Holdings: Interaktionen zwischen Mastzellen und submukösen Neuronen unter Entzündungsbedingungen ex vivo und in vitro

Interaktionen zwischen Mastzellen und submukösen Neuronen unter Entzündungsbedingungen ex vivo und in vitro:

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Main Author:	Ballout, Jasmin (Author)
Format:	Thesis Book
Language:	German
Published:	Gießen, Lahn VVB Laufersweiler Verlag 2019
Series:	Edition Scientifique
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adam_text	INHALTSVERZEICHNIS INHALTSVERZEICHNIS ......................................................................................................... I 1. ABKUERZUNGSVERZEICHNIS .................................................................................. - 1 - 2. EINLEITUNG ......................................................................................................... - 5 - 2.1 DAS ENTERISCHE NERVENSYSTEM ..................................................................... - 5 - 2.2 AUFBAU UND FUNKTION DES DARMEPITHELS .................................................... - 7 - 2.3 INTESTINALE MASTZELLEN: MORPHOLOGIE, FUNKTION UND IHRE ROLLE BEI UEBEREMPFINDLICHKEITSREAKTIONEN ............................................................... - 12 - 2.4 MASTZELL-NEURON-INTERAKTIONEN ...................................................................... - 16- 2.5 PROBLEMATIK BEI CHRONISCHEN DARMENTZUENDUNGEN IM HINBLICK AUF MASTZELL-NEURON-INTERAKTIONEN ................................................................ - 19 - 2.6 FRAGESTELLUNG DER DISSERTATION .................................................................. - 25 - 3. MATERIAL UND METHODEN ............................................................................... - 26 - 3.1 VERSUCHSTIERE ............................................................................................ -26- 3.2 TIERMODELL ZUR SENSIBILISIERUNG UND KOLITIS-INDUKTION ........................... - 26 - 3.3 LOESUNGEN .................................................................................................. -28- 3.3.1 LOESUNGEN FUER DIE USSING-KAMMER .................................................... - 28 - 3.3.2 LOESUNGEN FUER DAS CA 2+ -IMAGING ........................................................ - 28 - 3.3.3 LOESUNGEN FUER DIE ZELLKULTUR .............................................................. - 29 - 3.3.4 LOESUNGEN FUER DIE INDIREKTE IMMUNFLUORESZENZ ................................. - 30 - 3.3.5 LOESUNGEN FUER DEN WESTERN BLOT ........................................................ - 32 - 3.4 SUBSTANZEN ................................................................................................. - 33 - 3.5 BESCHICHTUNG DER GLASPLAETTCHEN ................................................................ - 34 - 3.6 PRAEPARATION ............................................................................................... - 34 - I 3.6.1 PRAEPARATION FUER DIE USSING-KAMMER ................................................ - 34 - 3.6.2 HERSTELLUNG EINES SOGENANNTEN STUFENPRAEPARATES ....... ................. - 35 - 3.6.3 PRAEPARATION FUER DAS CA 2+ -IMAGING .................................................... - 36 - 3.7 ZELLKULTUR .................................................................................................. -37- 3.7.1 PRIMAERE KULTIVIERUNG SUBMUKOESER NEURONE ................................... - 37 - 3.7.2 KULTIVIERUNG DER RBL-2H3 ............................................................. - 38 - 3.7.3 COKULTUR AUS ISOLIERTEN SUBMUKOESEN NEURONEN UND RBL-2H3 ....... - 39 - 3.7.4 COKULTUR AUS INTAKTER SUBMUKOSA UND RBL-2H3 ........................... - 40 - 3.8 USSING-KAMMER ....................................................................................... - 41 - 3.8.1 PRINZIP ............................................................................................. -41- 3.8.2 AUFBAU ............................................................................................. - 43 - 3.8.3 VERSUCHSDURCHFUEHRUNG .................................................................... - 44 - 3.8.4 MESSUNG DER PARAZELLULAEREN PERMEABILITAET MITTELS FLUORESCEIN ....... - 46 - 3.9 CA 2+ -IMAGING ............................................................................................ - 47 - 3.9.1 THEORIE DES CA 2+ -IMAGING ............................................................... - 47 - 3.9.2 FURA-2 ............................................................................................... - 48 - 3.9.3 MESSSTAND ......................................................................................... -50- 3.9.4 MESSKAMMER UND HALTERUNG FUER DIE ELEKTRISCHE FELDSTIMULATION .... -51 - 3.9.5 DURCHFUEHRUNG ................................................................................... - 52 - 3.9.6 ELEKTRISCHE FELDSTIMULATION (EFS) ................................................... - 54 - 3.10 INDIREKTE IMMUNFLUORESZENZ .................................................................... - 55 - 3.10.1 GRUNDLAGEN ....................................................................................... -55- 3.10.2 VERWENDETE ANTIKOERPER .................................................................... - 56 - 3.10.3 HERSTELLUNG DER GEWEBEBLOECKCHEN .................................................. - 58 - II 3.10.4 HERSTELLUNG DER SCHNITTE ................................................................... - 59 - 3.10.5 PROTOKOLL FUER DIE INDIREKTE IMMUNFLUORESZENZ VON GEWEBEN .......... - 59 - 3.10.6 PROTOKOLL FUER DIE INDIREKTE IMMUNFLUORESZENZ VON ZELLEN ............... - 60 - 3.10.7 MIKROSKOPIE .................................................................................... -60- 3.11 TOLUIDINBLAU-FAERBUNG ............................................................................. -63- 3.11.1 PRINZIP .............................................................................................. -63- 3.11.2 DURCHFUEHRUNG DER FAERBUNG ............................................................... - 63 - 3.12 WESTERN BLOT ............................................................................................ -64- 3.12.1 GRUNDLAGEN ....................................................................................... -64- 3.12.2 PROTEINEXTRAKTION .............................................................................. -65- 3.12.3 DURCHFUEHRUNG DES WESTERN BLOTS ..................................................... - 65 - 3.12.4 AUSWERTUNG UND ERGEBNISSE DES WESTERN BLOTS .............................. - 67 - 3.13 QUANTITATIVE ECHTZEIT-POLYMERASE-KETTENREAKTION (QPCR) ..................... - 68 - 3.13.1 PRINZIP DER QPCR ............................................................................. - 68 - 3.13.2 ISOLATION DER RNA ........................................................................... - 70 - 3.13.3 BESTIMMUNG DER RNA-INTEGRITAET MITTELS GELELEKTROPHORESE ............ - 70 - 3.13.4 CDNA-SYNTHESE ............................................................................... -72- 3.13.5 BESTIMMUNG DER REFERENZGENE UND NORMALISIERUNG ....................... -73 - 3.13.6 DURCHFUEHRUNG DER QPCR ................................................................. - 74 - 3.13.7 AUSWERTUNG DER QPCR-ERGEBNISSE .................................................. - 75 - 4. STATISTIK ........................................................................................................ - 77 - 5. ERGEBNISSE .................................................................................................... - 78 - 5.1 INDUKTION EINER SENSIBILISIERUNG UND KOLITIS IM TIERMODELL .................. - 78 - III 5.2 SENSIBILISIERUNG UND KOLITIS BEEINFLUSSEN DIE ANIONENSEKRETION UND EPITHELIALE PERMEABILITAET .......................................................................... - 79 - 5.3 DETEKTION VON MASTZELLEN ....................................................................... - 85 - 5.4 SEGMENTABHAENGIGE UNTERSCHIEDE IN DER MASTZELLANZAHL ......................... - 85 - 5.5 GEAENDERTE EPITHELIALE BARRIEREFUNKTION ................................................... - 87 - 5.6 GENEXPRESSIONSLEVEL VON MASTZELLPROTEASEN UND CLAUDINEN ................... - 91 - 5.7 DER EINFLUSS VON PROINFLAMMATORISCHEN ZYTOKINEN AUF SEKRETION UND PERMEABILITAET IM DISTALEN KOLON .............................................................. - 94 - 5.8 DER EFFEKT DES ZYTOKIN-COCKTAILS AUF DIE INTESTINALE SEKRETION UND PERMEABILITAET ............................................................................................ - 99 - 5.9 DIE ANTWORT SUBMUKOESER NEURONE AUF MASTZELLMEDIATOREN WIRD DURCH ZYTOKINE MODULIERT ....................................................................... - 102 - 5.10 DER ZYTOKINMIX INDUZIERT APOPTOSE IN RBL-2H3 ................................. - 106 - 5.11 DIE MASTZELL-VERMITTELTE ANIONENSEKRETION WIRD DURCH NEUROTRANSMITTER VERAENDERT ................................................................... - 107 - 5.12 DIE WIRKUNG VON AGONISTEN AUF DIE BASALE ZYTOSOLISCHE CA 2+ -KONZENTRATION IN RBL-2H3 .......................................................... -111- 5.13 EINE AKTIVIERUNG VON REZEPTOREN FUER NEUROTRANSMITTER MODIFIZIERT DIE RBL-2H3-ANTWORT AUF COMPOUND 48/80 ....................................... - 113 - 6. DISKUSSION .................................................................................................. -117- 6.1 METHODISCHE BETRACHTUNGEN .................................................................. - 117- 6.1.1 DAS KOLITISMODELL .......................................................................... - 117- 6.1.2 HETEROGENITAET VON MASTZELLEN ....................................................... -118- 6.2 DIE INTESTINALE EPITHELBARRIERE: AUFBAU UND VERAENDERUNGEN UNTER ENTZUENDUNGSBEDINGUNGEN ..................................................................... - 120 - 6.3 AENDERUNG DER EPITHELIALEN SEKRETION UNTER ENTZUENDUNGSBEDINGUNGEN ...- 126 - IV 6.3.1 EINFLUSS AUF DIE BASALE SEKRETION ................................................... - 126 - 6.3.2 INTERAKTION MIT SEKRETAGOGA ........................................................... - 128 - 6.4 MASTZELLDICHTE UND MASTZELL-VERMITTELTE SEKRETIONSPROZESSE AM DARMEPITHEL UNTER ENTZUENDUNGSBEDINGUNGEN ........................................ - 130 - 6.5 DER EFFEKT VON NEUROTRANSMITTERN AUF DIE MASTZELLFUNKTION UND DIE MASTZELL-VERMITTELTE SEKRETION .............................................................. - 134 - 6.6 WIRKUNG PROINFLAMMATORISCHER ZYTOKINE AUF DIE MASTZELL-NEURON- INTERAKTIONEN .......................................................................................... - 137 - 7. ZUSAMMENFASSUNG .................................................................................... - 140 - 8. SUMMARY .................................................................................................... - 142 - 9. VERZEICHNISSE .............................................................................................. -144- 9.1 ABBILDUNGSVERZEICHNIS .................................................... - 144- 9.2 TABELLENVERZEICHNIS ............................................................................... - 146 - 10. LITERATURVERZEICHNIS ................................................................................. - 147 - 11. EIGENE PUBLIKATIONEN ................................................................................ - 163 - 12. DANKSAGUNG ................................................................................................ -164- 13. 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