Untersuchungen zur Rolle des Zytoskeletts und des zonulo-occludens-Proteins Cingulin bei der molekularen Pathogenese der autosomal-dominanten polyzystischen Nierenerkrankung:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Freiburg (Breisgau)
2016
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| Beschreibung: | 129 Seiten Illustrationen, Diagramme 30 cm |
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| adam_text | AUS DEM DEPARTMENT FUER INNERE MEDIZIN
KLINIK FUER INNERE MEDIZIN IV (SCHWERPUNKT NEPHROLOGIE)
DER ALBERT-LUDWIGS-UNIVERSITAET FREIBURG IM BREISGAU
AERZTLICHER DIREKTOR: UNIV. PROF. DR. GERD WALZ
UNTERSUCHUNGEN ZUR ROLLE DES ZYTOSKELETTS UND DES
ZONULO-OCCLUDENS-PROTEINS CLNGULLN BEI DER
MOLEKULAREN PATHOGENESE DER AUTOSOMAL-DOMINANTEN
POLYZYSTISCHEN NIERENERKRANKUNG
INAUGURALDISSERTATION ZUR ERLANGUNG DES MEDIZINISCHEN DOKTORGRADES DER
MEDIZINISCHEN FAKULTAET DER ALBERT-LUDWIGS-UNIVERSITAET FREIBURG IM
BREISGAU
VORGELEGT 2016
VON ANDREAS FREDERIK NOLD
GEBOREN IN TUEBINGEN
INHALTSVERZEICHNIS
ZUSAMMENFASSUNG 4
INHALTSVERZEICHNIS 5
ABBILDUNGSVERZEICHNIS 9
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 11
EINLEITUNG 13
DIE AUTOSOMAL-DOMINANTE POLYZYSTISCHE NIERENERKRANKUNG (ADPKD) 13
DAS PRIMAERE ZILIUM SPIELT BEI DER ENTSTEHUNG DER ADPKD EINE ZENTRALE
ROLLE 15
TRPP2 UND POLYCYSTIN-1 BILDEN EINEN HETEROMEREN REZEPTORKOMPLEX 16
STOERUNGEN DER EPITHELMORPHOLOGIE BEI DER ADPKD UND DIE ENTSTEHUNG VON
ZYSTEN 18
TRPP2 INTERAGIERT MIT KOMPONENTEN DES ZYTOSKELETTS 20
DAS ZONULA-OCCLUDENS-PROTE IN CINGULIN 23
ZIELSETZUNG DER ARBEIT 27
MATERIAL 28
LABORGERAETE 28
SONSTIGE LABORMATERIALIEN 30
LABORREAGENZIEN 31
LOESUNGEN UND PUFFER 33
ZELLKULTUR 36
TRANSFIZIERTE PLASMIDE 37
KITS 37
ENZYME 37
MARKIERUNGSSEQUENZEN 38
OLIGONUKLEOTIDE 38
REKOMBINANTE DNS-VEKTOREN 40
ANTIKOERPER/PHALLOTOXINE FUE R DIE IMMUNFLUORESZENZ 40
ANTIKOERPER FUE R DIE IMMUNPRAEZIPITATION 41
ANTIKOERPER FUE R DEN WESTERN BLOT 41
ENSEMBL-REFERENZGENOME 41
SOFTWARE 41
METHODEN 43
MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN 43
ALLGEMEINE ANMERKUNGEN 43
POLYMERASE KETTENREAKTION (PCR) 43
AGAROSE-GELELEKTROPHORESE 44
GELEXTRAKTION 45
DNS/RNS-KONZENTRATIONSMESSUNG 45
KLONIERUNG 45
RESTRIKTIONSVERDAU 46
LIGATION 46
TRANSFORMATION 47
ANSETZEN VON FLUESSIGKULTUREN 47
TRANSFEKTION/ TRANSDUKTION 48
DNS-PRAEPARATION 49
DNS-SEQUENZIERUNG 49
RNS-PRAEPARATION 49
REVERSE TRANSKRIPTASE-POLYMERASE-KETTENREAKTION (RT-PCR) 50
QUANTITATIVE ECHTZEIT-PCR (Q-PCR) 50
GEN-DELETION DURCH TALENE 52
PROTOKOLL: GEN-DELETION DURCH TALENE 53
1. TALEN-DESIGN 53
2. TALEN-KLONIERUNG 54
3. TRANSDUKTION DER TALENE IN ZIELZELLEN 55
4. IDENTIFIKATION VON KNOCKOUT-KLONEN 55
ZELLKULTUR 57
PASSAGIEREN VON ZELLEN 57
ZELLEN EINFDEREN 58
3D-ZELLKULTUR 58
PKD2-KNOCK-DOWN IN MDCK-ZELLEN MITTELS SHRNS 59
PROTEINBIOCHEMISCHE METHODEN 60
ZELLEN ERNTEN 60
ZELL-LYSE 60
IMMUNPRAEZIPITATION / CO-IMMUNPRAEZIPITATION 61
SDS-PAGE (NATRIUMDODECYLSULFAT-POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE) 62
NORMIERUNG AUF DIE ZEITZAHL FUE R DIE SDS-PAGE 64
WESTERN BLOT 64
PROTEINDETEKTION DURCH CHEMOLUMINESZENZ 65
QUANTIFIZIERUNG VON DETEKTIERTEN PROTEINEN 66
IMMUNFLUORESZENZ 66
VERBUENDETE AUSWERTUNG VON IMMUNFLUORESZENZPRAEPARATEN 67
INHIBITION DES PROTEASOMS M IT MG132 68
MIKROSKOPIEVERFAHREN 68
HELLFELDMIKROSKOPIE 68
PHASENKONTRASTMIKROSKOPIE 68
FLUORESZENZMIKROSKOPIE 69
KONFOKALMIKROSKOPIE 69
STATISTISCHE ANALYSEN 69
ERGEBNISSE 70
ETABLIERUNG VON VIER MLMCDS-PKDZ^-ZELLLINIEN 70
PKCFZ / -ZELLEN ENTWICKELN WENIGER ZILIEN 76
PKD2 / -ZELLEN ZEIGEN EINE GESTOERTE EPITHELMORPHOLOGIE 77
CINGULIN INTERAGIERT MITTRPPZ 81
CINGULIN KOLOKALISIERT MITTRPPZ 82
DIE HETEROLOGE EXPRESSION VON CINGULIN FUEHRT ZU VERMINDERTEM
ZILIENWACHSTUM 86
TRPP2 STABILISIERT CINGULIN 87
CINGULIN WIRD PROTEASOMAL DEGRADIERT 89
DIE MENGE AN CINGULIN NIMMT MIT DER KONFLUENZ DER ZELLEN ZU 90
ETABLIERUNG EINER MDCK- CINGULIN /+-LE N E 91
DISKUSSION 92
DIE ETABLIERUNG EINER MIMCDB-PKDZ / -ZELLLINIE 93
GENOM-EDITIERUNG DURCH TALENE - SPEZIFITAET UND EFFIZIENZ 93
DIE CHARAKTERISIERUNG DER MLMCD3-PKD2~/~-ZELLLINIE 95
CINGULIN - EIN NEUER INTERAKTIONSPARTNER VON TRPP2 100
WELCHE BEDEUTUNG HAT CINGULIN FUE R DIE ADPKD ? 100
CINGULIN - EIN PROTEIN DES PRIMAEREN ZILIUMS ? 102
DIE REDUKTION SOWOHL VON TRPP2 ALS AUCH VON CINGULIN BEEINFLUSST DIE
STRUKTUR DER ZONULA
OCCLUDENS 102
DIE INTERAKTION VON CINGULIN M IT MIKROTUBULI BEEINFLUSST DIE
EPITHELMORPHOLOGIE 103
FUEHRT DER RUECKGANG DER CINGULINMENGE ZU EINER GESTOERTEN ANREICHERUNG VON
SUBAPIKALEM AKTIN?
105
CINGULIN REGULIERT DIE RHOA-AKTIVITAET - EIN MOEGLICHER PATHOMECHANISMUS
BEI DER ADPKD ? 105
ABSCHLIESSENDE ANMERKUNGEN 109
LITERATURVERZEICHNIS 110
CURRICULUM VITAE 128
DANKSAGUNG 129
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