Molekularer Aufbau der glomerulären Schlitzmembran: eine ultrastrukturelle Untersuchung
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| Format: | Thesis Book |
| Language: | German |
| Published: |
Giessen
VVB Laufersweiler Verlag
[2019]
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| Edition: | 1. Auflage |
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| adam_text | Aus „Institut für Veterinär-Anatomie, -Histologie und Embryologie
Betreuer: Prof Carsten Staszyk
und
„Klinik für Innere Medizin IV der Universität Freiburg“
Betreuer: Prof Tobias Huber
Molekularer Aufbau der glomerulären Schlitzmembran
- eine ultrastrukturelle Untersuchung
INAUGURAL-DISSERTATION
zur Erlangung des Grades eines
Dr med vet
beim Fachbereich Veterinärmedizin
der Justus-Liebig-Universität Gießen
eingereicht von
Lena Kristin Schwab
Tierärztin aus Böblingen
Gießen 2018
Inhaltsverzeichnis
1 Einleitung - die Nieren
1 1 Der glomeruläre Filter 2
12 Glomeruläre Schlitzmembran 3
121 Podozyt 6
122 Nephrin, Nephl und Podocin 7
123 Neue Kandidaten des Schlitzmembran-Proteinkomplexes 9
124 Podozytopathien 11
2 Zielsetzung der vorliegenden Arbeit 12
3 Material und Methoden 13
3 1 Verbrauchsmaterial 13
3 2 Chemikalien 15
3 3 Lösungen 18
3 4 Reagenzien und Analysekits 20
3 5 Antikörper 20
3 6 Medikamente 22
3 7 Geräte und Software 22
3 8 Versuchstiere 25
381 Versuchstierhaltung 25
382 Medikamentenapplikation 26
383 Verwendete Mausmodelle 26
384 Podozyten-spezifische, induzierbare Nphsl -Knockout-Maus
(Nphs1nox/nox*Nefta8rtTA* TetOCre) 27
385 Podozyten-spezifische, induzierbare Nphs2-Knockout-Maus
(Nphs2M“*Nefta8rtTA* TetOCre) 28
386 Podozyten-spezifische, induzierbare Nephl-Knockout-Maus
oq
(Neph1floxfflox*Nefta8rtTA* TetOCre)
30
3 9 Präparation und Fixation des Gewebes
3n
3 10 Ultrastrukturelle Untersuchung
IV
3 10 1 Pre-embedding
3 10 2 SOS-FRL (SOS-digested Freeze-Fracture Replica-Labeling)
3 10 3 Immunfluoreszenz-Färbung und Mikroskopie mit ApoTome
3 11 Proteinbiochemie
3 11 1 Herstellung von Gewebelysaten
3 11 2 Bestimmung der Proteinkonzentration (BCA-Assay)
3 11 3 SDS-Gelelektrophorese und Immunoblot (Western Blot)
3 12 Datenanalyse 42
4 Ergebnisse 43
4 1 Verwendung von SOS-digested Freeze-Fracture Replicas in der Nierenforschung 43
4 2 Qualitative und quantitative Aussage über die Lokalisation von Nephrin durch Pre-
46
embedding und SDS-FRL
4 3 Quantitative Aussage über die Lokalisation von Nephl durch SD ^
4 4 Quantitative Aussage über die Lokalisation von Podocin durc
57
4 5 Doppelfärbung von Nephrin und Nephl zur Lokalisation
61
4 6 Knock-Out (KO) als Negativkontrolle
4 7 Testung von neuen Kandidaten im Western Blot und in der Imm
, 68
4 8 Testung von MerTK als neuen Kandidaten in der SDS-FRL Met o ^
5 Diskussion
75
6 Zusammenfassung ^
7 Summary
I Literaturverzeichnis
IV
Abbildungsverzeichnis
VII
^
Danksagung
|
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