Holdings: CXCR4 als therapeutisches Target zur Beeinflussung der Monozytenfunktionen im Schlaganfall

CXCR4 als therapeutisches Target zur Beeinflussung der Monozytenfunktionen im Schlaganfall:

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Main Author:	Werner, Yves 1987- (Author)
Format:	Thesis Book
Language:	German
Published:	Jena [2019?]
Subjects:	Schlaganfall Mikroglia Monozyt Zelle Hochschulschrift
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adam_text	INHALTSVERZEICHNIS ABKUERZUNGSVERZEICHNIS ................................................................................................................. IV 1 ZUSAMMENFASSUNG .................................................................................................................. 1 2 EINLEITUNG .................................................................................................................................. 4 2.1 DER ISCHAEMISCHE SCHLAGANFALL ...................................................................................... 4 2.1.1 EPIDEMIOLOGIE ................................................................................................................................ 4 2.1.2 RISIKOFAKTOREN UND PATHOPHYSIOLOGIE DES SCHLAGANFALLS ................................................................. 4 2.1.3 THERAPIE DES SCHLAGANFALLS ............................................................................................................. 5 2.1.4 BEDEUTUNG DER IMMUNANTWORT NACH EINEM SCHLAGANFALL ............................................................... 6 2.2 MIKROGLIAZELLEN UND MONOZYTEN ................................................................................... 6 2.2.1 EINTEILUNG VON MIKROGLIAZELLEN UND MONOZYTEN UND DEREN PHYSIOLOGISCHE FUNKTIONEN ................. 7 2.2.1.1 MIKROGLIAZELLEN ...................................................................................................................... 7 2.2.1.2 MONOZYTEN ............................................................................................................................ 8 2.2.2 ONTOGENESE VON MIKROGLIAZELLEN UND MONOZYTEN .......................................................................... 8 2.2.3 MIKROGLIA UND MONOZYTEN BEI HIRNERKRANKUNGEN .......................................................................... 9 2.2.4 PROBLEMATIK DER UNTERSCHEIDUNG VON MONOZYTEN UND MIKROGLIAZELLEN BEI HIRNERKRANKUNGEN.... 11 2.2.4.1 MORPHOLOGIE ....................................................................................................................... 11 2.2.4.2 OBERFLAECHENMARKER FUER DURCHFLUSSZYTOMETRIE UND IMMUNHISTOCHEMIE ............................... 11 2.2.4.3 REPORTER .............................................................................................................................. 12 2.2.4.4 INVASIVE VERFAHREN .............................................................................................................. 13 2.3 CXCR4 UND SEIN LIGAND CXCL12 (SDF-1) ................................................................ 14 2.3.1 CHEMOKINE................................................................................................................................... 14 2.3.2 EXPRESSION VON CXCR4 UND CXCL12 .............................................................................................. 15 2.3.3 FUNKTION VON CXCR4 IN DER HAEMATOPOESE UND DER KLINISCHE EINSATZ DES CXCR4-ANTAGONISTEN AMD3100 ................................................................................................................................................... 16 2.3.4 CXCR4 ALS THERAPEUTISCHES TARGET ................................................................................................ 16 2.3.4.1 BEDEUTUNG VON CXCR4 IN DER BEHANDLUNG MALIGNER ERKRANKUNG......................................... 17 2.3.4.2 BEDEUTUNG VON CXCR4 IN DER BEHANDLUNG DES SCHLAGANFALLS ........................................... 17 3 ZIELSETZUNG DER ARBEIT .......................................................................................................... 20 4 MATERIAL UND METHODIK ......................................................................................................... 22 4.1 MATERIAL .................................................................................................................................22 4.1.1 GERAETE UND VERBRAUCHSMATERIALIEN .............................................................................................. 22 4.1.2 ANTIKOERPER .................................................................................................................................... 24 4.1.3 CHEMIKALIEN .................................................................................................................................. 27 4.1.4 PUFFER UND LOESUNGEN ..................................................................................................................... 30 4.1.5 TIERARZNEIMITTEL ............................................................................................................................ 33 4.1.6 SOFTWARE ....................................................................................................................................... 33 4.2 METHODIK ......................................................................................................................... 34 4.2.1 MAEUSE ........................................................................................................................................ 34 4.2.1.1 TIERVERSUCHSGENEHMIGUNG ................................................................................................... 34 4.2.1.2 MAUSMODELLE ....................................................................................................................... 34 4.2.1.3 HALTUNG ................................................................................................................................. 37 4.2.1.4 TAMOXIFEN (TAM) BEHANDLUNG ............................................................................................. 37 4.2.1.5 ANALGESIE/NARKOSE ............................................................................................................... 38 4.2.2 EXPERIMENTELLE SCHLAGANFALLMODELLE UND NACHSORGE ................................................................... 38 4.2.2.1 PHOTOTHROMBOSE (PT) ........................................................................................................... 38 4.2.2.2 TRANSIENTE OKKLUSION DER MITTLEREN CEREBRALARTERIE (TMCAO) ............................................. 39 4.2.2.3 NACHSORGE DER TIERE ............................................................................................................. 39 4.2.3 IMMUNHISTOCHEMIE (INC) .............................................................................................................. 41 4.2.3.1 TRANSKARDIALE PERFUSION UND GEWEBE-LAGERUNG................................................................. 41 4.2.3.2 FREE-FLOATING METHODE ....................................................................................................... 41 4.2.4 IN-SITU-H YBRIDISIERUNG (ISH) .......................................................................................................... 42 4.2.4.1 HERSTELLUNG DER 35 S-RIBOSONDEN .......................................................................................... 42 4.2.4.2 PRAEHYBRIDISIERUNG/ HYBRIDISIERUNG/ DETEKTION .................................................................... 43 4.2.5 DURCHFLUSSZYTOMETRIE ................................................................................................................... 44 4.2.6 TRANSWELL-MIGRATION-ASSAY ............................................................................................................ 46 4.2.7 QUANTITATIVE- PCR (QPCR) .............................................................................................................. 47 4.2.8 AUSWERTUNG .................................................................................................................................. 47 4.2.8.1 IMMUNHISTOCHEMIE ............................................................................................................. 47 4.2.5.2 /N-S/TU-H YBRIDISIERUNG .......................................................................................................... 53 4.2.5.3 DURCHFLUSSZYTOMETRIE .......................................................................................................... 54 4.2.B.4 RNA-SEQUENZIERUNG/ AUSWERTUNG DURCH DIE AG VON PROF. DR. SCHULTZE ................................ 54 4.2.8.5 BLUTZELLZAEHLUNG ..................................................................................................................... 56 4.2.8.6 PRAESENTATION DER DATEN UND STATISTIKEN ............................................................................... 57 5 ERGEBNISSE ..............................................................................................................................58 5.1 PRAENATALE MIKROGLIAZELLEN SIND CXCR4-NEGATIV UND BESIEDELN DAS EMBRYONALE GEHIRN UNABHAENGIG VON CXCL12 .................................................................... 58 5.2 CXCR4-EXPRESSION UNTERSCHEIDET MONOZYTEN VON MIKROGLIAZELLEN ................... 60 5.3 CXCR4-GFP IDENTIFIZIERT EINGEWANDERTE MONOZYTEN NACH EXPERIMENTELLEM SCHLAGANFALL ............................................................................................... 62 5.4 DAS CXCR4-CREER-MAUSMODELL ERMOEGLICHT EINE EFFIZIENTE UND LANGFRISTIGE MARKIERUNG MYELOIDER ZELLEN ................................................................................................. 66 5.4.1 FATE-MAPPING ALS NEUE STRATEGIE ZUR DARSTELLUNG VON MONOZYTEN IM GEHIRN ............................. 66 5.4.2 CHARAKTERISIERUNG DES CXCR4 CREER(T2HRES EGFP -KNOC/C/N-ALLELS ............................................................ 68 5.5 VERFOLGUNG VON MONOZYTEN IM EXPERIMENTELLEN SCHLAGANFALL MIT HILFE DES CXCR4 CREER(T2, ,RES *EGFP -MAUSMODELLS ........................................................................................ 71 5.5.1 CHARAKTERISIERUNG DES MAUSMODELLS IM SCHLAGANFALL ................................................................... 71 5.5.2 MONOZYTEN SIND IM SCHLAGANFALL FUENFFACH WENIGER TEILUNGSAKTIV ALS MIKROGLIAZELLEN .................. 72 5.5.3 MONOZYTEN INTEGRIEREN SICH NICHT LANGFRISTIG IM INTAKTEN HIRNGEWEBE ....................................... 74 5.6 MIKROGLIAZELLEN UND EINGEWANDERTE MONOZYTEN HABEN UNTERSCHIEDLICHE TRANSKRIPTIONSPROFILE NACH EINEM EXPERIMENTELLEN SCHLAGANFALL ................................... 77 5.7 CXCR4-KNOCKOUT GEHT MIT REDUZIERTER MONOZYTENINFILTRATION EINHER ................ 82 5.7.1 INDUZIERBARE KONDITIONALE DELETION VON CXCR4 UND NACHVERFOLGUNG CXCR4- DEFIZIENTER MONOZYTEN IM CXCR4 CREER/LOXP ; /?26 CAGLSLTDT -MODELL ........................................................................................................ 82 5.7.2 CHARAKTERISIERUNG DES CXCR4 CREER/LOXP ; R26 CAG LSL TDT -KNOCKOUT-MODELLS ......................................... 84 5.7.3 UNTERSUCHUNG DES KONDITIONALEN CXCR4-KNOCKOUTS IM PERMANENTEN SCHLAGANFALLMODELL (PHOTOTHROMBOSE) ..................................................................................................................................... 86 5.7.3.1 REDUZIERTE MONOZYTENINFILTRATION ...................................................................................... 86 5.73.2 REDUZIERTE TEILUNGSAKTIVITAET VON MIKROGLIAZELLEN ............................................................... 87 6 DISKUSSION .............................................................................................................................. 91 6.1 CXCR4-GFP UNTERSCHEIDET EINDEUTIG MONOZYTEN VON MIKROGLIAZELLEN ............. 91 6.1.1 UNTERSCHIEDLICHE FUNKTIONEN VON MONOZYTEN UND MIKROGLIA IM SCHLAGANFALL .............................. 92 6.2 DAS CXCR4 CREER ;/?26 CAG LSL TDT -MODELL BIETET EINE NEUE UNIVERSELLE STRATEGIE ZUR DAUERHAFTEN MARKIERUNG UND VERFOLGUNG VON MONOZYTEN ........................................ 93 6.2.1 ERSTMALIGE CHARAKTERISIERUNG DER MONOZYTENINFILTRATION IM SCHLAGANFALL MIT HILFE EINES MONOZYTEN-SPEZIFISCHEN REPORTERS UND MITTELS FATE-MAPPING ................................................................. 95 6.3 DER SYSTEMISCHE CXCR4-KNOCKOUT MIT EINEM GENETISCHEN MAUSMODELL: IST CXCR4 EIN GEEIGNETES THERAPEUTISCHES TARGET IM SCHLAGANFALL? .................................. 96 6.3.1 ETABLIERUNG EINES KONDITIONALEN CXCR4-KNOCKOUTS MIT NACHVERFOLGBAREN MONOZYTEN ................. 96 6.3.2 DIE AUSWIRKUNGEN DES CXCR4-KNOCKOUTS IM PERMANENTEN SCHLAGANFALL....................................... 97 6.3.3 DIE AUSWIRKUNGEN DES CXCR4-KNOCKOUTS IM REPERFUNDIERTEN SCHLAGANFALL................................... 98 6.3.4 CXCR4/ CXCL12 HAT KEINE FUNKTION BEI EMBRYONALEN MIKROGLIA-ENTWICKLUNG ........................... 100 7 SCHLUSSFOLGERUNGEN ............................................................................................................102 O 0 O O O IN K A IQ 8 LITERATUR- UND QUELLENVERZEICHNIS ................................................................................... 104 9 ANHANG ...................................................................................................................................... VI STATISTIKEN ....................................................................................................................... VI FREMDDATEN UND METHODISCHE UNTERSTUETZUNG ........................................................ XII ROHDATEN DER RNA-SEQUENZIERUNG ...........................................................................XII LEBENSLAUF ..................................................................................................................... XIII EHRENWOERTLICHE ERKLAERUNG ......................................................................................... XIV DANKSAGUNG ................................................................................................................... XV WISSENSCHAFTLICHE BEITRAEGE ...................................................................................... XVI
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