"Einfluss des Polymorphismus A270S auf die Transporteigenschaften des humanen Organischen Kationentransporters 2 (hOCT2)":
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2019
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| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
.............................................................................................................
1
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
...................................................................................................
4
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
....................................................................................................
7
1
EINLEITUNG
.................................................................................................................
8
1.1
PROXIMALER
TUBULUS
DER
NIERE
............................................................................
8
1.2
ORGANISCHE
KATIONENTRANSPORTER
........................................................................
9
1.2.1
POLYMORPHISMEN
DES
HOCT2
....................................................................
17
1.3
CISPLATIN
..........................................................................................................
20
1.3.1
CISPLATIN-NEPHROTOXIZITAET
.........................................................................
23
1.3.2
CISPLATIN-NEPHROTOXIZITAET
UND
DER
POLYMORPHISMUS
A270S
.....................
24
1.4
FRAGESTELLUNG
...................................................................................................
25
2
MATERIAL
UND
METHODEN
..........................................................................................
27
2.1
ZELLEN
..............................................................................................................
27
2.1.1
KLONIERUNG
DER
A270S-HOCT2-ZELLEN
.....................................................
27
2.1.2
ZELLKULTUR
.................................................................................................
28
2.2
FLUORESZENZMESSUNGEN
-
MIKROFLUOROMETRIE
..................................................
29
2.2.1
KINETIK
DER
ASP
+
-AUFNAHME
....................................................................
31
2.2.2
HEMMVERSUCHE
HOCT2
-
IC50-BESTIMMUNG
............................................
32
2.2.3
REGULATION
HOCT2
...................................................................................
32
2.3
PROTEINBESTIMMUNG
NACH
BRADFORD
..................................................................
34
2.4
SEQUENZIERUNG
UND
GDNA-ISOLIERUNG
.............................................................
34
2.4.1
PCR
..........................................................................................................
34
2.4.2
SANGER-SEQUENZIERUNG..............................................................................
35
2.4.3
DURCHFUEHRUNG
..........................................................................................
35
1
INHALTSVERZEICHNIS
2.5
MTT-TEST
........................................................................................................
37
2.6
IMMUNFLUORESZENZ
MIKROSKOPIE
......................................................................
38
2.7
BIOTINYLIERUNG
DER
OBERFLAECHENPROTEINE
..........................................................
39
2.7.1
BIOTINYLIERUNG
...........................................................................................
39
2.7.2
WESTERN
BLOT
............................................................................................
40
2.8
ICP-MS-MESSUNG
DER
INTRAZELLULAEREN
CISPLATINMENGE
....................................
42
2.9
MATERIAL
...........................................................................................................
43
2.9.1
GERAETE/SOFTWARE
.......................................................................................
43
2.9.2
VERBRAUCHSMATERIALIEN.............................................................................
44
2.10
CHEMIKALIEN
....................................................................................................
45
2.10.1
PUFFER
UND
LOESUNGEN
...............................................................................
45
2.10.2
GEBRAUCHSFERTIGE
CHEMIKALIEN,
KITS,
ANTIKOERPER
......................................
47
2.11
STATISTIK
...........................................................................................................
48
3
ERGEBNISSE
..............................................................................................................
49
3.1
SEQUENZIERUNG
DES
HOCT2-GENS
....................................................................
49
3.2
MESSUNG
DER
TRANSPORTERFUNKTION
DES
HOCT2
................................................
49
3.2.1
KINETIK
DER
ASP
+
-AUFNAHME
....................................................................
49
3.2.2
KOMPETITIVE
HEMMUNG
DER
ASP
+
-AUFNAHME
..........................................
51
3.2.3
REGULATION
DES
HOCT2
.............................................................................
65
3.3
MTT-TEST
........................................................................................................
69
3.4
IMMUNFLUORESZENZ
..........................................................................................
70
3.5
BESTIMMUNG
DER
OBERFLAECHENPROTEINE
.............................................................
71
3.6
ICP-MS-MESSUNG
DER
INTRAZELLULAEREN
CISPLATIN-KONZENTRATION
......................
74
4
DISKUSSION
..............................................................................................................
75
4.1
MESSUNG
DER
TRANSPORTERFUNKTION
DES
HOCT2
.................................................
76
4.1.1
KINETIK
DER
ASP
+
-AUFNAHME
.....................................................................
76
2
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
4.1.2
KOMPETITIVE
HEMMUNG
DER
ASP
+
-AUFNAHME
...........................................
79
4.1.3
REGULATION
DES
HOCT2
.............................................................................
83
4.2
MTT-TEST
........................................................................................................
84
4.3
IMMUNFLUORESZENZ
..........................................................................................
85
4.4
BESTIMMUNG
DER
OBERFLAECHENPROTEINE
.............................................................
86
4.5
ICP-MS-MESSUNG
DER
INTRAZELLULAEREN
CISPLATIN-KONZENTRATION
......................
87
4.6
FAZIT
UND
AUSBLICK
..........................................................................................
89
5
LITERATURVERZEICHNIS................................................................................................
92
6
LEBENSLAUF
............................................................................................................
108
7
DANKSAGUNG
..........................................................................................................
109
3
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