Untersuchungen zur Rolle der Bcl-2-Expression in felinen follikulären Lymphomen:
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| Main Author: | |
|---|---|
| Format: | Thesis Book |
| Language: | German |
| Published: |
Giessen
VVB Laufersweiler Verlag
2018
|
| Edition: | 1. Auflage |
| Series: | Edition scientifique
|
| Subjects: | |
| Online Access: | Inhaltsverzeichnis Inhaltsverzeichnis |
| Physical Description: | VI, 179 Seiten Illustrationen, Diagramme |
| ISBN: | 9783835967441 3835967444 |
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INLEITUNG..............................................................................................................................................1
2
LITERATURUEBERSICHT.............................................................................................................................
2
2.1 BCL-2 (B-CELL-LEUKEMIA/LYMPHOMA
2).........................................................................................2
2.1.1 DAS
BCL-2-GEN.......................................................................................................................
2
2.1.2 DIE
BCL-2-PROTEINFAMILIE........................................................................................................2
2.1.2.1 AUFBAU, STRUKTUR UND INTERAKTIONEN DER
BCL-2-PROTEINFAMILIE........................................3
2.1.2.2 AUFBAU, STRUKTUR UND ZELLULAERE LOKALISATION DES BCL-2-PROTEINS
....................................
3
2.1.2.2.1 IMMUNHISTOLOGISCHER NACHWEIS DES
BCL-2-PROTEINS.................................................4
2.1.2.2.1.1 EXPRESSION IN NICHT-LYMPHATISCHEN
GEWEBEN...................................................5
2.1.2.2.1.2 EXPRESSION IN NORMALEN UND/ODER REAKTIVEN LYMPHATISCHEN
GEWEBEN
............
5
2.2
APOPTOSE........................................................................................................................................
5
2.2.1 DIE ROLLE DES BEL-2-PROTEINS BEI DER
APOPTOSE...................................................................6
2.3 DAS BCL-2-PROTEIN UND SEINE ROLLE BEI DER TUM
ORTHERAPIE...................................................8
2.4 DAS FOLLIKULAERE LYMPHOM (F L
).................................................................................................
9
2.4.1 BEGRIFFSABGRENZUNG DER B-ZELL-NEOPLASIEN MIT FOLLIKULAEREM
WACHSTUMSMUSTER
.............
9
2.4.2 ANGEWENDETE HISTOLOGISCHE KLASSIFIKATIONSSCHEMATA
......................................................
11
2.4.3 FOLLIKULAERES LYMPHOM DES
MENSCHEN................................................................................12
2.4.3.1 HISTOLOGIE DES FOLLIKULAEREN LYMPHOMS NACH DER WHO-KLASSIFIKATION
DER TUMOREN DER HAEMATOPOETISCHEN UND LYMPHATISCHEN GEWEBE DES MENSCHEN
(SWERDLOW ET AL.,
2008)....................................................................................................
12
2.4.3.1.1 GRADING NACH DER WHO-KLASSIFIKATION
DER TUMOREN DER HAEMATOPOETISCHEN UND LYMPHATISCHEN GEWEBE
DES MENSCHEN (SWERDLOW ET AL., 2008)
..................................................................
13
2.4.3.1.2 BESTIMMUNG DES WACHSTUMSMUSTERS NACH DER WHO-KLASSIFIKATION
DER TUMOREN DER HAEMATOPOETISCHEN UND LYMPHATISCHEN GEWEBE
DES MENSCHEN (SWERDLOW ET AL., 2008)
..................................................................
14
2.4.3.2 ZYTOGENETISCHE
BESONDERHEIT...........................................................................................14
2.4.3.3
PATHOGENESE.....................................................................................................................
15
2.4.3.4 BCL-2-EXPRESSION IN FOLLIKULAEREN LYMPHOMEN DES MENSCHEN
....................................
16
2.4.3.5
EPIDEMIOLOGIE..................................................................................................................
17
2.4.4 FOLLIKULAERES LYMPHOM DER
KATZE.......................................................................................17
2.4.5 HISTOLOGISCHE
DIFFERENTIALDIAGNOSEN..................................................................................18
2.4.5.1 FOLLIKULAERE HYPERPLASIE (FH
)..........................................................................................18
2.4.6 KLINISCHE
RELEVANZ..............................................................................................................20
2.4.6.1 DIAGNOSE VON (FOLLIKULAEREN)
LYMPHOMEN......................................................................20
2.4.6.2 BESTIMMUNG DES TUMORSTADIUMS (STAGING)
..................................................................
21
2.4.6.2.1 M
ENSCH......................................................................................................................
21
2A6.2.2
KATZE..........................................................................................................................
21
2.4.6.3
PROGNOSE...........................................................................................................................
21
2.4.6.3.1
MENSCH......................................................................................................................
21
2.4.6.3.2
KATZE..........................................................................................................................22
2.5 LYMPHOM-ASSOZIIERTE V IRE N
.....................................................................................................23
2.5.1 EPIDEMIOLOGIE FELV-ASSOZIIERTER LYMPHOME
..................................................................
23
2.6 MOLEKULARBIOLOGISCHE U
NTERSUCHUNGEN..................................................................................24
2.6.1
KLONALITAETSDIAGNOSTIK...........................................................................................................24
2.6.1.1 KLONALITAETSDIAGNOSTIK BEI B-ZELL-LYMPHOMEN
.............................................................
25
2.6.1.1.1 SOMATISCHE HYPERMUTATION (SHM
).........................................................................
25
3 M A TERIAL U N D M E TH O D EN
.................................................................................................................27
3.1 UNTERSUCHUNGSM
ATERIAL.............................................................................................................
27
3.1.1 FELINE
GEWEBEPROBEN..........................................................................................................27
3.1.1.1 FIXIERUNG DER
GEWEBEPROBEN.........................................................................................28
3.1.1.2 BEARBEITUNG DES FORMALINFIXIERTEN MATERIALS FUER DIE
HISTOLOGISCHE UND
IMMUNHISTOLOGISCHE UNTERSUCHUNG
..................................................................................
28
3.1.2 HUMANE
GEWEBEPROBEN.....................................................................................................
29
3.2 HISTOLOGISCHE BEURTEILUNG ANHAND DES
HAEMATOXYLIN-EOSIN-GEWEBESCHNITTES
................
29
3.2.1 BESTIMMUNG DES TUMORGRADES
(GRADING).........................................................................
30
3.2.2 BESTIMMUNG DES
WACHSTUMSMUSTERS.................................................................................30
3.3 IM
MUNHISTOLOGIE.........................................................................................................................30
3.3.1 SEREN UND
ANTISEREN............................................................................................................30
3.3.1.1
SEREN..................................................................................................................................30
3.3.1.2
ANTISEREN..........................................................................................................................
31
3.3.1.2.1
PRIMAERANTIKOERPER........................................................................................................31
3.3.1.2.2
SEKUNDAERANTIKOERPER...................................................................................................
33
3.3.1.2.3
TERTIAERANTIKOERPER........................................................................................................33
3.3.2 IMMUNHISTOLOGISCHE
KONTROLLEN.........................................................................................33
3.3.2.1
NEGATIVKONTROLLEN.............................................................................................................33
3.3.2.2
POSITIVKONTROLLEN..............................................................................................................
34
3.3.3 VORBEREITUNG DER GEWEBESCHNITTE FUER DIE IMMUNHISTOLOGIE
...........................................
34
3.3.4 ANGEWENDETE IMMUNHISTOLOGISCHE
PROTOKOLLE..................................................................35
3.3.4.1 NACHWEIS VON CD45R
(PAN-B-ZELL-MARKER)..................................................................35
3.3.4.2 NACHWEIS VON CD3
(PAN-T-ZELL-MARKER).......................................................................37
3.3.4.3 NACHWEIS VON GP70- UND P27-ANTIGEN ZUR FELV-DIAGNOSTIK
......................................
37
3.3.4.4 NACHWEIS DES BCL-2-PROTEINS MITTELS MONOKLONALEM ANTIKOERPER
................................
38
3.3.4.5 IMMUNHISTOLOGISCHE
DOPPELMARKIERUNGEN.....................................................................
38
3.3.4.5.1
BCL-2/CD45R-DOPPELMARKIERUNG...........................................................................
39
3.3.4.5.2
BCL-2/CD3-DOPPELMARKIERUNG................................................................................
39
3.3.4.6 ZUSAETZLICHE IMMUNHISTOLOGISCHE
FAERBUNGEN..................................................................40
3.3.5 AUSWERTUNG DER IMMUNHISTOLOGISCHEN
UNTERSUCHUNGEN..................................................40
3.4 KLINISCHE DATEN ZU DEN
FAELLEN.................................................................................................
40
3.4.1 AUSWERTUNG DER KLINISCHEN D
ATEN......................................................................................41
3.5 MOLEKULARBIOLOGISCHE UNTERSUCHUNGEN
........................................................................
42
3.5.1 DNS-ISOLIERUNG AUS FFPE-MATERIAL
..................................................................................
42
3.5.1.1 BEARBEITUNG DER PARAFFINBLOECKE FUER DIE DNS-EXTRAKTION
.............................................
42
3.5.1.2 DNS-EXTRAKTION MITTELS QIAMP DNA FFPE TISSUE KIT
............................................
42
3.5.1.2.1 PRINZIP DER DNS-EXTRAKTION MITTELS QIAMP DNA FFPE TISSUE K IT
................
42
3.5.1.2.2 DURCHFUEHRUNG DER DNS-EXTRAKTION MITTELS QIAMP DNA FFPE TISSUE
K IT 43
3.5.2 MESSUNG DER
DNS-KONZENTRATION......................................................................................45
3.5.3 AMPLIFIKATION DER D N
S......................................................................................................
45
3.5.3.1 V ERWENDETES
PRIMERSYSTEM.............................................................................................45
3.5.3.2 DNS-AMPLIFIKATION MITTELS POLYMERASE-KETTEN-REAKTION (PCR)
................................
46
3.5.3.2.1 KONTROLLE DER AMPLIFIKATION MITTELS
HORIZONTALGELELEKTROPHORESE
......................
47
3.5.3.2.2 UEBERPRUEFUNG DER DNS-AMPLIFIZIERBARKEIT
.............................................................
47
3.5.4 UEBERPRUEFUNG DER
DNS-QUALITAET..........................................................................................49
3.5.5 KAPILLARELEKTROPHORETISCHE AUFTRENNUNG DER PCR-AMPLIFIKATE MITTELS
ABI PRISM 310 GENETIC
ANALYZERS...................................................................................
49
3.5.5.1 VORBEREITUNGEN DER PROBEN FUER DIE KAPILLARELEKTROPHORESE
..........................................
49
3.5.5.2 DURCHFUEHRUNG DER KAPILLARELEKTROPHORESE MITTELS
ABI PRISM 310 GENETIC
ANALYZER....................................................................................50
3.5.5.3 AUSWERTUNG DER ERGEBNISSE DER
FRAGMENTANALYSE.........................................................
52
4 E
RGEBNISSE..........................................................................................................................................53
4.1 ALTERS-, RASSE- UND GESCHLECHTERVERTEILUNG DER
KATZEN.....................................................53
4.2 HISTOMORPHOLOGISCHE CHARAKTERISIERUNG DER GEWEBESCHNITTE
..........................................
54
4.2.1 BEURTEILUNG DER HAEMATOXYLIN-EOSIN-GEFARBTEN
GEWEBESCHNITTE......................................54
4.2.1.1 FELINE
GEWEBEPROBEN.......................................................................................................54
4.2.1.1.1 FOLLIKULAERE
LYMPHOME.............................................................................................54
4.2.1.1.1.1 BESTIMMUNG DER TUMORGRADE NACH DER WHO-KLASSIFIKATION DER
HAEMATOPOETISCHEN TUMOREN DER HAUSTIERE (VALLI ET AL., 2002)
.......................
55
4.2.1.1.1.2 BESTIMMUNG DER
WACHSTUMSMUSTER...............................................................
56
4.2.1.1.2 UNKLARE
FAELLE.............................................................................................................57
4.2.1.1.3 FOLLIKULAERE
HYPERPLASIEN.........................................................................................
57
4.2.1.2 HUMANE KONTROLLGEWEBEPROBEN
.....................................................................................
58
4.2.1.2.1 FOLLIKULAERE
LYMPHOME............................................................................................
58
4.2.1.2.2 FOLLIKULAERE
HYPERPLASIEN.........................................................................................
58
4.3
IMMUNHISTOLOGIE........................................................................................................................
59
4.3.1 IMMUNHISTOLOGISCHER NACHWEIS VON CD45R UND CD3
....................................................
59
4.3.2 NACHWEIS DER FELV-ANTIGENE GP70 UND
P27....................................................................59
4.3.3 NACHWEIS DES
BCL-2-PROTEINS..............................................................................................60
4.3.3.1 FELINE
GEWEBEPROBEN......................................................................................................
60
4.3.3.2 HUMANE GEWEBEPROBEN (VERGLEICHENDE
KONTROLLGEWEBEPROBEN)...............................61
4.3.3.3 BCL-2/CD45R- UND BCL-2/CD3-DOPPELMARKIERUNGEN
..................................................
61
4.4 KLINISCHE
DATEN...........................................................................................................................62
4.4.1
LYMPHKNOTENVERGROESSERUNGEN.............................................................................................
62
4.4.1.1 LYMPHKNOTENVERGROESSERUNGEN PRAE OPERATIONEM (PRAE
OP.).........................................62
4.4.1.2 LYMPHKNOTENVERGROESSERUNGEN POST OPERATIONEM (POST OP.)/
IM WEITEREN VERLAUF DER ERKRANKUNG
...............................................................................
63
4.4.2 DURCHGEFUHRTE
THERAPIEMASSNAHMEN..................................................................................64
4.4.3 UEBERLEBENSZEITEN DER KATZEN MIT FOLLIKULAEREN
LYMPHOMEN.............................................64
4.4.3.1 UEBERLEBENSZEITEN DER TIERE UNTER BERUECKSICHTIGUNG DES
TUMORGRADES
.......................
64
4.4.3.2 UEBERLEBENSZEITEN DER TIERE UNTER BERUECKSICHTIGUNG DER THERAPIE
..............................
66
4.4.3.3 UEBERLEBENSZEITEN DER TIERE UNTER BERUECKSICHTIGUNG WEITERER
LYMPHKNOTENVERGROESSERUNGEN POST OP./
IM VERLAUF DER ERKRANKUNG BIS ZUM TODESZEITPUNKT
......................................................
67
4.4.3.4 INTERPRETATIONEN DER ERGEBNISSE DER STATISTISCHEN
BERECHNUNGEN.................................68
4.4.4 ZUSAETZLICH BESTEHENDE
ERKRANKUNGEN.................................................................................68
4.5
KLONALITAETSDIAGNOSTIK................................................................................................................
69
4.5.1
DNS-KONZENTRATIONEN..........................................................................................................
69
4.5.2 KONTROLLE DER DNS-AMPLIFIKATION UND VERDUENNUNG DER PCR-PRODUKTE
FUER DIE
KAPILLARELEKTROPHORESE........................................................................................................69
4.5.3 ERGEBNISSE DER KAPILLARELEKTROPHORESE
..............................................................................
71
4.5.4 ABBILDUNGSBEISPIELE ZUR
KAPILLARELEKTROPHORESE...............................................................72
4.5.4.1 MONOKLONALE
PROBE..........................................................................................................73
4.5.4.2 PSEUDOOLIGOKLONALE
PROBE..............................................................................................
74
4.5.4.3 POLYKLONALE
PROBE.............................................................................................................
75
4.5.5 DNS-QUALITAET DER
PROBEN...................................................................................................
75
4.5.6 UEBERPRUEFUNG DER AMPLIFIZIERBARKEIT DER DNS
ANHAND DES 100 BP GROSSEN FRAGMENTES
..............................................................................
76
4.5.6.1 UEBERPRUEFUNG DER AMPLIFIZIERBARKEIT DER DNS
ANHAND DES 100 BP GROSSEN FRAGMENTES IM FALLE DER NEUISOLIERTEN
DNS-PROBEN..........78
4.5.7 VERWEILDAUER DER PROBEN IN 10%IGEM FORMALIN BIS ZUR WEITEREN
PROZESSIERUNG..........78
5 D ISK
USSION.........................................................................................................................................80
5.1 ZUR UNTERSUCHUNG VORLIEGENDE
GEWEBEPROBEN....................................................................80
5.2 HISTOLOGIE DER FOLLIKULAEREN
LYMPHOME...................................................................................81
5.2.1 FEIINE
GEWEBEPROBEN..........................................................................................................81
5.2.2 HUMANE
KONTROLLGEWEBEPROBEN.........................................................................................83
5.3 IMMUNHISTOLOGIE
....
.
...................................................................................................................83
5.3.1 IMMUNHISTOLOGISCHER NACHWEIS DES BCL-2-PROTEINS
.........................................................
83
5.3.2 NACHWEIS DER FELV-ANTIGENE GP70 UND
P27....................................................................88
5.4 FAZIT DER HISTOLOGISCHEN BEURTEILUNG UND DER BCL-2-IMMUNHISTOLOGIE
..............................
88
5.5 KLINISCHE
DATEN...........................................................................................................................88
5.5.1 ALTER, RASSE UND GESCHLECHT DER
TIERE.............................................................................
88
5.5.2
UEBERLEBENSZEITEN................................................................................................................89
5.5.2.1 EINFLUSS DES
TUMORGRADES..............................................................................................
89
5.5.2.2 EINFLUSS VON
LYMPHKNOTENVERGROESSERUNGEN.................................................................90
5.5.2.2.1 WEITERE VERGROESSERUNGEN POST OP./IM WEITEREN VERLAUF DER
ERKRANKUNG
.............
91
5.5.2.2.2 TIERE OHNE WEITERE
LYMPHKNOTENVERGROESSERUNGEN.................................................93
5.5.2.3 EINFLUSS DER THERAPIEMASSNAHMEN
.................................................................................
94
5.5.3 FAZIT AUS DEN KLINISCHEN DATEN ZU DEN
FAELLEN....................................................................96
5.6 EINFLUSS DER PROBENFIXIERUNG IN 10%IGEM FORMALIN
UND DER LAGERUNGSDAUER DES
FFPE-MATERIALS.......................................................................97
5.6.1 EINFLUSS AUF DIE DNS-QUALITAET DER PROBEN
FUER DEN EINSATZ IN DER
KLONALITAETSDIAGNOSTIK.....................................................................97
5.6.2 EINFLUSS AUF IMMUNHISTOLOGISCHE FAERBEMETHODEN
............................................................
98
5.6.3 FAZIT DES EINFLUSSES DER PROBENFIXIERUNG IN 10%IGEM FORMALIN
UND DER LAGERUNGSDAUER DES
FFPE-MATERIALS...................................................................99
5.7 KLONALITAETSDIAGNOSTIK IN B-ZELL-NEOPLASIEN
........................................................................
100
5.7.1 INTERPRETATION DER ERGEBNISSE AUS DER FRAGMENTANALYSE
.................................................
100
5.7.1.1 POLYKLONALE
ERGEBNISSE..................................................................................................100
5.7.1.2 MONOKLONALE
ERGEBNISSE................................................................................................100
5.7.1.3 PSEUDO(MONO/OLIGO)KLONALE ERGEBNISSE
.......................................................................
101
5.7.1.4 NEGATIVE
ERGEBNISSE.......................................................................................................
101
5.7.2
FAZIT....................................................................................................................................
102
5.8 ABSCHLIESSENDE BEURTEILUNG DER
ERGEBNISSE.........................................................................
103
6 ZUSAM M
ENFASSUNG.........................................................................................................................105
7
LITERATURVERZEICHNIS....................................................................................................................
109
8 A N HAN
G.............................................................................................................................................
127
8.1
ABBILDUNGEN...............................................................................................................................127
8.1.1 VERWENDETE LAENGENSTANDARDS IN DER GELELEKTROPHORESE
................................................
127
8.1.2 VERWENDETE GROESSENSTANDARDS IN DER
KAPILLARELEKTROPHORESE..........................................128
8.1.3 HISTOLOGISCHE
ABBILDUNGEN..............................................................................................
129
8.1.3.1 FELINE
GEWEBEPROBEN.....................................................................................................
129
8.1.3.1.1 HAEMATOXYLIN-EOSIN-FAERBUNG, CD45R- UND CD3-IMMUNHISTOLOGIE
..................
129
8.1.3.1.2 HAEMATOXYLIN-EOSIN-FAERBUNG, BCL-2
IMMUNHISTOLOGIE.......................................131
8.1.3.1.2.1 FOLLIKULAERE LYMPHOME DER
KATZE..................................................................131
8.1.3.1.2.2 FOLLIKULAERE HYPERPLASIE DER KATZE
(BEISPIEL)...............................................149
8.1.3.2 HUMANE
KONTROLLGEWEBEPROBEN....................................................................................
150
8.1.3.2.1 HAEMATOXYLIN-EOSIN-FAERBUNG, BCL-2 IMMUNHISTOLOGIE
........................................
150
8.1.3.2.1.1 FOLLIKULAERE LYMPHOME DES MENSCHEN
..........................................................
150
8.1.3.2.1.2 FOLLIKULAERE HYPERPLASIE DES MENSCHEN (BEISPIEL)
.......................................
152
8.2 TABELLEN
153
8.2.1 KLINISCHE DATEN ZU DEN
FAELLEN..........................................................................................
153
8.3 ZUSAETZLICH DURCHGEFUEHRTE SONDERFAERBE- UND
IMMUNHISTOLOGIEPROTOKOLLE.....................155
8.3.1
SONDERFAERBUNGEN.................................................................................................................155
8.3.1.1 MASSON-GOLDNER-T
RICHROMFAERBUNG...............................................................................155
8.3.1.2 PAS-REAKTION NACH
ARNOLD............................................................................................156
8.3.1.3
ZIEHL-NEELSEN-FAERBUNG...................................................................................................
156
8.3.2
IMMUNHISTOLOGIE.................................................................................................................157
8.3.2.1 NACHWEIS VON
VIMENTIN.................................................................................................157
8.3.2.2 NACHWEIS VON
ZYTOKERATIN..............................................................................................158
8.3.2.3 NACHWEIS VON MELAN A
..................................................................................................
158
8.4 ANSAETZE FUER LOESUNGEN, PUFFER UND MARKER
.........................................................................
159
8.4.1
IMMUNHISTOLOGIE.................................................................................................................159
8.4.2
SONDERFAERBUNGEN.................................................................................................................161
8.4.3
POLYMERASEKETTENREAKTION..................................................................................................162
8.4.4 HERSTELLUNG DER
AGAROSEGELE............................................................................................
162
8.4.5 HERSTELLUNG DER KAPILLARE FUER DEN ABI PRISM 310 GENETIC ANALYZER,
HERSTELLUNG DES 10 %IGEN
FORMALINS................................................................................163
8.5 HERKUNFTSNACHWEISE VON SEREN, ANTISEREN, PRIMERN, KITS UND
CHEMIKALIEN
...............
163
8.6 HERKUNFTSNACHWEISE FUER GERAETE UND EINMALARTIKEL
.........................................................
167
9 A
BKUERZUNGSVERZEICHNIS.............................................................................................................
174
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