Clinical Cases in Right Heart Failure:
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Cham
Springer International Publishing
2020
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| Series: | Clinical Cases in Cardiology
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| Physical Description: | 1 Online-Ressource (X, 267 p. 52 illus., 46 illus. in color) |
| ISBN: | 9783030386627 |
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I
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V
ABBILDUNGSVERZEICHNIS_____________________________________________________________
WH
1 EINLEITUNG
_________________________________________________________________________
1
1.1 RET
UND
DIE
A
USPRAEGUNG
VO N
MTC 2
1.1.1 D
AS
HEREDITAERE
MEDULLAERE
S
CHILDDRUESENKARZINOM
2
1.1.2 D
AS
RET-P
ROTOONKOGEN
4
1.1.3 A
KTIVIERUNG
, M
UTATION
UND
S
IGNALTRANSDUKTION
VON
RET
5
1.2 MLKRORNAS 9
1.2.1 S
YNTHESE
KLEINER
RNA
S
UND
IHRE
F
UNKTION
9
1.2.2 B
EDEUTUNG
DER
M I
RNA
S
BEI
N
EOPLASIEN
11
1.3 Z
IELSETZUNG
12
2 MATERIAL UND
METHODEN_________________________________________________________ 14
2.1 M
ATERIAL
14
2.1.1 G
ERAETE
14
2.1.2 C
HEMIKALIEN
UND
E
NZYME
15
2.1.3 K
ITS
16
2.1.4 P
LASMIDE
17
2.1.5 A
DENOVIREN
18
2.1.6 B
AKTERIENSTAEMME
19
2.1.7 Z
ELLLINIEN
19
2.1.8 A
NTIKOERPER
20
2.1.9 OUGONUKLEOTIDE 21
2.1.10 O
NLINE
-D
ATENBANKEN
22
2.2 M
ETHODEN
22
2.2.1 DNA-A
RBEITSTECHNIKEN
22
2.2.1.1 ISOLIERUNG DER DNA 22
2.2.1.2 BESTIMMUNG DER DNA- BZW. RNA KONZENTRATION
2.2.1.3 RESTRIKTION VON DNA
2.2.1.4 AGAROSE-GELELEKTROPHORESE 23
2.2.1.5 ELUTION VON DNA AUS AGAROSEGELEN 23
2.2.1.6 POLYMERASE KETTENREAKTION (PCR) 24
2.2.1.7 QUANTITATIVE REAL-TIME PCR 26
2.2.1.8 LIGATION 27
2.2.1.9 TRANSFORMATION 27
2.2.1.10 PLASMID-MINIPRAEPARATION 28
2.2.1.11 PLASMID-MAXIPRAEPARATION 29
2.2.1.12 SEQUENZSPEZIFISCHE MUTAGENESE 29
2.2.2
RNA-A
RBEITSTECHNIKEN
30
2.2.2.1 RNA-EXTRAKTION AUS ZELLLYSAT 30
2.2.2.2 REVERSE TRANSKRIPTION 30
2.2.3
T
A Q
M
AN
REAL
-
TIM E
PCR
A
NALYSEN
VON
M ICRO
RNA
S
31
2.2.3.1 TAQMAN SMALL RNA ASSAY 31
2.2.3 2 TAQMAN MICRORNA ARRAY 32
2.2.4
P
ROTEIN
-A
RBEITSTECHNIKEN
34
2.2.4.1 GESAMTPROTEINEXTRAKTION AUS ZELLLYSAT 34
2.2.4.2 EXTRAKTION DER NUKLEAEREN PROTEINFRAKTION 34
2.2.4.3 BESTIMMUNG DER PROTEINKONZENTRATION NACH BRADFORD 35
2.2.4.4 SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE (SDS-PAGE) 35
2.2.4.5 WESTERN-BLOT UND IMMUNODETEKTION 36
22.4.6 CHROMATINIMMUNPRAEZIPITATION 37
2.2.5 Z
ELLBIOLOGISCHE
A
RBEITSTECHNIKEN
38
2.2.5.1 KULTIVIERUNG VON ZELLEN 38
2.2.5.2 ZELLZAHLBESTIMMUNG 38
2.2.5.3 HERSTELLUNG STABILER ZELLLINIEN MITTELS LENTIVIRALER
TRANSDUKTION 39
2.2.5.4 TRANSIENTE TRANSFEKTION VON PLASMID-DNA 39
2.2.5.5 INHIBITORBEHANDLUNG 39
2.2.6
F
UNKTIONSANALYSEN
39
2.2.6.1 LUZIFERASE-ASSAY 39
2.2.62 IMMUNOFLUORESZENZ-MIKROSKOPIE 40
2.2.63 PROLIFERATIONS- / XTT-ASSAY 41
2.2.6 4 INVASIONS- / BOYDEN-CHAMBER-ASSAY
2.2.7
A
DENOVIRALE
A
RBEITSTECHNIKEN
42
2.2.7.1 ANREICHERUNG DES ADENOVIRUS 42
2.2.7.2 TITER VERWENDETER VIREN 43
2.2.7 3 ADENOVIRALE INFEKTION VON ZELLEN 43
3
ERGEBNISSE________________________________________________________________________
44
3.1 I
DENTIFIZIERUNG
VO N
M I
R-182
ALS
DEREGULIERTE
M I
RNA
IM
M IC 44
3.2 R
EGULATION
VO N
M I
R-182
DURCH
RET
AKTIVIERTES
NF-
K
B 47
3.2.1
I
DENTIFIZIERUNG
VON
NF-
K
B
B
INDESTELLEN
A M
M I
R-182
P
ROMOTOR
47
3.2.2 RETM918T
FUEHRT ZUR TRANSLOKATION VON NF-KB IN DEN NUKLEUS UND ZUR EXPRESSION VON
MIR-182 50
3.3
M I
R-182
FOERDERT
I
NVASIVITAET
UN D
M
OTILITAET
IN
VITRO
52
3.4 C
HARAKTERISIERUNG
VO N
HES1
ALS
M I
R-182
REGULIERTES
Z
IELGEN
56
3.4.1
I
DENTIFIKATION
UND
V
ALIDIERUNG
VON
HES1
ALS
DIREKTES
Z
IELGEN
VON
M I
R-182 56
3.4.1.1 LN SILICO ANALYSEN ZUR IDENTIFIZIERUNG PUTATIVER MIR-182
ZIELGENE 56
3.4.1.2 VALIDIERUNG DER MIR-182- UND RET-ABHAENGIGEN HESL EXPRESSION IN
VITRO 58
3.4.1.3 NACHWEIS DER BINDUNG VON MIR-182 IN DER HESL 3 -UTR 59
3.4.2 U
NTERSUCHUNG
VON
HESL F
UNKTIONEN
IN
DER
T
UMORPROGRESSION
61
3.4.2.1 UEBERPRUEFUNG DER EFFIZIENZ DER EXPRESSIONS- UND
KNOCKDOWN-PLASMIDE VON HESL 61
3.4.2 2 EINFLUSS VON HESL AUF DIE PROLIFERATION 62
3 4.2.3 EINFLUSS VON HESL AUF DIE ZELLMOTILIAET 63
3.5 D
IE
A
USWIRKUNG
VO N
HESL
AUF
DEN
N
OTCH
I S
INALWEG
65
3.5.1
A
USWIRKUNGEN
DES
M I
R-182
VERMITTELTEN
HESL
V
ERLUSTS
AUF
N
OTCH
I
UND
D
TX
I
66
3.5.2 I
NHIBITION
DER
N
OTCH
I D
EGRADATION
FUEHRT
ZUR
HESL R
EGENERATION
70
3.5.3
E
INFLUSS
VON
NF-
K
B
AUF
DIE
T
RANSKRIPTION
VON
N
OTCH
I , D
TX
I
UND
HESL 71
4
DISKUSSION________________________________________________________________________
73
4.1 *O
N C O M I
R-182
VERMITTELT
DIE
A
GGRESSIVITAET
IM
MTC 73
4.2 D
IE
R
OLLE
VO N
HESL
UND
DER
V
ERLUST
DES
N
OTCH
I T
UMORSUPPRESSORWEGES
DURCH
M I
R-182 76
4.3 D
ER
C
ROSSTALK
VO N
NF-
K
B
UND
N
OTCH
I
DURCH
M I
R-182 A
KTIVIERUNG
79
5
ZUSAMMENFASSUNG_______________________________________________________________86
LITERATURVERZEICHNIS________________________________________________________________
87
ANHANG
102
DANKSAGUNG 112
SELBSTSTAENDIGKEITSERKLAERUNG 113
|
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CHILDDRUESENKARZINOM
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19
2.1.8 A
NTIKOERPER
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2.2.1.1 ISOLIERUNG DER DNA 22
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2.2.2.1 RNA-EXTRAKTION AUS ZELLLYSAT 30
2.2.2.2 REVERSE TRANSKRIPTION 30
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TIM E
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A
NALYSEN
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M ICRO
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-A
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A
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A
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M IC 44
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FUEHRT ZUR TRANSLOKATION VON NF-KB IN DEN NUKLEUS UND ZUR EXPRESSION VON
MIR-182 50
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V
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3.4.1.3 NACHWEIS DER BINDUNG VON MIR-182 IN DER HESL 3'-UTR 59
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NTERSUCHUNG
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HESL F
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IN
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T
UMORPROGRESSION
61
3.4.2.1 UEBERPRUEFUNG DER EFFIZIENZ DER EXPRESSIONS- UND
KNOCKDOWN-PLASMIDE VON HESL 61
3.4.2 2 EINFLUSS VON HESL AUF DIE PROLIFERATION 62
3 4.2.3 EINFLUSS VON HESL AUF DIE ZELLMOTILIAET 63
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RANSKRIPTION
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N
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