Elektrophysiologische Untersuchungen lichtreaktiver Natriumkanäle:
Gespeichert in:
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Veröffentlicht: |
Jena
[2018?]
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adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS |
1 ZUSAMMENFASSUNG
2 EINLEITUNG 3
2.1 SPANNUNGSABHAENGIGE N ATRIUM
KANAELE................................................................ 3
2.1.1 BEDEUTUNG SPANNUNGSABHAENGIGER N ATRIUM KANAELE
....................
3
2.1.2 STRUKTUR DER UNTEREINHEITEN SPANNUNGSABHAENGIGER NATRIUMKANAELE 3
2.1.3 SCHALT VERHALTEN SPANNUNGSABHAENGIGER N A TRIU M K A N AE LE
..................... 4
2.1.4 IONENLEITFAEHIGKEIT UND SELEKTIVITAETSFILTER DER A-UNTEREINHEIT
.... 7
2.1.5 NOMENKLATUR UND EINTEILUNG DER NATRIUMKANALUNTEREINHEITEN . . . 7
2.1.6 TOXINSENSITIVITAET DER CC-U NTEREINHEITEN
....................................
8
2.2
CHANNELRHODOPSIN-2............................................................................................
10
2.2.1 BEDEUTUNG VON C HANNELRHODOPSIN-2
..........................................
10
2.2.2 STRUKTUR UND IONENLEITFAEHIGKEIT VON CHANNELRHODOPSIN-2
.............
11
2.2.3 SCHALTVERHALTEN VON C HANNELRHODOPSIN-2
.................................
12
2.2.4 DIE T159C M UTANTE VON
CHANNELRHODOPSIN-2..................................... 14
3 ZIELSETZUNG DER ARBEIT 15
4 MATERIAL UND METHODEN 17
4.1 EXPRESSION IN XENOPUS LAEVIS OOZYTEN
.........................................................
17
4.1.1 XENOPUS LAEVIS OOZYTEN ALS HETEROLOGES EXPRESSIONSSYTEM
..............
17
4.1.2 HERKUNFT UND PRAEPARATION DER XENOPUS LAEVIS O O Z Y TE N
...................
17
4.1.3 HERSTELLUNG DER C R N A
................................................................. 18
4.1.4 INJEKTION DER XENOPUS LAEVIS O O Z Y TEN
................................................ 18
4.2 MESSUNG MITTELS ZWEI-MIKROELEKTRODEN-SPANNUNGSKLEMME
......................
19
4.2.1 DIE
ZWEI-MIKROELEKTRODEN-SPANNUNGSKLEMME........................... 19
4.2.2 HERSTELLUNG DER M ESSELEK TRO D EN
.........................................................
19
4.2.3 VERSUCHSAUFBAU UND -D U RC H FUE H RU N G
...................................................
20
4.2.4 MESSSOFTWARE UND PULSPROTOKOLLE
......................................................
21
4.3 EXPRESSION IN H E K 293-Z ELLEN
.........................................................................
24
4.3.1 HEK293-ZELLEN ALS
EXPRESSIONSSYSTEM........................................ 24
4.3.2 ZELLKULTUR UND T RA N S FE K TIO N
........................................................ 25
4.4 MESSUNGEN MITTELS
GANZZELL-PATCH-CLAMP-TECHNIK..........................: . . . 26
4.4.1 DIE PATCH-C LAM P-T
ECHNIK........................................................... 26
4.4.2 HERSTELLUNG DER E
LEKTRODEN...................................................................
26
4.4.3 VERSUCHSAUFBAU UND -D U RC H FUE H RU N G
...................................................
27
4.4.4 VERWENDETE SOFT- UND H A RD W A RE
.................................................
27
4.5 LASER-SCANNING-M
IKROSKOPIE.............................................................................
28
4.6 S TA TIS TIK
................................................................................................................
28
4.7 VERWENDETE P LA S M ID E
.........................................................................................
28
4.8 VERWENDETE L
OESUNGEN.........................................................................................
31
5 ERGEBNISSE 33
5.1 KOPPLUNG VON CHANNELRHODOPSIN-2 AN DIE A-UNTEREINHEIT DES SPANNUNGS
ABHAENGIGEN NATRIUMKANALS N A ^ L.5
................................................................... 33
5.1.1 KOPPLUNG AN DEN N-TERMINUS VON N A V L.5
..........................................
33
5.1.2 KOPPLUNG AN DEN C-TERMINUS VON N A ^ L.5
..........................................
35
5.2 KOPPLUNG VON CHANNELRHODOPSIN-2 AN DIE SSL-UNTEREINHEIT DES
SPANNUNGS
ABHAENGIGEN N ATRIUM
KANALS................................................................................
46
5.3 ETABLIERUNG EINES SETUPS ZUR MESSUNG DER LICHTREAKTION VON
CHANNELRHO
DOPSIN-2
................................................................................................................
54
5.4 SUBZELLULAERE LOKALISATION DER X- UND SSL-UNTEREINHEITEN IN
HEK293-ZELLEN 57
6
DISKUSSION 62
6.1 ALLGEMEINE B E TRA C H TU N G E N
................................................................................
62
6.2 KOPPLUNG VON CHANNELRHODOPSIN-2 AN DIE CC-UNTEREINHEIT DES
SPANNUNGS
ABHAENGIGEN N ATRIUM
KANALS................................................................................
63
6.3 KOPPLUNG VON CHANNELRHODOPSIN-2 AN DIE SSL-UNTEREINHEIT DES
SPANNUNGS
ABHAENGIGEN N ATRIUM
KANALS................................................................................
65
6.4 AUFBAU EINES MESSSTANDES ZUR OPTISCHEN ANREGUNG DER Z ELLEN
...................
66
6.5 KOEXPRESSION IN H EK
293-ZELLEN......................................................................
67
6.6 WEITERFUEHRENDE B ETRACHTUNGEN
.........................................................................
68
7 SCHLUSSFOLGERUNGEN 69
LITERATURVERZEICHNIS III
ANHANG X
|
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