In vitro-Einfluss von aktivierten Makrophagen und Mikroglia auf die Migration und Proliferation von Oligodendrozytenvorläuferzellen:
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|---|---|
| Format: | Thesis Book |
| Language: | German |
| Published: |
Münster
2020
|
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| Physical Description: | 74, X Blätter Illustrationen, Diagramme 30 cm |
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|---|---|
| adam_text | INHALT
1
EINLEITUNG
..........................................................................................................................
1
1.1
MULTIPLE
SKLEROSE
.......................................................................................................
1
1.1.1
AETIOLOGIE,
PATHOGENESE
UND
PATHOPHYSIOLOGIE
..............................................
2
1.1.2
THERAPEUTISCHE
ANSAETZE
...................................................................................4
1.2
MYELIN
DES
ZNS
........................................................................................................
6
1.2.1
OLIGODENDROZYTEN
UND
IHRE
VORLAEUFERZELLEN
...................................................
7
1.2.2
REMYELINISIERUNG
..............................................................................................
8
1.3
MAKROPHAGEN
UND
MIKROGLIA
...................................................................................
9
1.3.1
AKTIVIERUNG
DURCH
EXTRINSISCHE
SIGNALE
........................................................
10
1.3.2
PHAGOZYTEN
IN
DER
MULTIPLEN
SKLEROSE
..........................................................
11
1.4
ZIEL
DER
ARBEIT
.........................................................................................................
13
2
MATERIAL
...........................................................................................................................
14
2.1
AUSSTATTUNG
..............................................................................................................
14
2.2
VERBRAUCHSMATERIAL
.................................................................................................
15
2.3
LOESUNGEN
UND
PUFFER
...............................................................................................
16
2.4
MEDIUM
UND
ZUSAETZE
..............................................................................................
19
2.4.1
SATO
STOCK
(LOOX)
...........................................................................................
19
2.4.2
OPC-MEDIUM
(SATO)
.......................................................................................
19
2.4.3
SATO+GF
...........................................................................................................
19
2.4.4
MCSF:
L929-ZELL-UEBERSTAND
........................................................................
19
2.4.5
BMM-MEDIUM
...............................................................................................
20
2.4.6
ESDM-MEDIUM
..............................................................................................
20
2.5
PRIMER
.......................................................................................................................20
2.6
PRIMAERANTIKOERPER
......................................................................................................
21
2.7
SEKUNDAERANTIKOERPER
..................................................................................................
21
2.8
TIERE
.........................................................................................................................
21
3
METHODEN
.........................................................................................................................22
3.1
KNOCHENMARKSMAKROPHAGEN
.................................................................................
22
3.1.1
STIMULATION
DER
KNOCHENMARKSMAKROPHAGEN
.............................................
22
3.1.2
AUFBEREITUNG
DER
ZELLUEBERSTAENDE
...................................................................
23
3.2
OLIGODENDROZYTEN-VORLAEUFER-ZELLEN
.....................................................................
23
3.2.1
ISOLIERUNG
.........................................................................................................
23
3.2.2
KULTIVIERUNG
....................................................................................................
24
3.2.3
PASSAGE
............................................................................................................
25
3.2.4
BEHANDLUNG
MIT
IMMUNZELLUEBERSTAENDEN
........................................................
25
3.2.5
OPC-KULTUR
FUER
IMMUNCYTOCHEMIE
..............................................................
25
3.3
EMBRYONIC
STERN
CELL
DERIVED
MICROGLIA
.............................................................
25
3.3.1
ESDM-UEBERSTAENDE
UND
AKTIVIERUNG
............................................................
26
3.4
LEBENDZELLMIKROSKOPIE
..........................................................................................26
3.4.1
AUSWERTUNG
DER
CHEMOKINESE
.......................................................................
26
3.4.2
AUSWERTUNG
DER
ZELLTEILUNG
...........................................................................27
3.5
GERICHTETE
MIGRATION
..............................................................................................27
3.6
IMMUNZYTOCHEMIE
.................................................................................................29
3.7
LASER-SCANNING-MIKROSKOP
..................................................................................30
3.8
MOLEKULARBIOLOGISCHE
TECHNIKEN
.........................................................................30
3.8.1
RNA-ISOLIERUNG
..............................................................................................30
3.8.2
DNASE-VERDAU
................................................................................................30
3.8.3
REVERSE
T
RANSKRIPTION
.....................................................................................
31
3.8.4
SYBR-GREEN-GESTUETZTE
QUANTITATIVE
ECHTZEIT
POLYMERASE-KETTENKEAKTION
31
3.9
GRIESS-ASSAY
...........................................................................................................32
3.10
ARGINASE-AKTIVITAETS-ASSAY
.....................................................................................
32
3.11
ENZYME
LINKED
IMMUNOSORBENT
ASSAY
(ELISA)
................................................
33
3.12
ZELLDICHTE
BESTIMMEN
.............................................................................................
34
3.13
STATISTISCHE
AUSWERTUNG
UND
COMPUTERPROGRAMME
...........................................
34
4
ERGEBNISSE
.......................................................................................................................
35
4.1
GENERIERUNG
VON
UEBERSTAENDEN
AKTIVIERTER
BMM
UND
ESDM
............................
35
4.1.1
KNOCHENMARKSMAKROPHAGEN
.........................................................................
35
4.1.2
EMBRYONIC
STERN
CELL
DERIVED
MICROGLIA
(ESDM)
.....................................
36
4.2
AUSWIRKUNG
VON
KNOCHENMARKSMAKROPHAGEN
AUF
DIE
OPC-REKRUTIERUNG
37
4.2.1
M
IFN
-
Y
BEEINFLUSST
DIE
PDGF-GERICHTETE
MIGRATION
VON
OPC
....................
37
4.2.2
DIE
CHEMOKINESE
WIRD
DURCH
BMM
NICHT
BEEINFLUSST
..............................
38
4.2.3
DIE
BEHANDLUNG
VON
OPC
MIT
MIFN-Y-UEBERSTAND
IST
MIT
DER
REGULATION
DER
EXPRESSION
MIGRATIONSASSOZIIERTER
GENE
VERBUNDEN
....................................
40
4.2.4
DIE
PROLIFERATION
VON
OPC
SCHEINT
DURCH
MAKROPHAGENUEBERSTAENDE
NICHT
BEEINFLUSST
ZU
WERDEN
.....................................................................................
41
4.3
ESDM
......................................................................................................................42
4.3.1
AKTIVIERTE
MIKROGLIA
HABEN
KEINEN
EFFEKT
AUF
DIE
MIGRATION
VON
OPC
...
43
4.3.2
DIE
PROLIFERATION
VON
OPC
WURDE
DURCH
DIE
BEHANDLUNG
MIT
UEBERSTAENDEN
AKTIVIERTER
MIKROGLIA
NICHT
BEEINFLUSST
.........................................................
44
5
DISKUSSION
.......................................................................................................................
46
6
LITERATURVERZEICHNIS
........................................................................................................
55
7
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
...................................................................................................
67
8
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
..................................................................................................69
9
TABELLENVERZEICHNIS
........................................................................................................
72
10
LEBENSLAUF
...................................................................................................................
73
11
DANKSAGUNG
..................................................................................................................
74
12
ANHANG
...........................................................................................................................
I
12.1
AUSWIRKUNG
VON
IFN-Y
AUF
DIE
GERICHTETE
MIGRATION
VON
OPC
...........................
I
12.2
GENEHMIGUNG
TIERVERSUCH
AZ
84-02.05.2012.286
..............................................
II
12.3
VERLAENGERUNG
TIERVERSUCH
AZ
84-02.05.2012.288
.............................................
IV
12.4
GENEHMIGUNG
TIERVERSUCH
AZ
84-02.04.2013.
A029
..........................................
V
12.5
VERLAENGERUNG
TIERVERSUCH
AZ
84-02.04.2013.
A029
...........................................X
|
| adam_txt |
INHALT
1
EINLEITUNG
.
1
1.1
MULTIPLE
SKLEROSE
.
1
1.1.1
AETIOLOGIE,
PATHOGENESE
UND
PATHOPHYSIOLOGIE
.
2
1.1.2
THERAPEUTISCHE
ANSAETZE
.4
1.2
MYELIN
DES
ZNS
.
6
1.2.1
OLIGODENDROZYTEN
UND
IHRE
VORLAEUFERZELLEN
.
7
1.2.2
REMYELINISIERUNG
.
8
1.3
MAKROPHAGEN
UND
MIKROGLIA
.
9
1.3.1
AKTIVIERUNG
DURCH
EXTRINSISCHE
SIGNALE
.
10
1.3.2
PHAGOZYTEN
IN
DER
MULTIPLEN
SKLEROSE
.
11
1.4
ZIEL
DER
ARBEIT
.
13
2
MATERIAL
.
14
2.1
AUSSTATTUNG
.
14
2.2
VERBRAUCHSMATERIAL
.
15
2.3
LOESUNGEN
UND
PUFFER
.
16
2.4
MEDIUM
UND
ZUSAETZE
.
19
2.4.1
SATO
STOCK
(LOOX)
.
19
2.4.2
OPC-MEDIUM
(SATO)
.
19
2.4.3
SATO+GF
.
19
2.4.4
MCSF:
L929-ZELL-UEBERSTAND
.
19
2.4.5
BMM-MEDIUM
.
20
2.4.6
ESDM-MEDIUM
.
20
2.5
PRIMER
.20
2.6
PRIMAERANTIKOERPER
.
21
2.7
SEKUNDAERANTIKOERPER
.
21
2.8
TIERE
.
21
3
METHODEN
.22
3.1
KNOCHENMARKSMAKROPHAGEN
.
22
3.1.1
STIMULATION
DER
KNOCHENMARKSMAKROPHAGEN
.
22
3.1.2
AUFBEREITUNG
DER
ZELLUEBERSTAENDE
.
23
3.2
OLIGODENDROZYTEN-VORLAEUFER-ZELLEN
.
23
3.2.1
ISOLIERUNG
.
23
3.2.2
KULTIVIERUNG
.
24
3.2.3
PASSAGE
.
25
3.2.4
BEHANDLUNG
MIT
IMMUNZELLUEBERSTAENDEN
.
25
3.2.5
OPC-KULTUR
FUER
IMMUNCYTOCHEMIE
.
25
3.3
EMBRYONIC
STERN
CELL
DERIVED
MICROGLIA
.
25
3.3.1
ESDM-UEBERSTAENDE
UND
AKTIVIERUNG
.
26
3.4
LEBENDZELLMIKROSKOPIE
.26
3.4.1
AUSWERTUNG
DER
CHEMOKINESE
.
26
3.4.2
AUSWERTUNG
DER
ZELLTEILUNG
.27
3.5
GERICHTETE
MIGRATION
.27
3.6
IMMUNZYTOCHEMIE
.29
3.7
LASER-SCANNING-MIKROSKOP
.30
3.8
MOLEKULARBIOLOGISCHE
TECHNIKEN
.30
3.8.1
RNA-ISOLIERUNG
.30
3.8.2
DNASE-VERDAU
.30
3.8.3
REVERSE
T
RANSKRIPTION
.
31
3.8.4
SYBR-GREEN-GESTUETZTE
QUANTITATIVE
ECHTZEIT
POLYMERASE-KETTENKEAKTION
31
3.9
GRIESS-ASSAY
.32
3.10
ARGINASE-AKTIVITAETS-ASSAY
.
32
3.11
ENZYME
LINKED
IMMUNOSORBENT
ASSAY
(ELISA)
.
33
3.12
ZELLDICHTE
BESTIMMEN
.
34
3.13
STATISTISCHE
AUSWERTUNG
UND
COMPUTERPROGRAMME
.
34
4
ERGEBNISSE
.
35
4.1
GENERIERUNG
VON
UEBERSTAENDEN
AKTIVIERTER
BMM
UND
ESDM
.
35
4.1.1
KNOCHENMARKSMAKROPHAGEN
.
35
4.1.2
EMBRYONIC
STERN
CELL
DERIVED
MICROGLIA
(ESDM)
.
36
4.2
AUSWIRKUNG
VON
KNOCHENMARKSMAKROPHAGEN
AUF
DIE
OPC-REKRUTIERUNG
37
4.2.1
M
IFN
-
Y
BEEINFLUSST
DIE
PDGF-GERICHTETE
MIGRATION
VON
OPC
.
37
4.2.2
DIE
CHEMOKINESE
WIRD
DURCH
BMM
NICHT
BEEINFLUSST
.
38
4.2.3
DIE
BEHANDLUNG
VON
OPC
MIT
MIFN-Y-UEBERSTAND
IST
MIT
DER
REGULATION
DER
EXPRESSION
MIGRATIONSASSOZIIERTER
GENE
VERBUNDEN
.
40
4.2.4
DIE
PROLIFERATION
VON
OPC
SCHEINT
DURCH
MAKROPHAGENUEBERSTAENDE
NICHT
BEEINFLUSST
ZU
WERDEN
.
41
4.3
ESDM
.42
4.3.1
AKTIVIERTE
MIKROGLIA
HABEN
KEINEN
EFFEKT
AUF
DIE
MIGRATION
VON
OPC
.
43
4.3.2
DIE
PROLIFERATION
VON
OPC
WURDE
DURCH
DIE
BEHANDLUNG
MIT
UEBERSTAENDEN
AKTIVIERTER
MIKROGLIA
NICHT
BEEINFLUSST
.
44
5
DISKUSSION
.
46
6
LITERATURVERZEICHNIS
.
55
7
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
.
67
8
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
.69
9
TABELLENVERZEICHNIS
.
72
10
LEBENSLAUF
.
73
11
DANKSAGUNG
.
74
12
ANHANG
.
I
12.1
AUSWIRKUNG
VON
IFN-Y
AUF
DIE
GERICHTETE
MIGRATION
VON
OPC
.
I
12.2
GENEHMIGUNG
TIERVERSUCH
AZ
84-02.05.2012.286
.
II
12.3
VERLAENGERUNG
TIERVERSUCH
AZ
84-02.05.2012.288
.
IV
12.4
GENEHMIGUNG
TIERVERSUCH
AZ
84-02.04.2013.
A029
.
V
12.5
VERLAENGERUNG
TIERVERSUCH
AZ
84-02.04.2013.
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