTEINEXPRESSIONSANALYSE MITTELS WESTERN-BLOT ........................................ 55 4.7.1 PROTEINEXTRAKTION UND KONZENTRATIONSBESTIMMUNG ........................................ 55 4.7.2 GELELEKTROPHORETISCHE AUFTRENNUNG UND WESTERN-BLOT-ANALYSE ................... 55 4.8 ZELLKULTUR ............................................................................................................ 56 4.8.1 KULTIVIERUNG DER ZELLLINIEN .................................................................................. 56 4.8.2 TRANSFEKTION DER PT67-ZELLEN ............................................................................. 56 4.8.3 ERZEUGUNG REKOMBINANTER RETROVIREN ............................................................... 56 4.8.4 INFEKTION DER HUMANEN PRIMAEREN KERATINOZYTEN .............................................. 57 4.8.5 TRANSFEKTION DER KERATINOZYTEN MIT MIRNAS .................................................... 57 4.9 STATISTIK ............................................................................................................... 57 5 ERGEBNISSE ............................................................................................................ 59 5.1 BASISDIAGNOSTIK ................................................................................................ 59 5.1.1 HAEMATOXYLIN-EOSIN-UEBERSICHTSFAERBUNGEN AM FRISCHGEWEBE ........................ 59 5.1.2 HPV-BASISDIAGNOSTIK .......................................................................................... 59 5.1.3 AUSWAHLKRITERIEN DER BASISDIAGNOSTIK ............................................................... 61 5.2 MIKROARRAYS UND RT-QPCRS AM TUMORFRISCHGEWEBE ................................. 62 5.2.1 EXPRESSIONSANALYSE UEBER DEN ILLUMINA MIRNA BEADCHIP ARRAY ................. 62 5.2.2 RT-QPCRS AUF HOCHREGULIERTE MIRS .................................................................. 62 5.2.3 MRNA-EXPRESSIONSANALYSEN ............................................................................. 63 5.3 EXPERIMENTELLE VALIDIERUNG DES HPV-EINFLUSSES IN VITRO ........................... 65 5.3.1 RT-QPCRS AUF AUSGEWAEHLTE MIRS IN TRANSFIZIERTEN KERATINOZYTEN ................ 65 5.3.2 RT-QPCRS AUF DAS KULTURMEDIUM DER TRANSFIZIERTEN KERATINOZYTEN ............. 66 5.3.3 EXPRESSIONSANALYSEN DER MIR-9, VON K-LATENIN UND E-CADHERIN ................. 67 5.4 EXPRESSION VON SS-CATENIN, E-CADHERIN UND DER MIR-9 IM TUMOR .............. 69 5.4.1 RT-QPCRS AUF SS-CATENIN UND E-CADHERIN IM OPSCC ..................................... 69 5.4.2 DIE MIR-9-EXPRESSION IM OPSCC IN ABHAENGIGKEIT VON HPV16-E6/E7 .......... 69 5.5 ANALYSE DES WNT-SIGNALWEGES UND KOMPONENTEN DER OXIDATIVEN STRESSANTWORT ............................................................................................................. 71 5.6 ZUSAMMENFASSENDE DATENVISUALISIERUNG MITTELS HEATMAP ....................... 75 5.7 STATISTISCHE ANALYSE ........................................................................................ 76 5.7.1 STATISCHEN BERECHNUNGEN .................................................................................. 76 5.7.2 HPV-STATUS 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adam_txt	INHALTSVERZEICHNIS 1 EINLEITUNG . 14 1.1 PLATTENEPITHELKARZINOME DER KOPF-HALS-REGION . 14 1.1.1 EPIDEMIOLOGIE UND AETIOLOGIE DER KOPF-HALS-KARZINOME . 14 1.1.2 EPIDEMIOLOGISCHE TRENDS FUER ANATOMISCHE SUBLOKALISATIONEN . 15 1.1.3 HPV-ASSOZIIERTE OROPHARYNXKARZINOME . 16 1.1.4 DIAGNOSTIK, THERAPIE UND PROGNOSE DER HPV-ASSOZIIERTEN OPSCCS . 18 1.2 HUMANE PAPILLOMAVIREN . 20 1.2.1 TAXONOMIE DER PAPILLOMAVIREN . 20 1.2.2 MORPHOLOGIE UND GENOMORGANISATION . 21 1.2.3 DER VIRALE INFEKTIONSZYKLUS IM OROPHARYNX . 23 1.2.4 MOLEKULARE GRUNDLAGEN DER HPV-INDUZIERTEN KARZINOGENESE . 24 1.3 MICRORNAS . 26 1.3.1 ENTDECKUNG UND BEDEUTUNG DER RNA-INTERFERENZ . 26 1.3.2 BIOGENESE DER MIRNAS UND MECHANISMEN DER GENREGULATION . 28 1.3.3 MIRNAS BEI HPV-ASSOZIIERTEN OROPHARYNXKARZINOMEN . 30 1.4 EPITHELIALE-MESENCHYMALE T RANSITION . 31 1.4.1 EPITHELIALE-MESENCHYMALE TRANSITION BEI HPV-ASSOZIIERTEN OPSCCS . 31 1.4.2 CADHERIN-VERMITTELTE ZELL-ZELL-ADHAESIONEN UND DER WNT-SIGNALWEG . 32 1.4.3 DER EINFLUSS VON HPV-ASSOZIIERTEN MIRNAS AUF DIE EMT IM OPSCC . 34 1.5 ALDO-KETO-RED U KTASEN . 37 1.5.1 OXIDATIVER STRESS UND DER KEAP1-NRF2-SIGNALWEG . 37 1.5.2 ALDO-KETO-REDUKTASEN UND HPV. 38 2 ZIELSETZUNG DIESER DOKTORARBEIT . 40 3 MATERIAL . 41 3.1 UEBERSICHT UEBER DAS UNTERSUCHUNGSGUT . 41 3.1.1 KRYOKONSERVIERTES FRISCHGEWEBE . 41 3.1.2 PARAFFINMATERIAL . 41 3.1.3 ZELLLINIEN . 41 3.2 GERAETE UND ZUBEHOER . 42 3.3 REAGENZIEN, CHEMIKALIEN UND VERBRAUCHSMATERIAL .42 3.3.1 REAGENZIENSYSTEME (KITS) . 42 3.3.2 SONSTIGE CHEMIKALIEN, PUFFERSYSTEME UND VERBRAUCHSMATERIALIEN . 42 3.4 ANTIKOERPER .43 3.5 OLIGONUKLEOTIDE .43 3.5.1 SYNTHETISIERTE PRIMER . 43 3.5.2 KOMMERZIELLE PRIMER UND MIRS (MISCRIPT PRIMER-ASSAYS, QIAGEN) . 44 3.6 ZELLKULTUR . 44 3.6.1 ZELLLINIEN . 44 3.6.2 REAGENZIEN FUER DIE ZELLKULTUR . 44 3.7 SOFTWARE . 44 4 METHODEN . 45 4.1 BIOMATERIALIEN .45 4.1.1 ASSERVIERUNG VON FRISCHGEWEBE AUS OPERATIONSMATERIAL . 45 4.1.2 AUSWAHL DES PATIENTENKOLLEKTIVES UND KLINISCHE DATEN . 45 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EGFR-EXPRESSION . 82 6 DISKUSSION . 83 6.1.1 AKTUELLER STATUS DER INZIDENZ, PROPHYLAXE, THERAPIE UND KLINISCHEN RELEVANZ VON BIOMARKERN UND MIRS FUER DAS HPV-ASSOZIIERTE OPSCC . 83 6.1.2 OXIDATIVER STRESS UND HPV-INTEGRATION IM OPSCC . 86 6.1.3 EPITHELIAL-MESENCHYMALE TRANSITION IM OPSCC . 88 6.1.4 GEMEINSAME ANALYSE DER OXIDATIVEN STRESS- UND EMT-MARKER . 89 6.1.5 MICRORNA-9 . 92 6.1.6 MICRORNA-363 . 97 6.1.7 MICRORNA-16 . 100 7 ZUSAMMENFASSUNG UND AUSBLICK . 102 8 LITERATURVERZEICHNIS . 104 9 VORABVEROEFFENTLICHUNGEN . 121 10 TABELLENVERZEICHNIS . 124 11 ABBILDUNGSVERZEICHNIS . 125 12 CURRICULUM VITAE . 127
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