Einfluss der Hif-1α Überexpression in endothelialen Progenitorzellen und mesenchymalen Stammzellen - Beeinflussung regenerativer und stammzellzugehöriger Zellparameter:
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Freiburg im Breisgau
[2020]
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
INHALTSVERZEICHNIS
3
2.
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
5
3.
EINLEITUNG
11
3.1.
TISSUE
ENGINEERING
-
STEIGENDER
BEDARF
IM
GESELLSCHAFTLICHEN
KONTEXT
11
3.1.1.
ZELL-
UND
GENTHERAPIE
-
WICHTIGE
BESTANDTEILE
DES
TISSUE
ENGINEERINGS
13
3.1.2.
VIRALE
VEKTOREN
IN
DER
GENTHERAPIE
14
3.1.3.
KNOCHENGEWEBE
ALS
GEN-
UND
ZELLTHERAPEUTISCHES
TARGET
15
3.1.4.
MESENCHYMALE
STAMMZELLEN
17
3.2.
VASKULARISIERUNG
-
HERAUSFORDERUNG
DES
TISSUE
ENGINEERING
19
3.2.1.
ENDOTHELIALE
PROGENITORZELLEN
20
3.3.
TRANSKRIPTIONSFAKTOR
HIF-1A
22
4.
FRAGESTELLUNG
UND
ZIEL
DER
ARBEIT
25
5.
MATERIAL
UND
METHODEN
27
5.1.
ZELLKULTUREN,
VIRUSPRODUKTION
UND
-TRANSDUKTION
27
5.1.1.
ISOLATION,
EXPANSION
UND
CHARAKTERISIERUNG
DER
MSCS
27
5.1.1.1.
ISOLATIONSPROZESS
27
5.1.1.2.
EXPANSION
UND
KRYOKONSERVIERUNG
DER
MSCS
29
5.1.1.3.
CHARAKTERISIERUNG
DER
MSCS
30
5.1.2. ISOLATION,
EXPANSION
UND
CHARAKTERISIERUNG
DER
EPCS
31
5.1.3.
EXPANSION
UND
CHARAKTERISIERUNG
DER
293T
ZELLEN
33
5.1.4.
AMPLIFIKATION
DER
ADENOVIREN
34
5.1.5.
TITRATION
DES
ADENOVIRUS
AN
MSCS
35
5.2.
IN-VITRO
VERSUCHE
37
5.2.1.
HIF-1A
ELISA
37
5.2.1.1.
HERSTELLUNG
VON
ZELLLYSATEN
37
5.2.1.2.
BCA-ASSAY
38
52.1.3.
ELISA
39
5.2.2.
PROLIFERATIONSASSAY
41
5.2.3.
CELL
DEATH
DETECTION
ELISA
43
5.2.4.
UNTERSUCHUNG
DER
SENESZENZ
45
5.2.5.
COLONY
FORMATION
ASSAY
46
5.2.6.
QUANTITATIVE
REAL-TIME
RT-PCR
47
5.2.6.1.
RNA-ISOLATION
48
52.6.2.
CDNA-SYNTHESE
49
5.2.6.3.
TAQMAN-ANALYSE
50
5.2.7.
ALIZARIN-ROT-FAERBUNG
53
5.2.8.
MIGRATIONSASSAY
55
5.2.9.
INVASIONSASSAY
58
5.2.10.
SPHAEROIDSPROUTING
ASSAY
59
5.2.10.1.
HERSTELLUNG
DER
METHOCEL
STOCK
LOESUNG
60
5.2.10.2.
HERSTELLUNG
DER
SPHAEROIDE
61
5.2.10.3.
ERNTEN
DER
SPHAEROIDE
61
5.2.10.4.
GIESSEN
DER
SPHAEROIDE
IN
FIBRINGELE,
AUSWERTUNG
62
5.2.11.
MATRIGEL
ASSAY
62
5.3.
STATISTISCHE
ANALYSE
63
6
ERGEBNISSE
65
6.1.
IN-VITRO
VERSUCHSTEIL
65
6.1.1.
VIRUSPRODUKTION
UND
TITERBESTIMMUNG
65
6.1.2.
VERIFIKATION
DER
UEBEREXPRESSION
VIA
ELISA
66
6.1.3.
EINFLUSS
DER
UEBEREXPRESSION
VON
HIF-1A
AUF
DIE
PROLIFERATION
68
6.1.4.
UNTERSUCHUNG
DER
APOPTOSE
UNTER
UEBEREXPRESSION
70
6.1.5.
ZELLALTERUNG
UNTER
UEBEREXPRESSION
VON
HIF-1A
72
6.1.6.
MIGRATION
UND
INVASION
UNTER
UEBEREXPRESSION
73
6.1.7.
EINFLUSS
AUF
GENE
MIT
OSTEO-
UND
ANGIOGENETISCHER
RELEVANZ
IN
MSCS
77
6.1.8.
OSTEOBLASTISCHE
DIFFERENZIERUNG
VON
MSCS
UNTER
UEBEREXPRESSION
78
6.1.9.
KOLONIEBILDUNG
UNTER
HIF-1A
UEBEREXPRESSION
IN
EPCS 80
6.1.10.
KAPILLARSPROSSUNG
UNTER
UEBEREXPRESSION
IN
EPCS
81
7.
DISKUSSION
85
7.1.
EINFLUSS
AUF
REGENERATIVE
PARAMETER
IN
MSCS
UND
EPCS
UND
MOEGLICHE
KONSEQUENZEN
FUER
WEITERFUEHRENDE
VERSUCHSMODELLE
85
7.2.
EINFLUSSNAHME
AUF
GENEXPRESSION
MIT
RELEVANZ
FUER
DIE
VASKULOGENESE
IN
MSCS
91
7.3.
EINFLUSS
AUF
OSTEOGENESE-RELEVANTE
GENEXPRESSION
UND
DIE
OSTEOBLASTISCHE
DIFFERENZIERUNG
IN
MESENCHYMALEN
STAMMZELLEN
92
7.4.
EINFLUSS
DER
UEBEREXPRESSION
AUF
AUSBILDUNG
KAPILLARAEHNLICHER
STRUKTUREN
DURCH
EPCS
95
7.5.
AUSBLICK
96
8.
ZUSAMMENFASSUNG
99
9.
LITERATURVERZEICHNIS
100
10.
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
115
11.
PUBLIKATIONEN
119
12.
LEBENSLAUF
120
13.
EIDESSTATTLICHE
VERSICHERUNG
122
14.
ERKLAERUNG
ZUM
EIGENANTEIL
123
15.
DANKSAGUNG
124
|
| adam_txt |
1.
INHALTSVERZEICHNIS
1.
INHALTSVERZEICHNIS
3
2.
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
5
3.
EINLEITUNG
11
3.1.
TISSUE
ENGINEERING
-
STEIGENDER
BEDARF
IM
GESELLSCHAFTLICHEN
KONTEXT
11
3.1.1.
ZELL-
UND
GENTHERAPIE
-
WICHTIGE
BESTANDTEILE
DES
TISSUE
ENGINEERINGS
13
3.1.2.
VIRALE
VEKTOREN
IN
DER
GENTHERAPIE
14
3.1.3.
KNOCHENGEWEBE
ALS
GEN-
UND
ZELLTHERAPEUTISCHES
TARGET
15
3.1.4.
MESENCHYMALE
STAMMZELLEN
17
3.2.
VASKULARISIERUNG
-
HERAUSFORDERUNG
DES
TISSUE
ENGINEERING
19
3.2.1.
ENDOTHELIALE
PROGENITORZELLEN
20
3.3.
TRANSKRIPTIONSFAKTOR
HIF-1A
22
4.
FRAGESTELLUNG
UND
ZIEL
DER
ARBEIT
25
5.
MATERIAL
UND
METHODEN
27
5.1.
ZELLKULTUREN,
VIRUSPRODUKTION
UND
-TRANSDUKTION
27
5.1.1.
ISOLATION,
EXPANSION
UND
CHARAKTERISIERUNG
DER
MSCS
27
5.1.1.1.
ISOLATIONSPROZESS
27
5.1.1.2.
EXPANSION
UND
KRYOKONSERVIERUNG
DER
MSCS
29
5.1.1.3.
CHARAKTERISIERUNG
DER
MSCS
30
5.1.2. ISOLATION,
EXPANSION
UND
CHARAKTERISIERUNG
DER
EPCS
31
5.1.3.
EXPANSION
UND
CHARAKTERISIERUNG
DER
293T
ZELLEN
33
5.1.4.
AMPLIFIKATION
DER
ADENOVIREN
34
5.1.5.
TITRATION
DES
ADENOVIRUS
AN
MSCS
35
5.2.
IN-VITRO
VERSUCHE
37
5.2.1.
HIF-1A
ELISA
37
5.2.1.1.
HERSTELLUNG
VON
ZELLLYSATEN
37
5.2.1.2.
BCA-ASSAY
38
52.1.3.
ELISA
39
5.2.2.
PROLIFERATIONSASSAY
41
5.2.3.
CELL
DEATH
DETECTION
ELISA
43
5.2.4.
UNTERSUCHUNG
DER
SENESZENZ
45
5.2.5.
COLONY
FORMATION
ASSAY
46
5.2.6.
QUANTITATIVE
REAL-TIME
RT-PCR
47
5.2.6.1.
RNA-ISOLATION
48
52.6.2.
CDNA-SYNTHESE
49
5.2.6.3.
TAQMAN-ANALYSE
50
5.2.7.
ALIZARIN-ROT-FAERBUNG
53
5.2.8.
MIGRATIONSASSAY
55
5.2.9.
INVASIONSASSAY
58
5.2.10.
SPHAEROIDSPROUTING
ASSAY
59
5.2.10.1.
HERSTELLUNG
DER
METHOCEL
STOCK
LOESUNG
60
5.2.10.2.
HERSTELLUNG
DER
SPHAEROIDE
61
5.2.10.3.
ERNTEN
DER
SPHAEROIDE
61
5.2.10.4.
GIESSEN
DER
SPHAEROIDE
IN
FIBRINGELE,
AUSWERTUNG
62
5.2.11.
MATRIGEL
ASSAY
62
5.3.
STATISTISCHE
ANALYSE
63
6
ERGEBNISSE
65
6.1.
IN-VITRO
VERSUCHSTEIL
65
6.1.1.
VIRUSPRODUKTION
UND
TITERBESTIMMUNG
65
6.1.2.
VERIFIKATION
DER
UEBEREXPRESSION
VIA
ELISA
66
6.1.3.
EINFLUSS
DER
UEBEREXPRESSION
VON
HIF-1A
AUF
DIE
PROLIFERATION
68
6.1.4.
UNTERSUCHUNG
DER
APOPTOSE
UNTER
UEBEREXPRESSION
70
6.1.5.
ZELLALTERUNG
UNTER
UEBEREXPRESSION
VON
HIF-1A
72
6.1.6.
MIGRATION
UND
INVASION
UNTER
UEBEREXPRESSION
73
6.1.7.
EINFLUSS
AUF
GENE
MIT
OSTEO-
UND
ANGIOGENETISCHER
RELEVANZ
IN
MSCS
77
6.1.8.
OSTEOBLASTISCHE
DIFFERENZIERUNG
VON
MSCS
UNTER
UEBEREXPRESSION
78
6.1.9.
KOLONIEBILDUNG
UNTER
HIF-1A
UEBEREXPRESSION
IN
EPCS 80
6.1.10.
KAPILLARSPROSSUNG
UNTER
UEBEREXPRESSION
IN
EPCS
81
7.
DISKUSSION
85
7.1.
EINFLUSS
AUF
REGENERATIVE
PARAMETER
IN
MSCS
UND
EPCS
UND
MOEGLICHE
KONSEQUENZEN
FUER
WEITERFUEHRENDE
VERSUCHSMODELLE
85
7.2.
EINFLUSSNAHME
AUF
GENEXPRESSION
MIT
RELEVANZ
FUER
DIE
VASKULOGENESE
IN
MSCS
91
7.3.
EINFLUSS
AUF
OSTEOGENESE-RELEVANTE
GENEXPRESSION
UND
DIE
OSTEOBLASTISCHE
DIFFERENZIERUNG
IN
MESENCHYMALEN
STAMMZELLEN
92
7.4.
EINFLUSS
DER
UEBEREXPRESSION
AUF
AUSBILDUNG
KAPILLARAEHNLICHER
STRUKTUREN
DURCH
EPCS
95
7.5.
AUSBLICK
96
8.
ZUSAMMENFASSUNG
99
9.
LITERATURVERZEICHNIS
100
10.
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
115
11.
PUBLIKATIONEN
119
12.
LEBENSLAUF
120
13.
EIDESSTATTLICHE
VERSICHERUNG
122
14.
ERKLAERUNG
ZUM
EIGENANTEIL
123
15.
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