Die funktionale Rolle des mitochondrialen Abspaltungsproteins DRP1 im Podozyten in Physiologie und Pathologie:
Gespeichert in:
1. Verfasser: | |
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Format: | Abschlussarbeit Buch |
Sprache: | German |
Veröffentlicht: |
Freiburg im Breisgau
[2019]
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adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
IV
INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS.......................................................................................................
VII
1
EINLEITUNG..............................................................................................................................
1
1.1
DIE
NIERE
....................................................................................................................................................................
1
1.2
DIE
GLOMERULAERE
FILTRATIONSBARRIERE
.....................................................................................................................
2
1.3
DIE
ROLLE
DER
MITOCHONDRIEN
IM
PODOZYTEN
........................................................................................................
7
1.4
MITOCHONDRIEN
-
NUR
KRAFTWERKE
DER
ZELLE?
.....................................................................................................
10
1.5
DIE
MITOCHONDRIALE
DYNAMIK
...............................................................................................................................
10
1.6
ZIEL
UND
FRAGESTELLUNG
DIESER
ARBEIT
..................................................................................................................20
2
MATERIAL...............................................................................................................................
21
2.1
VERBRAUCHSMATERIALIEN
.........................................................................................................................................
21
2.2
CHEMIKALIEN
............................................................................................................................................................
22
2.3
REAGENZIEN
..............................................................................................................................................................
23
2.4
LOESUNGEN
.................................................................................................................................................................
24
2.5
ANTIKOERPER
..............................................................................................................................................................
27
2.6
PCR-PRIMER
............................................................................................................................................................
28
2.7
GERAETE
UND
SOFTWARES
...........................................................................................................................................
28
3
METHODEN
............................................................................................................................
30
3.1
ZELLKULTURSTUDIEN
...................................................................................................................................................
30
3.1.1
ZELLLINIE
............................................................................................................................................................
30
3.1.2
ZELLERHALT
.........................................................................................................................................................
30
3.1.3
ZELLBEHANDLUNG
...............................................................................................................................................
31
3.2
VERSUCHSTIERE
.........................................................................................................................................................
32
3.2.1
TIERHALTUNG
.....................................................................................................................................................
32
INHALTSVERZEICHNIS
V
3.2.2
GENERIERUNG
EINES
KONDITIONALEN
KNOCKOUT-MAXISMODEWS
...........................................................................
32
3.2.3
MAUSLINIEN
........................................................................................................................................................
33
3.2.4
GENOTYPISIERUNG
...............................................................................................................................................
35
3.3
MAUSPHYSIOLOGIE
....................................................................................................................................................
37
3.3.1
URINGEWINNUNG
................................................................................................................................................
37
3.3.2
ALBUMINBESTIMMUNG
IM
URIN
........................................................................................................................
37
3.3.3
KREATININBESTIMMUNG
IM
URIN
.......................................................................................................................
38
3.3.4
GEWICHTSBESTIMMUNG
......................................................................................................................................
39
3.4
WESTERN-BLOT
...........................................................................................................................................................
40
3.4.1
HERSTELLUNG
VON
PROTEINLYSATEN
AUS
ISOLIERTEN
GLOMERULI
.............................................................................
40
3.4.2
PROTEINEMTE
AUS
ZELLEN
UND
HERSTELLUNG
VON
ZELLLYSATEN
............................................................................42
3.4.3
ISOLIERUNG
DER
MITOCHONDRIALEN
ZELLFRAKTION
.................................................................................................
42
3.4.4
PROTEINBESTIMMUNG
NACH
LOWRY
....................................................................................................................
43
3.4.5
SDS-PAGE
UND
WESTERN-BLOT
.......................................................................................................................
45
3.5
MIKROSKOPIE
............................................................................................................................................................
47
3.5.1
PRAEPARATION
UND
FIXATION
DER
NIEREN
..............................................................................................................
47
3.5.2
IMMUNFLUORESZENZFAERBUNG
AN
KRYOSCHNITTEN
................................................................................................
48
3.5.3
ZELLIMMUNFLUORESZENZFARBUNG
.......................................................................................................................
48
3.5.4
PERIODIC
ACID
SCHIFF
(PAS)-FAERBUNG
.............................................................................................................
49
3.5.5
SAEURE-FUCHSIN-ORANGE-G(SFOG)-FAERBUNG
...................................................................................................
50
3.5.6
TRANSMISSIONSELEKTRONENMIKROSKOPIE
(TEM)
...............................................................................................
50
3.6
STRESSMODELLE
IN
VIVO
..............................................................................................................................................
50
3.6.1
ADRIAMYCIN-INDUZIERTE
NEPHROPATHIE
............................................................................................................
50
3.6.2
STREPTOZOTOCIN(STZ)-INDUZIERTER
TYP
I
DIABETES
..........................................................................................
51
3.7
STATISTISCHE
DATENANALYSE
...............................
51
4
ERGEBNISSE.........................................................................................................................
52
4.1
FUNKTIONALE
BEDEUTUNG
VON
DRP1
IN
VITRO
........................................................................................................
52
4.1.1
OXIDATIVER
STRESS
.............................................................................................................................................
52
4.1.2
CHRONISCHE
HYPERGLYKAEMIE
............................................................................................................................
57
4.1.3
ANGIOTENSIN
II(ATII)-INDUZIERTES
STRESSMODELL
.............................................................................................
58
4.1.4
ADRIAMYCIN-INDUZIERTES
STRESSMODELL
............................................................................................................
64
4.2
GENERIERUNG
EINES
PODOZYTENSPEZIFISCHEN
DRPL-KNOCFA UT-MAUSMODE S
....................................................
67
4.2.1
NACHWEIS
DER
ERFOLGREICHEN
DELETION
VON
DRPL
IM
PODOZYTEN
...................................................................
68
4.2.2
PHYSIOLOGISCHE
DATEN
......................................................................................................................................
70
4.2.3
HISTOLOGIE
........................................................................................................................................................
72
INHALTSVERZEICHNIS
VI
4.2.4
UNTERSUCHUNG
PODOZYTENSPEZIFISCHER
MARKER
...............................................................................................
73
4.2.5
UNTERSUCHUNG
DER
PODOZYTAEREN
AUTOPHAGIE
..................................................................................................
75
4.2.6
TRANSMISSIONSELEKTRONENMIKROSKOPIE
(TEM)
...............................................................................................
77
4.3
FUNKTIONALE
BEDEUTUNG
VON
DRPL
IN
GLOMERULAEREN
KRANKHEITSBILDERN
....................................................
79
4.3.1
ADRIAMYCIN-INDUZIERTE
NEPHROPATHIE
............................................................................................................
79
4.3.2
DIABETISCHE
NEPHROPATHIE
...............................................................................................................................
83
5
DISKUSSION
...........................................................................................................................
89
6
ZUSAMMENFASSUNG
............................................................................................................
100
7
LITERATURVERZEICHNIS.........................................................................................................
101
8
PUBLIKATIONEN....................................................................................................................
119
8.1
ERKLAERUNG
ZUM
EIGENANTEIL
................................................................................................................................
120
9
ANHANG..............................................................................................................................
122
9.1
LEBENSLAUF.
............................................................................................................................................................
122
9.2
EIDESSTAATLICHE
VERSICHERUNG
.............................................................................................................................
123
9.3
DANKSAGUNG
..........................................................................................................................................................
124
|
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