Holdings: Epigenetische Regulation der alpha-Synuclein Expression

Epigenetische Regulation der alpha-Synuclein Expression: Bedeutung von Alter, Geschlecht und Zelltyp

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Main Author:	Gosejacob, Linda (Author)
Format:	Thesis Book
Language:	German English
Published:	Bonn 2017
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adam_text	INHALTSVERZEICHNIS 1. ABKUERZUNGSVERZEICHNIS...................................................................................... 8 2. EINLEITUNG.............................................................................................................10 2.1 REGULATION DER GENEXPRESSION............................................................................10 2.1.1 EPIGENETIK............................................................................................................. 10 2.1.2 FUNKTION VON DNA-METHYLIERUNG......................................................................... 12 2.1.3 VERERBUNG VON METHYLIERUNGSMUSTERN................................................................13 2.1.4 METHYLIERUNG UND ALTER......................................................................................... 13 2.1.5 MIT DNA-METHYLIERUNG ASSOZIIERTE ERKRANKUNGEN..............................................15 2.1.6 METHODEN DER ANALYSE VON METHYLIERUNG...........................................................15 2.1.6.1 BISULFITBEHANDLUNG MIT DARAUF FOLGENDER SEQUENZIERUNG ................................... 16 2.1.6.1.1 KLASSISCHE SEQUENZIERUNG (GOLDSTANDARD) ...................................................... 17 2.1.6.1.2 PYROSEQUENZIERUNG............................................................................................... 17 2.2 SYNUCLEIN...............................................................................................................18 2.2.1 GESCHICHTE DER SYNUCLEINE..................................................................................18 2.2.2 AUFBAU UND FUNKTION VON SNCA......................................................................... 19 2.2.3 TOXIZITAET VON SNCA.............................................................................................. 20 2.2.4 SNCA UND MORBUS PARKINSON ............................................................................. 21 2.2.5 SNCA UND ANDERE NEURODEGENERATIVE ERKRANKUNGEN ...................................... 22 2.2.6 AUFBAU DES SNCA- GENS......................................................................................22 2.2.7 REGULATION.............................................................................................................23 2.3 VORARBEITEN........................................................................................................... 24 2.4 ZIELSETZUNG........................................................................................................... 25 3. MATERIAL UND METHODEN ..................................................................................... 27 3.1 MATERIAL................................................................................................................. 27 3.1.1 KITS.........................................................................................................................27 3.1.2 CHEMIKALIEN.......................................................................................................... 27 3.1.2.1 PCR-MATERIALIEN.................................................................................................... 27 3.1.2.2 H20 ......................................................................................................................... 28 3.1.2.3 PUFFER UND LOESUNGEN............................................................................................28 3.1.2.4 MEDIEN................................................................................................................... 29 3.1.2.5 MATERIALIEN FUER GELE UND AGARPLATTEN....................................................................29 3.1.2.6 ANTIBIOTIKA............................................................................................................... 29 3.1.2.7 SONSTIGE CHEMIKALIEN............................................................................................ 29 3.1.3 KOMPETENTE BAKTERIEN..........................................................................................29 3.1.4 SONSTIGE VERBRAUCHSMATERIALIEN ......................................................................... 29 3.1.5 GERAETE.................................................................................................................... 30 3.1.6 PIPETTEN..................................................................................................................30 3.1.7 EDV-PROGRAMME...................................................................................................30 3.1.8 BIOMATERIAL.............................................................................................................30 3.2 METHODEN................................................................................................................ 32 3.2.1 BISULFITBEHANDLUNG................................................................................................ 32 3.2.2 KLASSISCHE BISULFIT SEQUENZIERUNG...................................................................... 32 3.2.2.1 BISULFIT PCR........................................................................................................... 32 3.2.2.2 AUFTRENNUNG IM AGAROSEGEL UND GELEXTRAKTION ................................................... 33 3.2.2.3 KLONIERUNG DER DNA IN DEN VEKTOR PJET 1.2 ....................................................... 33 3.2.2.4 TRANSFEKTION IN E. COLI............................................................................................ 34 3.2.2.5 HERSTELLUNG VON LB-AMPICILLIN-PLATTEN UND MEDIUM............................................34 3.2.2.6 AUSPLATTIEREN DER E. COLI UND ANZUECHTEN VON KOLONIEN ........................................ 34 3.2.2.7 KOLONIE-PCR........................................................................................................... 34 3.2.2.8 PLASMIDPRAEPARATION................................................................................................ 36 3.2.2.9 SEQUENZIERUNG....................................................................................................... 36 3.2.3 PYROSEQUENZIERUNG...............................................................................................37 3.2.3.1 PCR......................................................................................................................... 37 3.2.3.2 SEQUENZIERUNG....................................................................................................... 38 3.2.4 STATISTISCHE ANALYSE..............................................................................................39 4. ERGEBNISSE............................................................................................................ 41 4.1 ALTERSABHAENGIGKEIT DES METHYLIERUNGSSTATUS VON SNCA - ERGEBNISSE DER KLASSISCHEN BISULFIT SEQUENZIERUNG .................................................................... 42 4.2 ALTERSABHAENGIGKEIT DES METHYLIERUNGSSTATUS VON SNCA - ERGEBNISSE DER PYROSEQUENZIERUNG.............................................................................................. 47 4.3 VERGLEICH DER ERGEBNISSE VON KLASSISCHER BISULFIT SEQUENZIERUNG UND PYROSEQUENZIERUNG .............................................................................................. 50 4.4 GESCHLECHTERVERGLEICH......................................................................................... 52 4.5 VERGLEICH DER METHYLIERUNG VON DNA AUS NEUN POSITIVEN UND NEUN NEGATIVEN ZELLEN.....................................................................................................................54 5. DISKUSSION........................................................................................................... 57 6. ZUSAMMENFASSUNG............................................................................................ 62 7. ANHANG................................................................................................................. 64 8. LITERATURVERZEICHNIS........................................................................................... 71 9. DANKSAGUNG........................................................................................................ 77 10. LEBENSLAUF........................................................................................................... 78
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