Merlin als Regulator des Na+/H+-Austauschers (NHE1) in humanen Melanomzellen (MV3):
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Münster
2019
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|---|---|
| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
ABBILDUNGSVERZEICHNIS.8
TABELLENVERZEICHNIS.9
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS.10
1 EINFUEHRUNG.14
1.1 NHE1.14
1.1.1 REGULATION DES ZELLVOLUMENS.15
1.1.2 PH -HOMOEOSTASE.15
1.1.3 APOPTOSE UND MULTIPLE DRUG RESISTANCE.16
1.1.4 NEOANGIOGENESE. 17
1.1.5 NHE1 ALS ZYTOSKELETTANKER.18
1.1.6 MIGRATION.18
1.1.7 INVASION UND METASTASIERUNG...20
1.1.8 REGULATION DES NHE1.21
1.1.9 ZUSAMMENFASSUNG NHE1. 23
1.2 MERLIN. 24
1.2.1 STRUKTUR.25
1.2.2 MERLINS FUNKTION AN DER PLASMAMEMBRAN.27
1.2.3 MERLINS FUNKTION IM ZELLKERN.29
1.2.4 HIPPO-SIGNALWEG. 30
1.2.5 ZUSAMMENFASSUNG MERLIN.31
1.3 MERLIN UND NHE1 IM MELANOM.31
1.4 INTERAKTION VON MERLIN UND DEM NHE1. 32
1.5 ZIELE DIESER ARBEIT. 34
1.6 METHODISCHES VORGEHEN.35
2 MATERIAL UND METHODEN.36
2.1 ZELLKULTUR......36
2.1.1 ZELLEN. 36
2.1.2 SUBKULTIVIERUNG... 36
2.1.3 KRYOKONSERVIERUNG. 37
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
HTTP://D-NB.INFO/1206431083
2.1.4 AUFTAUEN DER ZELLEN.37
2.2 TRANSIENTE TRANSFEKTION MITTELS SIRNA...38
2.3 MIGRATION.............39
2.3.1 VORBEREITUNG DER MIGRATIONSFLAESCHCHEN...39
2.3.2 AUSSAEEN UND VIDEOMIGRATION. 40
2.3.3 AUSWERTUNG...-...40
2.4 NHEL-AKTIVITAETSBESTIMMUNG DURCH PH-MESSUNGEN. 41
2.4.1 AUSSAEEN UND INTRAZELLULAERE PH-MESSUNGEN. 41
2.4.2 AMMONIUM-PRAEPULS. 44
2.5 WESTERNBLOTS ................-45
2.5.1 HERSTELLUNG VON PROTEINLYSATEN. 45
2.5.2 PROTEINBESTIMMUNG. 46
2.5.3 SDS-PAGE. 46
2.5.4 BLOTTING...48
2.5.5 PROTEINDETEKTION.....*.49
2.5.6 STRIPPEN... 50
2.5.7 AUSWERTUNG.50
2.6 BESTIMMUNG DER GENEXPRESSION AUF MRNA-EBENE MITHILFE DER
QUANTITATIVEN ECHTZEIT-POLYMERASE-KETTENREAKTION.51
2.6.1 RNA-LYSATE.....*.51
2.6.2 MESSUNG DER RNA-KONZENTRATION UND REINHEITSBESTIMMUNG.52
2.6.3 REVERSE TRANSKRIPTION - HERSTELLUNG EINER CDNA.52
2.6.4 POLYMERASE-KETTENREAKTION. 53
2.6.5 QUANTITATIVE ECHTZEIT-PCR. 55
2.6.6 DURCHFUEHRUNG PCR UND SCHMELZKURVENANALYSE.. 56
2.6.7 RELATIVE QUANTIFIZIERUNG... 58
2.6.8 EFFIZIENZBESTIMMUNG... 59
2.7 STATISTIK... 59
ERGEBNISSE.....-.61
3.1 EINFLUSS VON EGFR-VERMITTELTEN SIGNALWEGEN WIE PI3K/AKT UND
MAPK-KASKADE AUF DIE NHEL-AKTIVITAET.....-.61
3.1.1 NHE1 - AKTIVITAETSBESTIMMUNG DURCH PH-MESSUNGEN.61
3.1.2 MIGRATION.....68
3.2 EINFLUSS VON MIERLIN AUF DIE NHEL-EXPRESSION .....72
3.2.1 IST DIE NHEL-EXPRESSION NUR AUF PROTEIN- ODER AUCH AUF MRNA-EBENE
HERUNTERREGULIERT?.............73
3.2.2 EINFLUSS VON DCAF1 AUF DIE NHEL-EXPRESSION...73
4 DISKUSSION.-.-.7 6
4.1 MERLINS EINFLUSS AUF DIE NHEL-AKTIVITAET....... .. 76
4.1.1 EGF UEBT EINEN STAERKEREN EINFLUSS AUF DIE NHEL-AKTIVITAET MERLIN-
DEFIZIENTER IM VERGLEICH ZU SCRAMBLED-TRANSFIZIERTEN MV3-ZELLEN AUS.76
4.1.2 WEITERE MOEGLICHE MECHANISMEN, UEBER DIE MERLIN EINFLUSS AUF DIE
NHEL-AKTIVITAET NEHMEN KOENNTE.............. 80
4.1.3 EGF FUEHRT ZU EINER DEUTLICH STAERKEREN ERHOEHUNG DER MOTILITAET
MERLIN-
DEFIZIENTER IM VERGLEICH ZU SCRAMBLED-TRANSFIZIERTEN MV3-ZELLEN... 82
4.2 NHEL-EXPRESSION IN MERLIN-DEFIZIENTEN MV3-ZEILEN
.....................85
4.2.1 MERLIN-DEFIZIENZ VERMINDERT DIE NHEL-EXPRESSION AUF MRNA-EBENE 85
4.2.2 MERLINS HEMMUNG DER E3 UBIQUITIN-LIGASE CRL4DCAF1 ERKLAERT DEN
EINFLUSS AUF DIE NHEL-EXPRESSION NICHT...86
4.2.3 WEITERE MOEGLICHE MECHANISMEN, UEBER DIE MERLIN EINFLUSS AUF DIE
NHEL-EXPRESSION NEHMEN KOENNTE.........86
4.3 DIE EXPRESSION VON MERLIN HAENGT NICHT VON DER AKTIVITAET UND
EXPRESSION DES NHE1 AB.....-.-.-.-88
4.4 ZUSAMMENFASSUNG UND AUSBLICK........88
LITERATURVERZEICHNIS......90
DANKSAGUNG......*.101
LEBENSLAUF...........102
|
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INHALTSVERZEICHNIS
ABBILDUNGSVERZEICHNIS.8
TABELLENVERZEICHNIS.9
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS.10
1 EINFUEHRUNG.14
1.1 NHE1.14
1.1.1 REGULATION DES ZELLVOLUMENS.15
1.1.2 PH -HOMOEOSTASE.15
1.1.3 APOPTOSE UND MULTIPLE DRUG RESISTANCE.16
1.1.4 NEOANGIOGENESE. 17
1.1.5 NHE1 ALS ZYTOSKELETTANKER.18
1.1.6 MIGRATION.18
1.1.7 INVASION UND METASTASIERUNG.20
1.1.8 REGULATION DES NHE1.21
1.1.9 ZUSAMMENFASSUNG NHE1. 23
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1.2.5 ZUSAMMENFASSUNG MERLIN.31
1.3 MERLIN UND NHE1 IM MELANOM.31
1.4 INTERAKTION VON MERLIN UND DEM NHE1. 32
1.5 ZIELE DIESER ARBEIT. 34
1.6 METHODISCHES VORGEHEN.35
2 MATERIAL UND METHODEN.36
2.1 ZELLKULTUR.36
2.1.1 ZELLEN. 36
2.1.2 SUBKULTIVIERUNG. 36
2.1.3 KRYOKONSERVIERUNG. 37
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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2.1.4 AUFTAUEN DER ZELLEN.37
2.2 TRANSIENTE TRANSFEKTION MITTELS SIRNA.38
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2.3.1 VORBEREITUNG DER MIGRATIONSFLAESCHCHEN.39
2.3.2 AUSSAEEN UND VIDEOMIGRATION. 40
2.3.3 AUSWERTUNG.-.40
2.4 NHEL-AKTIVITAETSBESTIMMUNG DURCH PH-MESSUNGEN. 41
2.4.1 AUSSAEEN UND INTRAZELLULAERE PH-MESSUNGEN. 41
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2.5.6 STRIPPEN. 50
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2.6 BESTIMMUNG DER GENEXPRESSION AUF MRNA-EBENE MITHILFE DER
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2.6.1 RNA-LYSATE.*.51
2.6.2 MESSUNG DER RNA-KONZENTRATION UND REINHEITSBESTIMMUNG.52
2.6.3 REVERSE TRANSKRIPTION - HERSTELLUNG EINER CDNA.52
2.6.4 POLYMERASE-KETTENREAKTION. 53
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2.6.7 RELATIVE QUANTIFIZIERUNG. 58
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2.7 STATISTIK. 59
ERGEBNISSE.-.61
3.1 EINFLUSS VON EGFR-VERMITTELTEN SIGNALWEGEN WIE PI3K/AKT UND
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3.1.1 NHE1 - AKTIVITAETSBESTIMMUNG DURCH PH-MESSUNGEN.61
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3.2 EINFLUSS VON MIERLIN AUF DIE NHEL-EXPRESSION .72
3.2.1 IST DIE NHEL-EXPRESSION NUR AUF PROTEIN- ODER AUCH AUF MRNA-EBENE
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4.1 MERLINS EINFLUSS AUF DIE NHEL-AKTIVITAET. . 76
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4.1.2 WEITERE MOEGLICHE MECHANISMEN, UEBER DIE MERLIN EINFLUSS AUF DIE
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4.2.1 MERLIN-DEFIZIENZ VERMINDERT DIE NHEL-EXPRESSION AUF MRNA-EBENE 85
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