Nachweis von Mycobacterium avium ssp. paratuberculosis bei Rindern in unterschiedlichem Alter:
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Gießen, Lahn
VVB Laufersweiler Verlag
2017
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........................................................................................................................1
2
SCHRIFTTUM......................................................................................................................
3
2.1 DEFINITION UND GESCHICHTE DER PARATUBERKULOSE
.....................................................
3
2.2 TAXONOMIE UND EIGENSCHAFTEN VON MYCOBACTERIUM AVIUM SSP.
PARATUBERCULOSIS
(MAP)...........................................................................................3
2.3 EPIDEMIOLOGIE DER
PARATUBERKULOSE.........................................................................
5
2.4 PATHOGENESE DER
PARATUBERKULOSE............................................................................
7
2.5 SYMPTOMATIK UND VERLAUF DER PARATUBERKULOSE
......................................................
7
2.6 PATHOLOGISCHE VERAENDERUNGEN BEI DER
PARATUBERKULOSE..........................................8
2.7 WIRTSCHAFTLICHE BEDEUTUNG DER
PARATUBERKULOSE.................................................... 9
2.8 PARATUBERKULOSE UND MORBUS
CROHN........................................................................
9
2.9 DIAGNOSTIK DER
PARATUBERKULOSE..............................................................................10
2.9.1 DIREKTER
ERREGEMACHWEIS.......................................................................
11
2.9.1.1 MIKROSKOPISCHER
ERREGEMACHWEIS..........................................11
2.9.1.2 KULTURELLER ERREGEMACHWEIS
...................................................
12
2.9.1.3 MOLEKULARBIOLOGISCHER ERREGEMACHWEIS
...............................
14
2.9.2 INDIREKTER
ERREGEMACHWEIS.....................................................................
15
2.9.2.1 JOHNIN-HAUTTEST
........................................................................
16
2.9.2.2
INTERFERON-Y-TEST......................................................................
16
2.9.2.3 KOMPLEMENTBINDUNGSREAKTION
(KBR)....................................17
2.9.2.4 AGARGELIMMUNODIFFUSIONSTEST (AGIDT)
................................
17
2.9.2.5 ENZYME LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY (ELISA)..................17
2.92.6 DURCHFLUSSZYTOMETRIE-BASIERTER ANTIKOERPEMACHWEIS
...........
18
2.10 BEKAEMPFUNG UND PROPHYLAXE DER PARATUBERKULOSE
............................................
19
3 MATERIAL UND METHODEN
.....................................................................................
21
3.1
ARBEITSKONZEPT........................................................................................................
21
3.2 VERZEICHNIS DER VERWENDETEN MATERIALIEN
.............................................................
22
3.3.1 PROBENENTNAHME IN DEN EINZELNEN BETRIEBEN
........................................
24
3.3.2 AUFBEREITUNG UND ARCHIVIERUNG DER SERUMPROBEN
...............................
27
3.3.3 PORTIONIERUNG UND ARCHIVIERUNG DER KOTPROBEN
...................................
27
3.4.1 DEKONTAMINATION DER RINDERKOTPROBEN ZUR KULTURELLEN ANZUECHTUNG
VON MYCOBACTERIUM AVIUM SSP.
PARATUBERCULOSIS (MAP)
...................
27
3.4.2 ANZUECHTUNG VON MAP AUS DEN RINDERKOTPROBEN AUF HERROLD S-
EGG-YOLK-SCHRAEGAGAR MIT MYCOBACTIN J UND ANV.
..............................
28
3.4.3 IDENTIFIZIERUNG VON VERDAECHTIGEN KOLONIEN ALS MYCOBACTERIUM
AVIUM SSP.
PARATUBERCULOSIS...................................................................
30
3.5.1 EXTRAKTIONSVERFAHREN FUER GENOMISCHE MAP-DNS AUS DEN
RINDERKOTPROBEN......................................................................................
32
3.5.2 AUFBEREITUNGSKONTROLLEN BEIDER DNS-ISOLIERUNG
.................................
34
3.5.3 MOLEKULARBIOLOGISCHER NACHWEIS VON MYCOBACTERIUM AVIUM SSP.
PARATUBERCULOSIS MIT HILFE DER REAL-TIME-POLYMERASE-
KETTENREAKTI
ON..........................................................................................
34
3.5.4 ANGABEN ZU DEN VERWENDETEN PRIMERN UND SONDEN
.............................
35
3.5.5
DNS-AMPLIFIKATIONSTECHNIK...................................................................
36
3.5.6
PCR-KONTROLLEN.......................................................................................
37
3.5.7 AUSWERTUNG DER
PCR-ERGEBNISSE...........................................................37
3.6 NACHWEIS VON MAP-SPEZIFISCHEN ANTIKOERPERN MIT HILFE DES
POURQUIER-ELISA...................................................................................................38
3.7 WEITERE UNTERSUCHUNGEN AN ZWEI KUEHEN, WELCHE IM KAELBERALTER ALS
MAP-POSITIV EINGESTUFT WORDEN
WAREN..................................................................
39
3.7.1 ENTNAHME VON ORGANPROBEN UND DARMINHALT AM SCHLACHTHOF.
............
40
3.7.2 DEKONTAMINATION UND HOMOGENISATION DER ORGANPROBEN BOVINEN
URSPRUNGS ZUR KULTURELLEN ANTUECHTUNG VON MYCOBACTERIUM AVIUM
SSP.
PARATUBERCULOSIS
(MAP)..................................................................41
3.7.3 ANZUECHTUNG VON MAP AUS DEN ORGANPROBEN VON ZWEI KUEHEN AUF
HERROLD S-EGG-YOLK-SCHRAEGAGAR MIT MYCOBACTIN J UND ANV.
.............
42
3.7.4 ANZUECHTUNG VON MAP AUS DEN ORGANPROBEN VON ZWEI KUEHEN IN
MYCOBACTERIA GROWTH INDICATOR TUBES MIT OADC, PANTA UND
MYCOBACTIN
J............................................................................................
42
3.7.5 EXTRAKTIONSVERFAHREN FUER GENOMISCHE MAP-DNS AUS DEN MGIT-
FLUESSIGNAEHRMEDIEN...................................................................................45
3.7.6 EXTRAKTIONSVERFAHREN FUER GENOMISCHE MAP-DNS AUS GEWEBE
..........
46
4
ERGEBNISSE..................................................................................................................
48
4.1 ERGEBNISSE DER KLINISCHEN ALLGEMEINUNTERSUCHUNG SOWIE DER
GROBSINNLICHEN KOTBEURTEILUNG
..............................................................................
48
4.2 ERGEBNISSE DER KULTURELLEN UNTERSUCHUNG AUF
MAP.............................................51
4.3 ERGEBNISSE DES MOLEKULARBIOLOGISCHEN NACHWEISES VON MAP MIT HILFE
DER TRIPLEX REAL-TIME-POLYMERASEKETTENREAKTION
...............................................
53
4.4 ERGEBNISSE DES NACHWEISES VON MAP-SPEZIFISCHEN ANTIKOERPERN IM SERUM
MIT HILFE DES
POURQUIER-ELISA...........................................................................
55
4.5.1 ERGEBNISSE DER ANZUECHTUNG VON MAP AUS DEN ORGANMATERIAL,
DARMINHALT UND KOTPROBEN VON ZWEI GESCHLACHTETEN KUEHEN AUF
HERROLD S-EGG-VOLK-SCHRAEGAGAR MIT MYCOBACTIN J UND ANV............56
4.5.2 ERGEBNISSE DER ANZUECHTUNG VON MAP AUS DEN ORGANPROBEN VON
ZWEI GESCHLACHTETEN KUEHEN IN MYCOBACTERIA GROWTH INDICATOR
TUBES MIT OADC, PANTA UND MYCOBACTIN J
......................................
57
4.5.3 ERGEBNISSE DES MOLEKULARBIOLOGISCHEN NACHWEISES VON MAP MIT
HILFE DER TRIPLEX REAL-TIME-POLYMERASEKETTENREAKTION IN
ORGANMATERIAL, DARMINHALT UND KOTPROBEN VON ZWEI
GESCHLACHTETEN
KUEHEN.............................................................................
58
3.5.4 ERGEBNISSE DER SEROLOGISCHEN UNTERSUCHUNG MITTELS POURQUIER-
ELISA BEI DEN ZWEI GESCHLACHTETEN
KUEHEN...........................................59
4.6 ZUSAMMENFASSUNG DER ERGEBNISSE.
....................................................................
59
5
DISKUSSION...................................................................................................................62
5.1 ZUR KLINISCHEN ALLGEMEINUNTERSUCHUNG UND DER GROBSINNLICHEN
KOTBEURTEILUNG........................................................................................................
62
5.2 ZUR KULTURELLEN UNTERSUCHUNG AUF
MAP................................................................64
5.3 ZUM MOLEKULARBIOLOGISCHEN NACHWEIS VON MAP MIT HILFE DER
TRIPLEX
REAL-TIME-POLYMERASEKETTENREAKTION.......................................................
65
5.4 ZUM NACHWEIS VON MAP-SPEZIFISCHEN ANTIKOERPERN IM SERUM
MIT HILFE DES
POURQUIER-ELISA...........................................................................
67
5.5 ZUR ANZUECHTUNG VON MAP AUS DEN ORGANMATERIAL, DARMINHALT
UND KOTPROBEN VON ZWEI GESCHLACHTETEN KUEHEN AUF HERROLD S-EGG-VOLK-
SCHRAEGAGAR MIT MYCOBACTIN J UND ANV.
..............................................................
68
5.6 ZUR ANZUECHTUNG VON MAP AUS DEN ORGANPROBEN VON ZWEI
GESCHLACHTETEN KUEHEN IN MYCOBACTERIA GROWTH INDICATOR TUBES MIT
OADC, PANTA UND MYCOBACTIN
J........................................................................69
5.7 ZUM MOLEKULARBIOLOGISCHEN NACHWEISES VON MAP MIT HILFE DER
TRIPLEX REAL-TIME-POLYMERASEKETTENREAKTION IN ORGANMATERIAL, DARMINHALT
UND KOTPROBEN VON ZWEI GESCHLACHTETEN
KUEHEN..................................................70
5.8 ZUR SEROLOGISCHEN UNTERSUCHUNG DER ZWEI GESCHLACHTETEN KUEHE MITTELS
POURQUIER-ELISA.........................................................................................................
71
5.9
SCHLUSSFOLGERUNGEN..............................................................................................
71
6
ZUSAMMENFASSUNG.....................................................................................................
73
7
SUMMARY...........................................................................................................................
76
8
LITERATURVERZEICHNIS............................................................................................78
9 ANHANG
............................................................................................................................
100
10
DANKSAGUNG.............................................................................................................
102
11
SELBSTSTAENDIGKEITSERKLAERUNG.................................................................103
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